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土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒的构建、原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定
被引量：
2
1
作者
张振华
田拥军
+4 位作者
李磊
王宝菊
孟忠吉
陆蒙吉
杨东亮
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期567-570,577,F0002,共6页
目的构建土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒并进行原核表达、抗体制备。方法应用基因工程技术将编码截短型土拨鼠肝炎病毒核心蛋白(WHcAg1～149aa)的基因片段装入原核表达载体pQE60上,在JM109菌内进行诱导表达,使用切胶回收及Ni-NTA柱两种方...
目的构建土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒并进行原核表达、抗体制备。方法应用基因工程技术将编码截短型土拨鼠肝炎病毒核心蛋白(WHcAg1～149aa)的基因片段装入原核表达载体pQE60上,在JM109菌内进行诱导表达,使用切胶回收及Ni-NTA柱两种方法纯化目的蛋白。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附实验、免疫组织化学及Western blot检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功地构建了含截短型土拨鼠肝炎病毒核心区基因的质粒并获得表达,经纯化得到了分子量约为16.5kD的重组核心蛋白,免疫家兔获得了高效价的特异性多克隆抗体,而且与HBcAg有交叉反应。结论获得的重组截短型土拨鼠肝炎病毒核心抗原(1～149aa)纯度高,免疫原性强。获得的兔抗-WHc效价高,特异性好,与HBcAg有交叉反应。
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关键词
土拨鼠肝炎病毒
核心蛋白
原核表达
多克隆抗体
抗原抗体交叉反应
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职称材料
抗土拨鼠肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体的制备、性质鉴定及初步应用
2
作者
张振华
田拥军
+4 位作者
李磊
张珺
龚劲松
陆蒙吉
杨东亮
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期341-344,共4页
目的研制出能特异与土拨鼠肝炎病毒核心蛋白（WHc）结合的单克隆抗体,使之能特异性地对土拨鼠肝炎病毒（WHV）进行检测,并可能应用于相关肝炎病毒的筛查。方法以原核表达的土拨鼠肝炎病毒重组核心蛋白（WHc 1～149氨基酸）免疫BALB/c小...
目的研制出能特异与土拨鼠肝炎病毒核心蛋白（WHc）结合的单克隆抗体,使之能特异性地对土拨鼠肝炎病毒（WHV）进行检测,并可能应用于相关肝炎病毒的筛查。方法以原核表达的土拨鼠肝炎病毒重组核心蛋白（WHc 1～149氨基酸）免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术进行细胞融合,有限稀释法克隆化,间接酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫组织化学（IHC）筛选、鉴定。结果筛选出5株（4B1E、6C5D、6C5C、6D1D、6D1G）能稳定分泌抗土拨鼠肝炎病毒核心蛋白抗体的杂交瘤细胞株。此5株单抗适用于ELISA、IHC、Western blot等方面的研究,与HBcAg有交叉反应,并且在部分中国旱獭的肝脏组织进行IHC检测呈现阳性反应。结论制备的5株单抗可用于土拨鼠肝炎病毒等嗜肝脱氧核糖核酸病毒的研究,可能在寻找新的相关肝炎病毒中起重要作用。
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关键词
土拨鼠肝炎病毒
核心蛋白
单克隆抗体
旱獭
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职称材料
题名
土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒的构建、原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定
被引量：
2
1
作者
张振华
田拥军
李磊
王宝菊
孟忠吉
陆蒙吉
杨东亮
机构
华中科技
大学
同济
医学院
附属同济医院临床免疫
研究
室
德国essen大学医学院病毒研究所
出处
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期567-570,577,F0002,共6页
基金
国家"十五"科技攻关计划资助项目(No2001BA705B05)
文摘
目的构建土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒并进行原核表达、抗体制备。方法应用基因工程技术将编码截短型土拨鼠肝炎病毒核心蛋白(WHcAg1～149aa)的基因片段装入原核表达载体pQE60上,在JM109菌内进行诱导表达,使用切胶回收及Ni-NTA柱两种方法纯化目的蛋白。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附实验、免疫组织化学及Western blot检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功地构建了含截短型土拨鼠肝炎病毒核心区基因的质粒并获得表达,经纯化得到了分子量约为16.5kD的重组核心蛋白,免疫家兔获得了高效价的特异性多克隆抗体,而且与HBcAg有交叉反应。结论获得的重组截短型土拨鼠肝炎病毒核心抗原(1～149aa)纯度高,免疫原性强。获得的兔抗-WHc效价高,特异性好,与HBcAg有交叉反应。
关键词
土拨鼠肝炎病毒
核心蛋白
原核表达
多克隆抗体
抗原抗体交叉反应
Keywords
woodchuck hepatitis virus
core protein
prokaryotic expression
polyclonal antibodies
antibody and antigen cross-reaction
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
抗土拨鼠肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体的制备、性质鉴定及初步应用
2
作者
张振华
田拥军
李磊
张珺
龚劲松
陆蒙吉
杨东亮
机构
华中科技
大学
同济
医学院
附属同济医院临床免疫
研究
室
华中科技
大学
同济
医学院
附属同济医院实验
医学
研究
中心
德国essen大学医学院病毒研究所
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期341-344,共4页
基金
国家重大基础研究项目(973)资助(20014CB510008
2005CB522900)
国家自然科学基金资助(30271170)
文摘
目的研制出能特异与土拨鼠肝炎病毒核心蛋白（WHc）结合的单克隆抗体,使之能特异性地对土拨鼠肝炎病毒（WHV）进行检测,并可能应用于相关肝炎病毒的筛查。方法以原核表达的土拨鼠肝炎病毒重组核心蛋白（WHc 1～149氨基酸）免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术进行细胞融合,有限稀释法克隆化,间接酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫组织化学（IHC）筛选、鉴定。结果筛选出5株（4B1E、6C5D、6C5C、6D1D、6D1G）能稳定分泌抗土拨鼠肝炎病毒核心蛋白抗体的杂交瘤细胞株。此5株单抗适用于ELISA、IHC、Western blot等方面的研究,与HBcAg有交叉反应,并且在部分中国旱獭的肝脏组织进行IHC检测呈现阳性反应。结论制备的5株单抗可用于土拨鼠肝炎病毒等嗜肝脱氧核糖核酸病毒的研究,可能在寻找新的相关肝炎病毒中起重要作用。
关键词
土拨鼠肝炎病毒
核心蛋白
单克隆抗体
旱獭
Keywords
Woodchuck hepatitis virus
Core protein
Monoclonal antibody
Marmot
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒的构建、原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定
张振华
田拥军
李磊
王宝菊
孟忠吉
陆蒙吉
杨东亮
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
抗土拨鼠肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体的制备、性质鉴定及初步应用
张振华
田拥军
李磊
张珺
龚劲松
陆蒙吉
杨东亮
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
0
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