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芹黄素对人眼Tenon囊成纤维细胞增生的影响 被引量:1
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作者 邹会会 王继兵 +4 位作者 黄旭东 刘姗姗 满辉 李寿庆 马刚 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期233-237,共5页
背景青光眼滤过手术后人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的增生是滤过手术失败的主要原因,寻找抑制术后HTFs增生的药物可提高滤过手术的成功率。目的观察芹黄素对HTFs体外生长的抑制效应并探讨其作用机制。方法斜视手术中获取的人眼Tenon囊... 背景青光眼滤过手术后人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的增生是滤过手术失败的主要原因,寻找抑制术后HTFs增生的药物可提高滤过手术的成功率。目的观察芹黄素对HTFs体外生长的抑制效应并探讨其作用机制。方法斜视手术中获取的人眼Tenon囊组织剪成1mm×1mm×1mm的组织块,进行原代培养,免疫荧光法进行细胞波形蛋白检测以鉴定培养的HTFs。取第3~5代HTFs接种于96孑L板中,加入0、20、40、80、160μmol/L芹黄素后继续培养,于24、48、72h后分别取一块96孔板,在酶联免疫检测仪上检测560nm波长处各组细胞的吸光度(A。)值,磺基罗丹明B(SRB)法测定细胞的增生能力。分别在培养基中加入40、80、160μmol/L芹黄素,同时在不同浓度芹黄素组培养基中均加入10汕g/LBrdU,继续培养48h,在各组同一个视野下分别拍摄荧光显微镜和光学显微镜照片,计算BrdU的标记率,以未添加任何芹黄素(0μmol/L)组为对照组。用Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察培养细胞的形态学改变,采用流式细胞技术检测细胞的凋亡情况和细胞周期的变化。结果培养的细胞生长状态良好,免疫荧光法检测可见细胞对波形蛋白呈阳性反应,为细胞质中均匀的绿色荧光,确定培养的细胞为HTFs。SRB法检测结果显示,HTFs的增生值(A。)随着芹黄素浓度的增加而逐渐下降,同浓度芹黄素组HTFsA。值随着作用时间的延长逐渐下降,差异均有统计学意义(F㈣u:480.306,P=0.000;F目目=555.144,P=0.000)。0、40、80~mol/L芹黄素作用HTFs48h后BrdU的标记率分别为(87.860+-0.632)%、(61.520+-4.306)%、(23.480~4.472)%,各组之间的总体比较差异有统计学意义(F=299.347,P=0.000),其中40μmol/L、80μmol/L芹黄素组HTFsBrdU的标记率均明显低于0μmol/L芹黄素组,差异均有统计学意义(P〈0.05)。Hoechse33258染色发现,不同浓度芹黄素组的细胞数目减少,随着芹黄素浓度的增加,细胞核固缩和变形的细胞数目增加。流式细胞术检测发现,随着芹黄素浓度的增加,G。/G,期细胞的百分数逐渐增加,而S期和G:/M期细胞的百分数逐渐下降,差异均有统计学意义(Fc㈣1=58.621,P=0.000;Fs=32.357,P=0.001;Fc2/M=83.998,P=0.000)。0、40、80、160~mol/L芹黄素作用72h后,细胞的凋亡率分别为(4.77±0.21)%、(13.24±1.35)%、(18.33±1.86)%、(31.58±2.77)%,4个组的总体差异有统计学意义(F=204.791,P〈0.05)。结论芹黄素通过诱导细胞凋亡,并将细胞阻滞于C/C期而抽柏JHTFs的士曾堆苴椎田里剂骨和时问俯觞幛, 展开更多
关键词 芹黄素 人Tenon囊成纤维细胞 凋亡
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氯化锂对人Tenon囊成纤维细胞增生抑制作用的机制研究
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作者 邹会会 刘姗姗 +2 位作者 梁玲 范晓军 王继兵 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期863-868,共6页
目的探讨氯化锂对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)缝隙连接细胞间通讯(GJIC)的影响及其可能的作用机制。方法收集2019年4月于德州市人民医院眼科行斜视手术的1例患者的Tenon囊组织,剪成1 mmxl mmX1 mm的组织块,进行原代培养并传代,取第4代HTF... 目的探讨氯化锂对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)缝隙连接细胞间通讯(GJIC)的影响及其可能的作用机制。方法收集2019年4月于德州市人民医院眼科行斜视手术的1例患者的Tenon囊组织,剪成1 mmxl mmX1 mm的组织块,进行原代培养并传代,取第4代HTFs进行实验。将HTFs分为对照组和氯化锂处理组,对照组加入不含氯化锂的细胞培养基,氯化锂处理组加入含80 mmol/L氯化锂的细胞培养基,继续培养48 h。采用细胞划痕染料标记示踪法标记偶联指数,评估GJIC功能;采用细胞免疫荧光法检测HTFs中Cx43的表达和定位;采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测HTFs中Cx43 mRNA及蛋白的表达水平。结果培养的细胞呈长梭形并呈单层放射状或涡旋状贴壁生长,细胞质vimentin染色呈阳性。细胞划痕染料示踪实验结果显示,氯化锂处理组细胞偶联指数为9.04±0,53,明显高于对照组的4.94±0,39,差异有统计学意义(t=-18.79,P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,对照组可见Cx43荧光呈点状分布于细胞相连处的细胞膜上,氯化锂处理组Cx43染色明显增强。实时荧光定量PCR结果显示,对照组Cx43 mRNA相对表达量设为1,氯化锂处理组Cx43 mRNA相对表达量明显升高,为1.97±0,23,差异有统计学意义(t=-14.426,P<0.01)。Western blot检测结果显示,氯化锂处理组Cx43蛋白相对表达量为0.871±0,057,明显高于对照组的0.446±0.028,差异有统计学意义(t=-11.682,P<0.01)o结论氯化锂可上调HTFs中Cx43 mRNA及蛋白表达并增强HTFs间GJIC功能,提示氯化锂增强GJIC的功能可能是其抑制HTFs增生的机制之一。 展开更多
关键词 氯化锂 缝隙连接 人Tenon囊成纤维细胞 青光眼
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糖尿病视网膜病变程度与角膜上皮基底神经丛涡状区改变的关系 被引量:7
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作者 于花 苗英彬 +4 位作者 赵少贞 杨纪忠 郑晓汾 韩玉萍 赵炬伟 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期767-772,共6页
目的通过对比不同分期糖尿病视网膜病变(DR)患者涡状区角膜上皮基底神经丛(sub-basal nerve plexus,SNP)的差别,探讨DR分期与糖尿病角膜神经损伤的相关性。方法采用横断面研究,选取2018年9月至2019年1月就诊于山西省眼科医院的2型糖尿... 目的通过对比不同分期糖尿病视网膜病变(DR)患者涡状区角膜上皮基底神经丛(sub-basal nerve plexus,SNP)的差别,探讨DR分期与糖尿病角膜神经损伤的相关性。方法采用横断面研究,选取2018年9月至2019年1月就诊于山西省眼科医院的2型糖尿病患者66例66眼,年龄50~65岁,均以右眼为受检眼。按照DR分级标准将患者分为无糖尿病视网膜病变(NDR)组、非增生期糖尿病视网膜病变(NPDR)组和增生期糖尿病视网膜病变(PDR)组,并纳入年龄与性别匹配的年龄相关性白内障患者20例20眼作为对照组。所有受检者均接受角膜激光扫描共焦显微镜检查,观察涡状区SNP的形态,并测量神经纤维长度(NFL)。采用以病程为协变量的协方差分析比较各组间NFL值差异;采用Spearman秩相关分析NFL值与DR分期的相关性。结果所有受检眼均可查见涡状区。对照组神经纤维粗细均匀、分布密集,走行规则,且多数受检眼涡状结构完整;各不同分期DR组神经纤维普遍变细、密度下降,走行迂曲,并伴有不同程度的涡状结构缺失。NDR组和NPDR组主要表现为涡状中心缺失;PDR组除涡状中心缺失外,部分受检眼还合并下方及颞侧的结构缺失。对照组、NDR组、NPDR组和PDR组NFL值分别为(21.08±4.74)、(16.47±6.35)、(14.95±3.90)和(11.61±3.24)mm/mm2,总体比较差异具有统计学意义(F=10.541,P<0.001)。对照组NFL值均明显高于各不同DR分期组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。Spearman秩相关分析结果显示,NFL值与DR分期呈负相关(rs=-0.356,P=0.003)。结论糖尿病SNP损伤早于DR出现,且随着DR发展过程而逐渐进展;DR各分期均伴有不同程度的神经结构缺失,且缺失首先从涡状中心开始,逐渐向下方和颞侧发展。临床在治疗糖尿病患者眼底病的同时应当兼顾眼表的状况。 展开更多
关键词 糖尿病视网膜病变 角膜上皮基底神经丛 涡状区 糖尿病神经损伤 相关性
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激光扫描共聚焦显微镜对涡状区和中央区角膜上皮基底神经丛检测一致性比较 被引量:2
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作者 于花 苗英彬 赵少贞 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2020年第5期461-465,共5页
目的比较激光扫描共聚焦显微镜测量中央区和涡状区角膜上皮基底神经丛结果的一致性,从而筛选出更加合理可靠的检查部位。方法前瞻性研究。2018年11月至2019年2月募集年龄在20~40岁的健康志愿者30人作为研究对象,所有受试者经过筛查排除... 目的比较激光扫描共聚焦显微镜测量中央区和涡状区角膜上皮基底神经丛结果的一致性,从而筛选出更加合理可靠的检查部位。方法前瞻性研究。2018年11月至2019年2月募集年龄在20~40岁的健康志愿者30人作为研究对象,所有受试者经过筛查排除影响神经功能的全身和局部病变后纳入本研究。入组受试者均选择右眼为受检眼,由2名经验丰富的医师完成3次激光扫描共聚焦显微镜检查。首先于受试当天由操作者A和操作者B各完成1次检查,1周后再由操作者A重复检查1次。所得图像用Adobe Photoshop图像处理软件拼接后,再用Neuron J图像分析软件进行定量分析,得到神经纤维长度(nerve fiber length,NFL)(mm·mm^-2)。然后分别根据涡状区和中央区NFL值绘制Bland-Altman散点图,并计算重复性系数(coefficient of repeatability,CoR)和95%一致性区间(limit of agreement,LOA),用于评估两个部位观察者内和观察者间一致性。结果所有受检眼均可于角膜中央偏鼻下方查见涡状结构,重复检查获得的涡状区图像显示角膜神经形态稳定,中央区图像显示角膜神经形态变异较大。涡状区一致性分析观察者内CoR值为6.6%,观察者间CoR值为6.1%,一致性很高;而中央区一致性分析观察者内CoR值为44.1%,观察者间CoR值为31.8%,一致性较差。Bland-Altman散点图涡状区观察者内和观察者间测量差值均聚集于“0”刻度线附近,且95%LOA较窄,均在平均NFL的1个标准差的区间内,一致性良好;中央区观察者内和观察者间测量差值分布较分散,95%LOA较宽,约为两次检查平均NFL标准差的2~3倍,一致性较差。结论涡状结构在健康人角膜上皮基底神经丛普遍存在,其形态特殊,位置固定,在图像采集时能够作为明确的角膜标记物;涡状区图像重复测量一致性良好,可以应用于角膜上皮基底神经丛的定量分析。 展开更多
关键词 涡状结构 角膜上皮基底神经丛 激光扫描共聚焦显微镜 重复测量一致性
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血小板对巨噬细胞抑制和吞噬真菌的促进作用 被引量:1
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作者 张芬芬 刘素素 +5 位作者 岳娟 简守珺 司玮 代闫芳 魏静静 张红敏 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期942-948,共7页
目的研究血小板在巨噬细胞杀伤真菌中的作用。方法培养小鼠巨噬细胞系(RAW264.7),提取腐皮镰孢菌孢子,分离小鼠血小板。实验分为单纯孢子组、孢子+巨噬细胞组和混合血小板组,分别接种真菌孢子、等比例孢子+巨噬细胞以及血小板+孢子+巨... 目的研究血小板在巨噬细胞杀伤真菌中的作用。方法培养小鼠巨噬细胞系(RAW264.7),提取腐皮镰孢菌孢子,分离小鼠血小板。实验分为单纯孢子组、孢子+巨噬细胞组和混合血小板组,分别接种真菌孢子、等比例孢子+巨噬细胞以及血小板+孢子+巨噬细胞进行培养。分别于培养后1、2、3和4 h于转盘式激光扫描共焦显微镜上任意选取各组5个视野进行拍照,计算各组巨噬细胞吞噬率、吞噬指数和真菌孢子出芽率,于培养后4、6和8 h观察并测量各组菌丝伸长度。设置单纯巨噬细胞组、孢子+巨噬细胞组和混合血小板组,应用细胞分析仪进行细胞毒性测定。结果混合血小板组培养后1、2、3和4 h的巨噬细胞吞噬率和吞噬指数均明显高于相应时间点孢子+巨噬细胞组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养后1、2、3和4 h各组孢子出芽率总体比较差异均有统计学意义(H=60.05、37.89、55.15、60.52,均P<0.001);孢子+巨噬细胞组培养后1、2、3和4 h孢子出芽率均低于相应时间点单纯孢子组,而混合血小板组培养后1、3和4 h孢子出芽率均低于孢子+巨噬细胞组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。培养后4、6和8 h时各组菌丝伸长度总体比较差异均有统计学意义(H=13.76,P=0.001;H=43.57、P<0.001;H=60.87,P<0.001);培养4、6和8 h时孢子+巨噬细胞组菌丝伸长度均低于相应时间点单纯孢子组,培养6 h和8 h混合血小板组菌丝长度均低于相应时间点孢子+巨噬细胞组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养后0、6、12、18和24 h各组细胞指数总体比较差异均无统计学意义(F=0.02、1.08、1.61、1.58、2.52,均P>0.05)。培养后30、36、42和48 h各组细胞指数总体比较,差异均有统计学意义(F=10.81、8.08、5.61、5.72,均P<0.05);孢子+巨噬细胞组细胞指数明显低于单纯巨噬细胞组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论血小板可促进巨噬细胞对真菌的吞噬和抑制作用,并且可能有拮抗真菌细胞毒性的作用。 展开更多
关键词 角膜炎 病理 巨噬细胞 真菌 血小板 吞噬功能 出芽率
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血小板体外对中性粒细胞抗真菌作用的影响 被引量:1
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作者 司玮 张芬芬 +4 位作者 王春梅 刘素素 岳娟 简守珺 张红敏 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2021年第6期784-790,共7页
目的:研究血小板对中性粒细胞体外抗真菌作用的影响。方法:实验真菌为腐皮镰胞菌标准株。分别分离健康人外周血中的中性粒细胞(N)和血小板(PL)。预先分别用钙荧光白、抗人CD15-FITC和抗人CD41a-PE标记真菌孢子(S)、中性粒细胞和血小板... 目的:研究血小板对中性粒细胞体外抗真菌作用的影响。方法:实验真菌为腐皮镰胞菌标准株。分别分离健康人外周血中的中性粒细胞(N)和血小板(PL)。预先分别用钙荧光白、抗人CD15-FITC和抗人CD41a-PE标记真菌孢子(S)、中性粒细胞和血小板。将中性粒细胞5×10^(5)个/孔均匀接种于培养板。①设定S+N组、S+N+PL组,按照S∶N∶PL个数1∶1∶20接种,分别于培养1、2、4 h后测定中性粒细胞吞噬率。②设置S组、S+N组、S+N+PL组,按照S∶N∶PL个数比例为1∶5∶100接种;分别于培养1、2、4 h后测定孢子出芽率;分别于培养4、6、8 h后测量菌丝伸长度。③设置N组、S+N组、S+N+PL组,按照S∶N∶PL个数为1∶5∶100接种,分别于培养6、10、14、18 h后,Annexin V/PI双染法检测中性粒细胞凋亡率。结果:S+N+PL组中性粒细胞吞噬率大于S+N组(P<0.05)。S+N+PL组孢子出芽率、菌丝伸长度小于S+N组,S+N组小于S组(P<0.05)。S+N+P组中性粒细胞凋亡率小于N组和S+N组(P<0.05)。结论:血小板可体外增强中性粒细胞的抗真菌作用。 展开更多
关键词 血小板 中性粒细胞 真菌性角膜炎
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