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不同发育阶段豚鼠耳蜗外侧壁中mdr_1mRNA的表达及其意义
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作者 张学渊 周亚光 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2005年第1期57-59,i002,共4页
目的 检测多药耐药基因 1(multidrugresistance 1,mdr1)在不同发育阶段豚鼠耳蜗外侧壁细胞中的表达情况 ,并讨论其在血迷路屏障防护功能中的作用。方法 选取健康白色红目豚鼠 30只 ,其中生后 1~ 2周、3周、4周龄豚鼠各 10只 ,利用原... 目的 检测多药耐药基因 1(multidrugresistance 1,mdr1)在不同发育阶段豚鼠耳蜗外侧壁细胞中的表达情况 ,并讨论其在血迷路屏障防护功能中的作用。方法 选取健康白色红目豚鼠 30只 ,其中生后 1~ 2周、3周、4周龄豚鼠各 10只 ,利用原位杂交技术分别检测其耳蜗外侧壁中mdr1mRNA的表达 ,采用MPLAS - 5 0 0计算机图像处理系统进行图像分析。结果 豚鼠耳蜗外侧壁中mdr1mRNA主要在微血管内皮细胞中表达 ;不同发育阶段豚鼠耳蜗外侧壁中的表达强度存在差异 :3周龄与 4周龄豚鼠mdr1mRNA表达强度无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,但两者较 1~ 2周龄豚鼠mdr1mRNA表达强 ,并有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 mdr1mRNA存在于正常耳蜗外侧壁中 ,随着耳蜗外侧壁的发育其表达强度不同 ,可能是不同发育阶段血迷路屏障防护功能不同的机制之一。 展开更多
关键词 多药耐药基因1 耳蜗 外侧壁 外向运输
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豚鼠耳蜗外侧壁中MDR_1基因表达与内淋巴液中ADM积聚的关系
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作者 周亚光 张学渊 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2004年第3期185-187,T002,共4页
目的 探讨豚鼠耳蜗外侧壁中多药耐药基因1 (multidruginresistancegene,MDR1 基因 )表达与耳蜗内淋巴液中阿霉素 (adriamycin ,ADM)积聚浓度间的关系。方法 经静脉注射ADM 30mg kg 2 4小时后 ,利用RT -PCR技术半定量MDR1 mRNA ;采用... 目的 探讨豚鼠耳蜗外侧壁中多药耐药基因1 (multidruginresistancegene,MDR1 基因 )表达与耳蜗内淋巴液中阿霉素 (adriamycin ,ADM)积聚浓度间的关系。方法 经静脉注射ADM 30mg kg 2 4小时后 ,利用RT -PCR技术半定量MDR1 mRNA ;采用高效液相色谱法 (HPLC)检测内淋巴液中的ADM浓度。结果 ADM的积聚浓度与MD R1 mRNA的表达负相关 (rs=- 0 .90 1,P <0 .0 1) ,经曲线回归分析表明 ,呈二次曲线关系 (Y =182 .0 2 2 - 35 4 .79X +2 4 2 .877X2 ,Rsq =0 .815 )。结论 MDR1 基因在耳蜗外侧壁中的表达 ,可能与减少耳毒性药物在内淋巴液中的积聚 ,增强耳蜗自我保护功能有关。 展开更多
关键词 外侧壁 耳蜗 多药耐药基因1 阿霉素
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豚鼠耳蜗内淋巴液阿霉素含量高效液相色谱法测定方法的建立
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作者 周亚光 张学渊 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2005年第4期283-285,共3页
目的建立测定豚鼠耳蜗内淋巴液中阿霉素(adriamycin,ADM)含量的方法,为进一步探讨耳毒性物质在内耳中积聚浓度提供方法学基础。方法选取12只健康豚鼠,静脉注射ADM,24小时后快速处死动物,采用高效液相色谱法(highperformanceliquidchroma... 目的建立测定豚鼠耳蜗内淋巴液中阿霉素(adriamycin,ADM)含量的方法,为进一步探讨耳毒性物质在内耳中积聚浓度提供方法学基础。方法选取12只健康豚鼠,静脉注射ADM,24小时后快速处死动物,采用高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)检测豚鼠耳蜗内淋巴液阿霉素含量。结果豚鼠耳蜗内淋巴液中ADM浓度在2.56~1398.00ngml范围内线性关系良好,线性相关系数r=0.999(n=10);内淋巴液中ADM的平均方法回收率为96.3%,相对标准差(relativestandarddeviation,RSD)为2.61%;最低检测限为:1.9ngml。结论HPLC法灵敏度高,可以准确地测出豚鼠耳蜗内淋巴液中ADM的含量,适用于静脉给药后ADM在耳蜗内淋巴液中积聚浓度的检测。 展开更多
关键词 高效液相色谱法 阿霉素 耳蜗 内淋巴液
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hTERT基因转染显著延长人骨髓间充质干细胞增殖能力的实验研究 被引量:2
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作者 石东文 代飞 +5 位作者 池君 陈希炜 贺伟峰 胡晓红 罗高兴 吴军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第16期1562-1565,共4页
目的构建含有端粒酶逆转录酶(human telom erase reverse transcriptase,hTERT)基因的逆转录病毒,感染人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs),观察外源性hTERT基因在hMSCs中的表达及其对hMSCs端粒酶活性和细胞增殖能... 目的构建含有端粒酶逆转录酶(human telom erase reverse transcriptase,hTERT)基因的逆转录病毒,感染人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs),观察外源性hTERT基因在hMSCs中的表达及其对hMSCs端粒酶活性和细胞增殖能力的影响。方法构建pLXSN-hTERT质粒,BamHⅠ酶切和测序鉴定,转染PT67包装细胞,G418抗性筛选获得产病毒阳性细胞克隆。用产病毒细胞珠和hMSCs共培养的方法转染hMSCs,G418抗性筛选。以未转染hM-SCs作为对照,用TRAPEZE方法检测hTERT基因转染hMSCs的端粒酶活性,用流式细胞仪检测细胞周期,并观察转染hMSCs的生长情况。结果成功构建了hTERT基因重组pLXSN-hTERT质粒,建立了产病毒pLXSN-hTER-PT67细胞株。获得了hTERT-hMSCs细胞群,与未转染的hMSCs相比,hTERT-hMSCs细胞群端粒酶活性明显增强,hTERT蛋白阳性表达细胞百分率提高,细胞的生命周期显著延长,细胞传代至46代,形态无明显改变,生长良好。结论逆转录病毒载体介导的hTERT基因转染可增强hMSCs的端粒酶活性,提高hMSCs的增殖能力。 展开更多
关键词 HTERT 逆转录病毒 端粒酶 人骨髓间充质干细胞
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腺病毒介导小鼠神经生长因子基因在骨髓间充质干细胞中的表达 被引量:2
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作者 池君 宋武战 张学渊 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2007年第6期469-471,I0002,共4页
目的构建具有生物学活性的小鼠神经生长因子(nerve growth factor,βNGF)基因重组腺病毒表达载体,并研究其在骨髓间充质干细胞中的表达特性。方法利用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从小鼠颌下腺总mRNA中扩增βNGF全长cDNA片断,定向克隆... 目的构建具有生物学活性的小鼠神经生长因子(nerve growth factor,βNGF)基因重组腺病毒表达载体,并研究其在骨髓间充质干细胞中的表达特性。方法利用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从小鼠颌下腺总mRNA中扩增βNGF全长cDNA片断,定向克隆于携带巨细胞启动子(CMV)和标记蛋白-绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒穿梭质粒pAdtrack中;在细菌BJ5183中与缺陷型腺病毒基因组pAdeasy-1进行同源重组,构建pAdeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-mβNGF;在HEK293(人胚肾293细胞)细胞中包装成为有感染能力的、能表达βNGF和绿色荧光蛋白的重组腺病毒颗粒。用病毒感染原代培养的人骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem-cells,MSCs),荧光显微镜下观察病毒感染效率,免疫细胞化学法检测细胞中βNGF的蛋白表达,蛋白质免疫印迹法检测培养上清中NGF的分泌。结果成功获得小鼠βNGF的cDNA片断,经酶切鉴定证实重组腺病毒表达载体pAdeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-mβNGF构建成功。荧光显微镜下观测到感染病毒的细胞胞体发出明亮的绿色荧光,细胞中βNGF免疫染色阳性,培养上清中检测有NGF分泌。结论重组腺病毒表达载体能高效地将外源性目的基因βNGF导入骨髓间充质干细胞中,并能正确转录、翻译和分泌,为骨髓间充质干细胞在内耳基因干预的研究中奠定基础。 展开更多
关键词 神经生长因子 腺病毒 骨髓间充质干细胞 基因干预
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小鼠神经生长因子基因重组腺病毒的构建及其在基底膜上的表达 被引量:2
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作者 池君 张学渊 宋武战 《中华耳科学杂志》 CSCD 2007年第2期207-211,共5页
目的构建具有生物学活性的小鼠神经生长因子(nerveg rowth factor,βNGF)基因重组腺病毒表达载体,并研究其在耳蜗基底膜上的表达特性。方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)从小鼠颌下腺总mR-NA中扩增βNGF全长cDNA片断,定向克隆于携带... 目的构建具有生物学活性的小鼠神经生长因子(nerveg rowth factor,βNGF)基因重组腺病毒表达载体,并研究其在耳蜗基底膜上的表达特性。方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)从小鼠颌下腺总mR-NA中扩增βNGF全长cDNA片断,定向克隆于携带巨细胞启动子(CMV)和标记蛋白-绿色荧光蛋白(eGFP)的腺病毒穿梭质粒pAdtrack中;在细菌中与缺陷型腺病毒基因组pAdeasy-1进行同源重组,构建pAdeasy-1pAd-track-CMV-eGFP-mβNGF;在HEK293细胞中包装成为有感染能力的,能表达βNGF和绿色荧光蛋白的重组腺病毒颗粒。用病毒感染原代培养的耳蜗基底膜,激光共聚焦显微镜下观察病毒感染效率,RT-PCR法检测βNGF基因在基底膜上的转录表达,蛋白质免疫印迹法检测βNGF在基底膜上的蛋白表达。结果成功获得小鼠βNGF的cDNA片断,经酶切鉴定证实重组腺病毒表达载体pAdeasy-1pAdtrack-CMV-eGFP-mβNGF构建成功。激光共聚焦显微镜下观测到感染病毒的基底膜发出明亮的绿色荧光,分别在mRNA和蛋白质水平证实有外源性βNGF的表达。结论重组腺病毒表达载体能高效地将外源性目的基因βNGF导入体外培养的基底膜细胞中,并在基底膜中转录和翻译,为进一步研究腺病毒介导的βNGF对内耳各类细胞的保护作用奠定基础。 展开更多
关键词 β神经生长因子 腺病毒 基底膜 基因干预
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颈动脉鞘金属异物取出术1例 被引量:1
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作者 周亚光 任黎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1029-1029,1032,共2页
关键词 颈动脉鞘金属异物取出术 病例报告 CT检查 血管夹 血管破裂
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新生儿行为测听方法学的几个问题 被引量:1
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作者 池君 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2001年第4期246-248,共3页
关键词 新生儿 行为测定法 听力测定
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用声导抗议作盖莱试验
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作者 于克敏 任黎 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 1993年第1期50-50,共1页
关键词 声导抗议 盖莱试验 方法 结果
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