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施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
被引量：
11
1
作者
张永宁
吴绍强
+6 位作者
吕继洲
冯春燕
王彩霞
袁向芬
邓俊花
林祥梅
Wernike Kerstin
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1629-1636,共8页
本研究旨在表达施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)的核衣壳蛋白(N),进而制备其多克隆抗体。以SBV(BH80株)的RNA为模板,RT-PCR扩增N基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-28a-c(+)中,获得pET-28a-SBV-N重组质粒。经酶切和测序鉴...
本研究旨在表达施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)的核衣壳蛋白(N),进而制备其多克隆抗体。以SBV(BH80株)的RNA为模板,RT-PCR扩增N基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-28a-c(+)中,获得pET-28a-SBV-N重组质粒。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达HisSBV-N融合蛋白。在非变性条件下用Ni-NTA柱纯化His-SBV-N,并以此为抗原免疫新西兰大白兔制备多抗。经免疫亲和层析纯化后,利用Western blot和间接免疫荧光对多抗进行鉴定。结果表明:(1)His-SBV-N融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中同时以可溶性和包涵体2种形式表达,相对分子质量约为30ku;(2)制备的多抗效价高达1∶64 000。该多抗不仅能与His-SBV-N融合蛋白发生特异性反应,而且还能识别SBV的不同毒株,但与布尼亚病毒科内亲缘关系最近的沙门达病毒(Shamonda virus)、道格拉斯病毒(Douglas virus)和赤羽病病毒(Akabane virus)的核衣壳蛋白存在交叉反应。His-SBV-N融合蛋白及其多抗的成功制备,为施马伦贝格病血清学检测方法的建立奠定了物质基础。
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关键词
施马伦贝格病毒
核衣壳蛋白
原核表达
多克隆抗体
免疫亲和层析
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职称材料
题名
施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
被引量：
11
1
作者
张永宁
吴绍强
吕继洲
冯春燕
王彩霞
袁向芬
邓俊花
林祥梅
Wernike Kerstin
机构
中国检验检疫科学
研究
院动物检疫
研究所
德国弗里德里希洛弗勒研究所
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1629-1636,共8页
基金
"十二五"国家科技支撑计划课题(2013BAD12B01)
国家质检总局科技计划项目(2013IK054)
中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项资金(2012JK011)
文摘
本研究旨在表达施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)的核衣壳蛋白(N),进而制备其多克隆抗体。以SBV(BH80株)的RNA为模板,RT-PCR扩增N基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-28a-c(+)中,获得pET-28a-SBV-N重组质粒。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达HisSBV-N融合蛋白。在非变性条件下用Ni-NTA柱纯化His-SBV-N,并以此为抗原免疫新西兰大白兔制备多抗。经免疫亲和层析纯化后,利用Western blot和间接免疫荧光对多抗进行鉴定。结果表明:(1)His-SBV-N融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中同时以可溶性和包涵体2种形式表达,相对分子质量约为30ku;(2)制备的多抗效价高达1∶64 000。该多抗不仅能与His-SBV-N融合蛋白发生特异性反应,而且还能识别SBV的不同毒株,但与布尼亚病毒科内亲缘关系最近的沙门达病毒(Shamonda virus)、道格拉斯病毒(Douglas virus)和赤羽病病毒(Akabane virus)的核衣壳蛋白存在交叉反应。His-SBV-N融合蛋白及其多抗的成功制备,为施马伦贝格病血清学检测方法的建立奠定了物质基础。
关键词
施马伦贝格病毒
核衣壳蛋白
原核表达
多克隆抗体
免疫亲和层析
Keywords
Schmallenberg virus （SBV）
nucleocapsid （N） protein
prokaryotic expression
poly- clonal antibodies
immunoaffinity chromatography
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
张永宁
吴绍强
吕继洲
冯春燕
王彩霞
袁向芬
邓俊花
林祥梅
Wernike Kerstin
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
11
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