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体内遗传标记成团肠杆菌固氮质粒pEA9
1
作者
刘成君
Walter Klingmüller
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第4期455-458,共4页
用卡那霉素抗性（Kanr）基因对成团肠杆菌固氮质粒pEA9进行活体遗传标记。将来自质粒pEA9的3.0kb片段（nif ENX）克隆到pBR322载体中,再将卡那霉素抗性（Kanr）基因插入到3.0kb的片段中,构建成供体质粒pST5。将该质粒转化到含有待标记质...
用卡那霉素抗性（Kanr）基因对成团肠杆菌固氮质粒pEA9进行活体遗传标记。将来自质粒pEA9的3.0kb片段（nif ENX）克隆到pBR322载体中,再将卡那霉素抗性（Kanr）基因插入到3.0kb的片段中,构建成供体质粒pST5。将该质粒转化到含有待标记质粒pEA9的E.a.339菌株中,然后在AP培养基中消除供体质粒,筛选得到40个失去了pST5并保持卡那霉素抗性的克隆,分析表明它们不是质粒pEA9和pST5的共整合体,而是卡那霉素抗性基因通过两个质粒在nifENX区域内的DNA间的同源重组整合到了质粒pEA9上。
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关键词
固氮质粒pEA9
成团肠杆菌
遗传标记
卡那霉素抗性
质粒消除
同源重组
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职称材料
六株成团肠杆菌 (Enterobacteragglomerans)接合子的分子生物学分析
2
作者
刘成君
Walter KLINGMLLER
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第4期433-439,共7页
对 6株成团肠杆菌 (Enterobacteragglomerans)接合子的分子生物学进行了分析 .6株菌与nifHDK基因有杂交 .菌株总DNA经BamHⅠ酶切后与pEA9 DNA进行Southern杂交 ,只有 2株菌具有完整的质粒DNA ,其余菌株质粒DNA发生了 15 3～ 137 7kb...
对 6株成团肠杆菌 (Enterobacteragglomerans)接合子的分子生物学进行了分析 .6株菌与nifHDK基因有杂交 .菌株总DNA经BamHⅠ酶切后与pEA9 DNA进行Southern杂交 ,只有 2株菌具有完整的质粒DNA ,其余菌株质粒DNA发生了 15 3～ 137 7kb不同程度的缺失 .用切割位点较少的限制性内切酶XbaⅠ酶切 6株菌的总DNA ,经脉冲场凝胶电泳 (PFGE)后用pEA9 DNA为探针进行Southern杂交 ,每株菌的pEA9 DNA明显大于用BamHⅠ酶切后的杂交结果 ,表明质粒与染色体发生了整合 .转座子Tn5或插入序列IS 12 2 2和IS 12 71可能参与质粒与染色体的整合过程 .
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关键词
成团肠杆菌
接合子
分子生物学分析
脉冲场凝胶电泳
SOUTHERN杂交
插入序列
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职称材料
题名
体内遗传标记成团肠杆菌固氮质粒pEA9
1
作者
刘成君
Walter Klingmüller
机构
四川
大学
生命科学学院
德国拜罗伊特大学遗传研究所
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第4期455-458,共4页
文摘
用卡那霉素抗性（Kanr）基因对成团肠杆菌固氮质粒pEA9进行活体遗传标记。将来自质粒pEA9的3.0kb片段（nif ENX）克隆到pBR322载体中,再将卡那霉素抗性（Kanr）基因插入到3.0kb的片段中,构建成供体质粒pST5。将该质粒转化到含有待标记质粒pEA9的E.a.339菌株中,然后在AP培养基中消除供体质粒,筛选得到40个失去了pST5并保持卡那霉素抗性的克隆,分析表明它们不是质粒pEA9和pST5的共整合体,而是卡那霉素抗性基因通过两个质粒在nifENX区域内的DNA间的同源重组整合到了质粒pEA9上。
关键词
固氮质粒pEA9
成团肠杆菌
遗传标记
卡那霉素抗性
质粒消除
同源重组
Keywords
Enterobacter agglomerans
labelling
kanamycin resistance
curing
homologous recombination
分类号
Q933 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
六株成团肠杆菌 (Enterobacteragglomerans)接合子的分子生物学分析
2
作者
刘成君
Walter KLINGMLLER
机构
四川
大学
生命科学学院
德国拜罗伊特大学遗传研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第4期433-439,共7页
文摘
对 6株成团肠杆菌 (Enterobacteragglomerans)接合子的分子生物学进行了分析 .6株菌与nifHDK基因有杂交 .菌株总DNA经BamHⅠ酶切后与pEA9 DNA进行Southern杂交 ,只有 2株菌具有完整的质粒DNA ,其余菌株质粒DNA发生了 15 3～ 137 7kb不同程度的缺失 .用切割位点较少的限制性内切酶XbaⅠ酶切 6株菌的总DNA ,经脉冲场凝胶电泳 (PFGE)后用pEA9 DNA为探针进行Southern杂交 ,每株菌的pEA9 DNA明显大于用BamHⅠ酶切后的杂交结果 ,表明质粒与染色体发生了整合 .转座子Tn5或插入序列IS 12 2 2和IS 12 71可能参与质粒与染色体的整合过程 .
关键词
成团肠杆菌
接合子
分子生物学分析
脉冲场凝胶电泳
SOUTHERN杂交
插入序列
Keywords
Enterobacter agglomerans , transconjugants, pulsed field gel electrophoresis, Southern hybridization, transposon, insertion element
分类号
S154.381 [农业科学—土壤学]
Q939.113 [生物学—微生物学]
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职称材料
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作者
出处
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1
体内遗传标记成团肠杆菌固氮质粒pEA9
刘成君
Walter Klingmüller
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2002
0
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职称材料
2
六株成团肠杆菌 (Enterobacteragglomerans)接合子的分子生物学分析
刘成君
Walter KLINGMLLER
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
0
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