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侧脑室注射miR-7通过EGFR/STAT3途径抑制大鼠脑出血后脑损伤
被引量：
13
1
作者
钱红
胡柯
+5 位作者
谢明
武衡
李文军
武斌
满荣勇
聂萌
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期141-147,共7页
目的观察微小RNA-7(miR-7)对大鼠脑出血后脑损伤的影响,并探讨其分子机制。方法选取75只SD大鼠,以Ⅶ型胶原酶注入苍白球构建脑出血模型,随机分为对照组、miR-7激动剂(miR-7 agomir)组、miR-7激动剂对照(agomir control)组、miR-7拮抗剂(...
目的观察微小RNA-7(miR-7)对大鼠脑出血后脑损伤的影响,并探讨其分子机制。方法选取75只SD大鼠,以Ⅶ型胶原酶注入苍白球构建脑出血模型,随机分为对照组、miR-7激动剂(miR-7 agomir)组、miR-7激动剂对照(agomir control)组、miR-7拮抗剂(miR-7 antagomir)组和miR-7拮抗剂对照(antagomir control)组,每组15只。造模后第2天通过侧脑室分别注射10μL的生理盐水、miR-7 agomir、agomir control、miR-7 antagomir、antagomir control,造模后第7天进行神经功能评分,然后处死动物,取出脑组织,HE染色观察脑组织病理改变,干湿重法测定脑组织含水量,荧光实时定量PCR检测血肿周围脑组织中miR-7、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和表皮生长因子受体(EGFR)表达,Western blot法分析血肿周围脑组织中GFAP、EGFR、信号转导子和转录激活子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)水平。生物信息学预测miR-7与EGFR的靶向结合情况,构建野生型荧光素酶报告基因载体及相应的突变载体,与miR-7模拟物(mimic)共转染HEK293T细胞,检测荧光素酶活性。结果与对照组相比,miR-7 agomir明显增加血肿周围脑组织miR-7水平,减轻脑组织病理损害,减少神经功能评分和脑组织含水量,并降低血肿周围脑组织GFAP、EGFR表达水平及p-STAT3/STAT3比值;miR-7 antagomir的作用则相反。相应阴性对照物对上述指标无影响。生物信息学分析发现EGFR的3'-非翻译区存在miR-7结合位点,而且miR-7 mimic明显降低野生型EGFR荧光素酶活性,但对突变型无影响。结论 miR-7通过抑制EGFR/STAT3信号通路拮抗星形胶质细胞活化,从而减轻大鼠脑出血后脑损伤。
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关键词
微小RNA-7(miR-7)
表皮生长因子受体(EGFR)
信号转导子和转录激活子3(STAT3)
胶质纤维酸性蛋白(GFAP)
脑出血
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职称材料
miR-7靶向沉默EGFR抑制大鼠星形胶质细胞活化
被引量：
5
2
作者
钱红
胡柯
+5 位作者
刘理静
谢明
武衡
李文军
武斌
聂萌
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期376-382,共7页
目的探讨微小RNA-7(miR-7)对星形胶质细胞活化的影响及分子机制。方法培养大鼠皮层星形胶质细胞,分别用培养液(对照组)、睫状神经营养因子(CNTF,用于活化星形胶质细胞)、miR-7 mimic+CNTF、miR-7 mimic control+CNTF、miR-7 inhibitor+C...
目的探讨微小RNA-7(miR-7)对星形胶质细胞活化的影响及分子机制。方法培养大鼠皮层星形胶质细胞,分别用培养液(对照组)、睫状神经营养因子(CNTF,用于活化星形胶质细胞)、miR-7 mimic+CNTF、miR-7 mimic control+CNTF、miR-7 inhibitor+CNTF及miR-7 inhibitor control+CNTF处理,采用荧光实时定量PCR(q RT-PCR)检测神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和表皮生长因子受体(EGFR)mRNA表达,通过Western blot检测GFAP、EGFR、信号传导蛋白和转录激活物3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达。构建野生型pGL3-EGFR及突变型p GL3-EGFR-m重组质粒,分别与miR-7 mimic共转染HEK293T细胞,检测荧光素酶报告基因活性。此外,以EGFR si RNA或STAT3抑制剂S31-201处理星形胶质细胞,再与miR-7 inhibitor和CNTF孵育,然后用q RT-PCR、Western blot检测GFAP m RNA与蛋白表达。结果 CNTF组GFAP、EGFR表达水平及pSTAT3/STAT3比值较对照组增加(P<0.01),与CNTF组比较,miR-7 mimic+CNTF组GFAP、EGFR表达水平及pSTAT3/STAT3比值降低,miR-7 inhibitor+CNTF组GFAP、EGFR表达水平及p-STAT3/STAT3比值升高(P<0.01)。与对照组比较,miR-7 mimic转染明显减少野生型EGFR荧光素酶活性(P<0.01)。EGFR si RNA或S31-201预处理几乎完全逆转miR-7 inhibitor诱导的GFAP表达上调(P<0.01)。结论 miR-7通过抑制EGFR/STAT3信号通路拮抗CNTF诱导的大鼠星形胶质细胞活化。
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关键词
微小RNA-7
表皮生长因子受体
信号传导蛋白和转录激活物3
神经胶质原纤维酸性蛋白
星形胶质细胞
小干扰RNA
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职称材料
题名
侧脑室注射miR-7通过EGFR/STAT3途径抑制大鼠脑出血后脑损伤
被引量：
13
1
作者
钱红
胡柯
谢明
武衡
李文军
武斌
满荣勇
聂萌
机构
湖南医药学院医学院
南华大学附属
第一
医院
神经内
科
怀化市第一人民医院老年科
怀化市
第一
人民医院
神经内
科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期141-147,共7页
基金
湖南省教育厅资助科研项目(14C0906)
怀化市科技计划资助项目(2015F3102)
文摘
目的观察微小RNA-7(miR-7)对大鼠脑出血后脑损伤的影响,并探讨其分子机制。方法选取75只SD大鼠,以Ⅶ型胶原酶注入苍白球构建脑出血模型,随机分为对照组、miR-7激动剂(miR-7 agomir)组、miR-7激动剂对照(agomir control)组、miR-7拮抗剂(miR-7 antagomir)组和miR-7拮抗剂对照(antagomir control)组,每组15只。造模后第2天通过侧脑室分别注射10μL的生理盐水、miR-7 agomir、agomir control、miR-7 antagomir、antagomir control,造模后第7天进行神经功能评分,然后处死动物,取出脑组织,HE染色观察脑组织病理改变,干湿重法测定脑组织含水量,荧光实时定量PCR检测血肿周围脑组织中miR-7、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和表皮生长因子受体(EGFR)表达,Western blot法分析血肿周围脑组织中GFAP、EGFR、信号转导子和转录激活子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)水平。生物信息学预测miR-7与EGFR的靶向结合情况,构建野生型荧光素酶报告基因载体及相应的突变载体,与miR-7模拟物(mimic)共转染HEK293T细胞,检测荧光素酶活性。结果与对照组相比,miR-7 agomir明显增加血肿周围脑组织miR-7水平,减轻脑组织病理损害,减少神经功能评分和脑组织含水量,并降低血肿周围脑组织GFAP、EGFR表达水平及p-STAT3/STAT3比值;miR-7 antagomir的作用则相反。相应阴性对照物对上述指标无影响。生物信息学分析发现EGFR的3'-非翻译区存在miR-7结合位点,而且miR-7 mimic明显降低野生型EGFR荧光素酶活性,但对突变型无影响。结论 miR-7通过抑制EGFR/STAT3信号通路拮抗星形胶质细胞活化,从而减轻大鼠脑出血后脑损伤。
关键词
微小RNA-7(miR-7)
表皮生长因子受体(EGFR)
信号转导子和转录激活子3(STAT3)
胶质纤维酸性蛋白(GFAP)
脑出血
Keywords
miR-7
EGFR
STAT3
GFAP
intracerebral hemorrhage
分类号
R722.151 [医药卫生—儿科]
R743.34 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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题名
miR-7靶向沉默EGFR抑制大鼠星形胶质细胞活化
被引量：
5
2
作者
钱红
胡柯
刘理静
谢明
武衡
李文军
武斌
聂萌
机构
湖南医药学院医学院
南华大学附属
第一
医院
神经内
科
怀化市第一人民医院老年科
怀化市
第一
人民医院
神经内
科
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期376-382,共7页
基金
怀化市科技计划资助项目(No 2015F3102)
湖南省教育厅资助科研项目(No 14C0906)
文摘
目的探讨微小RNA-7(miR-7)对星形胶质细胞活化的影响及分子机制。方法培养大鼠皮层星形胶质细胞,分别用培养液(对照组)、睫状神经营养因子(CNTF,用于活化星形胶质细胞)、miR-7 mimic+CNTF、miR-7 mimic control+CNTF、miR-7 inhibitor+CNTF及miR-7 inhibitor control+CNTF处理,采用荧光实时定量PCR(q RT-PCR)检测神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和表皮生长因子受体(EGFR)mRNA表达,通过Western blot检测GFAP、EGFR、信号传导蛋白和转录激活物3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达。构建野生型pGL3-EGFR及突变型p GL3-EGFR-m重组质粒,分别与miR-7 mimic共转染HEK293T细胞,检测荧光素酶报告基因活性。此外,以EGFR si RNA或STAT3抑制剂S31-201处理星形胶质细胞,再与miR-7 inhibitor和CNTF孵育,然后用q RT-PCR、Western blot检测GFAP m RNA与蛋白表达。结果 CNTF组GFAP、EGFR表达水平及pSTAT3/STAT3比值较对照组增加(P<0.01),与CNTF组比较,miR-7 mimic+CNTF组GFAP、EGFR表达水平及pSTAT3/STAT3比值降低,miR-7 inhibitor+CNTF组GFAP、EGFR表达水平及p-STAT3/STAT3比值升高(P<0.01)。与对照组比较,miR-7 mimic转染明显减少野生型EGFR荧光素酶活性(P<0.01)。EGFR si RNA或S31-201预处理几乎完全逆转miR-7 inhibitor诱导的GFAP表达上调(P<0.01)。结论 miR-7通过抑制EGFR/STAT3信号通路拮抗CNTF诱导的大鼠星形胶质细胞活化。
关键词
微小RNA-7
表皮生长因子受体
信号传导蛋白和转录激活物3
神经胶质原纤维酸性蛋白
星形胶质细胞
小干扰RNA
Keywords
miR-7
epidermal growth factor receptor
signal transducers and activators of transcription 3
glial fibrillary acidic protein
astrocytes
small interfering RNA
分类号
R-332 [医药卫生]
R322.81 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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侧脑室注射miR-7通过EGFR/STAT3途径抑制大鼠脑出血后脑损伤
钱红
胡柯
谢明
武衡
李文军
武斌
满荣勇
聂萌
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
13
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2
miR-7靶向沉默EGFR抑制大鼠星形胶质细胞活化
钱红
胡柯
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