目的探讨异丙酚在血脑屏障氧糖剥夺(OGD)体外模型中对紧密连接蛋白ZO-1表达的影响及其机制。方法分离纯化Bal b/c小鼠的脑微血管内皮细胞进行体外培养,构建血脑屏障体外模型,并通过OGD处理模拟体内缺氧、缺血状态将细胞分为对照组、OGD...目的探讨异丙酚在血脑屏障氧糖剥夺(OGD)体外模型中对紧密连接蛋白ZO-1表达的影响及其机制。方法分离纯化Bal b/c小鼠的脑微血管内皮细胞进行体外培养,构建血脑屏障体外模型,并通过OGD处理模拟体内缺氧、缺血状态将细胞分为对照组、OGD损伤组、不同浓度(5、10、20、40μmol/L)异丙酚处理组及蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波酯(TPA)处理组。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测内皮细胞存活力,电阻仪检测内皮细胞阻抗(TEER)值,聚合酶链反应(PCR)和Western blot分别检测异丙酚对ZO-1 mRNA和蛋白表达的影响,PKC活性检测试剂盒测定PKC活性;通过加入PKC激活剂检测PKC在异丙酚调节ZO-1表达过程中的作用。结果 10、20、40μmol/L异丙酚可显著抑制OGD诱导的内皮细胞活力,TEER值降低和ZO-1表达水平下降(P<0.05);此外,10、20、40μmol/L异丙酚还可抑制OGD诱导的PKC激活(0.856±0.124、1.017±0.104、0.930±0.149 vs 0.595±0.112)。在PKC激活剂的作用下,异丙酚对ZO-1 mRNA和蛋白表达的上调作用均无显著影响(0.361±0.441 vs 0.344±0.023,P=0.403;0.169±0.011 vs 0.161±0.019,P=0.489)。结论异丙酚可通过抑制PKC信号通路上调血脑屏障OGD体外模型紧密连接蛋白ZO-1的表达。展开更多
文摘目的探讨异丙酚在血脑屏障氧糖剥夺(OGD)体外模型中对紧密连接蛋白ZO-1表达的影响及其机制。方法分离纯化Bal b/c小鼠的脑微血管内皮细胞进行体外培养,构建血脑屏障体外模型,并通过OGD处理模拟体内缺氧、缺血状态将细胞分为对照组、OGD损伤组、不同浓度(5、10、20、40μmol/L)异丙酚处理组及蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波酯(TPA)处理组。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测内皮细胞存活力,电阻仪检测内皮细胞阻抗(TEER)值,聚合酶链反应(PCR)和Western blot分别检测异丙酚对ZO-1 mRNA和蛋白表达的影响,PKC活性检测试剂盒测定PKC活性;通过加入PKC激活剂检测PKC在异丙酚调节ZO-1表达过程中的作用。结果 10、20、40μmol/L异丙酚可显著抑制OGD诱导的内皮细胞活力,TEER值降低和ZO-1表达水平下降(P<0.05);此外,10、20、40μmol/L异丙酚还可抑制OGD诱导的PKC激活(0.856±0.124、1.017±0.104、0.930±0.149 vs 0.595±0.112)。在PKC激活剂的作用下,异丙酚对ZO-1 mRNA和蛋白表达的上调作用均无显著影响(0.361±0.441 vs 0.344±0.023,P=0.403;0.169±0.011 vs 0.161±0.019,P=0.489)。结论异丙酚可通过抑制PKC信号通路上调血脑屏障OGD体外模型紧密连接蛋白ZO-1的表达。
