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施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
被引量：
12
1
作者
张永宁
吴绍强
+6 位作者
吕继洲
冯春燕
王彩霞
袁向芬
邓俊花
林祥梅
Wernike Kerstin
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1629-1636,共8页
本研究旨在表达施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)的核衣壳蛋白(N),进而制备其多克隆抗体。以SBV(BH80株)的RNA为模板,RT-PCR扩增N基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-28a-c(+)中,获得pET-28a-SBV-N重组质粒。经酶切和测序鉴...
本研究旨在表达施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)的核衣壳蛋白(N),进而制备其多克隆抗体。以SBV(BH80株)的RNA为模板,RT-PCR扩增N基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-28a-c(+)中,获得pET-28a-SBV-N重组质粒。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达HisSBV-N融合蛋白。在非变性条件下用Ni-NTA柱纯化His-SBV-N,并以此为抗原免疫新西兰大白兔制备多抗。经免疫亲和层析纯化后,利用Western blot和间接免疫荧光对多抗进行鉴定。结果表明:(1)His-SBV-N融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中同时以可溶性和包涵体2种形式表达,相对分子质量约为30ku;(2)制备的多抗效价高达1∶64 000。该多抗不仅能与His-SBV-N融合蛋白发生特异性反应,而且还能识别SBV的不同毒株,但与布尼亚病毒科内亲缘关系最近的沙门达病毒(Shamonda virus)、道格拉斯病毒(Douglas virus)和赤羽病病毒(Akabane virus)的核衣壳蛋白存在交叉反应。His-SBV-N融合蛋白及其多抗的成功制备,为施马伦贝格病血清学检测方法的建立奠定了物质基础。
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关键词
施马伦贝格病毒
核衣壳蛋白
原核表达
多克隆抗体
免疫亲和层析
在线阅读
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职称材料
施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析
被引量：
7
2
作者
张永宁
吴绍强
+3 位作者
Kerstin WERNIKE
吕继洲
冯春燕
林祥梅
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期289-293,共5页
目的制备施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAb)并分析其特性。方法将SBV N基因分别构建至pET-28a-c(+)和pMAL-c5X载体中,在大肠杆菌中诱导表达带组氨酸标签的融合蛋白His-SBV-N和带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白MBP-...
目的制备施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAb)并分析其特性。方法将SBV N基因分别构建至pET-28a-c(+)和pMAL-c5X载体中,在大肠杆菌中诱导表达带组氨酸标签的融合蛋白His-SBV-N和带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白MBP-SBV-N,分别用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)树脂和直链淀粉树脂纯化两种蛋白;用纯化的His-SBVN免疫BALB/c小鼠制备mAb,以MBP-SBV-N为包被抗原间接ELISA筛选分泌mAb的杂交瘤细胞和测定mAb效价,利用蛋白G琼脂糖凝胶从腹水中纯化mAb;应用Western blot和间接免疫荧光分析mAb的反应性和特异性。结果筛选并纯化出1株抗SBV的mAb(命名为1F2),效价为1∶32 000,重链亚型为IgG2α,轻链为κ;1F2既能与重组SBV N蛋白发生反应,又能识别SBV,但与布尼亚病毒科内亲缘关系较近的沙门达病毒、道格拉斯病毒和赤羽病病毒的N蛋白存在交叉反应,而与裂谷热病毒N蛋白无交叉反应。结论成功制备了抗SBV核衣壳蛋白的mAb,为SBV的血清学检测提供了工具。
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关键词
施马伦贝格病毒
核衣壳蛋白
原核表达
单克隆抗体
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职称材料
题名
施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
被引量：
12
1
作者
张永宁
吴绍强
吕继洲
冯春燕
王彩霞
袁向芬
邓俊花
林祥梅
Wernike Kerstin
机构
中国检验检疫科学
研究
院动物检疫
研究所
德国弗里德里希洛弗勒研究所
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1629-1636,共8页
基金
"十二五"国家科技支撑计划课题(2013BAD12B01)
国家质检总局科技计划项目(2013IK054)
中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项资金(2012JK011)
文摘
本研究旨在表达施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)的核衣壳蛋白(N),进而制备其多克隆抗体。以SBV(BH80株)的RNA为模板,RT-PCR扩增N基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-28a-c(+)中,获得pET-28a-SBV-N重组质粒。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达HisSBV-N融合蛋白。在非变性条件下用Ni-NTA柱纯化His-SBV-N,并以此为抗原免疫新西兰大白兔制备多抗。经免疫亲和层析纯化后,利用Western blot和间接免疫荧光对多抗进行鉴定。结果表明:(1)His-SBV-N融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中同时以可溶性和包涵体2种形式表达,相对分子质量约为30ku;(2)制备的多抗效价高达1∶64 000。该多抗不仅能与His-SBV-N融合蛋白发生特异性反应,而且还能识别SBV的不同毒株,但与布尼亚病毒科内亲缘关系最近的沙门达病毒(Shamonda virus)、道格拉斯病毒(Douglas virus)和赤羽病病毒(Akabane virus)的核衣壳蛋白存在交叉反应。His-SBV-N融合蛋白及其多抗的成功制备,为施马伦贝格病血清学检测方法的建立奠定了物质基础。
关键词
施马伦贝格病毒
核衣壳蛋白
原核表达
多克隆抗体
免疫亲和层析
Keywords
Schmallenberg virus （SBV）
nucleocapsid （N） protein
prokaryotic expression
poly- clonal antibodies
immunoaffinity chromatography
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析
被引量：
7
2
作者
张永宁
吴绍强
Kerstin WERNIKE
吕继洲
冯春燕
林祥梅
机构
中国检验检疫科学
研究
院动物检疫
研究所
德国弗里德里希洛弗勒研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期289-293,共5页
基金
"十二五"国家科技支撑计划课题(2013BAD12B01)
国家质检总局科技计划项目(2013IK054)
中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项资金(2012JK011)
文摘
目的制备施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAb)并分析其特性。方法将SBV N基因分别构建至pET-28a-c(+)和pMAL-c5X载体中,在大肠杆菌中诱导表达带组氨酸标签的融合蛋白His-SBV-N和带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白MBP-SBV-N,分别用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)树脂和直链淀粉树脂纯化两种蛋白;用纯化的His-SBVN免疫BALB/c小鼠制备mAb,以MBP-SBV-N为包被抗原间接ELISA筛选分泌mAb的杂交瘤细胞和测定mAb效价,利用蛋白G琼脂糖凝胶从腹水中纯化mAb;应用Western blot和间接免疫荧光分析mAb的反应性和特异性。结果筛选并纯化出1株抗SBV的mAb(命名为1F2),效价为1∶32 000,重链亚型为IgG2α,轻链为κ;1F2既能与重组SBV N蛋白发生反应,又能识别SBV,但与布尼亚病毒科内亲缘关系较近的沙门达病毒、道格拉斯病毒和赤羽病病毒的N蛋白存在交叉反应,而与裂谷热病毒N蛋白无交叉反应。结论成功制备了抗SBV核衣壳蛋白的mAb,为SBV的血清学检测提供了工具。
关键词
施马伦贝格病毒
核衣壳蛋白
原核表达
单克隆抗体
Keywords
schmallenberg virus （SBV）
nucleocapsid （N） protein~ prokar~/otic expression
monoclonal antibody （mAb）
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
Q813.2 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
张永宁
吴绍强
吕继洲
冯春燕
王彩霞
袁向芬
邓俊花
林祥梅
Wernike Kerstin
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
12
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职称材料
2
施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析
张永宁
吴绍强
Kerstin WERNIKE
吕继洲
冯春燕
林祥梅
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
7
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