医学微生物学大型课堂教学中辅助教学方法的比较研究

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作者 黎志东 古天乐 应旗康 《微生物学杂志》 北大核心 2025年第2期138-144,共7页

为比较医学微生物学大型课堂教学过程中两种不同辅助教学方法所取得的教学效果的差异,在针对三部分教学内容的4个课时的教学过程中,教师对两班本科生(人数分别为215人和204人)首先均采用“依据幻灯片进行讲授法”为主要教学方法、然后... 为比较医学微生物学大型课堂教学过程中两种不同辅助教学方法所取得的教学效果的差异,在针对三部分教学内容的4个课时的教学过程中,教师对两班本科生(人数分别为215人和204人)首先均采用“依据幻灯片进行讲授法”为主要教学方法、然后分别采用“教学视频法”或“同伴讨论法”为辅助教学方法开展教学活动。随后,就教学内容中7个重点知识对学生进行评估测试,以量化比较两种辅助教学方法在教学效果上的差别。发现采用教学视频法为辅助教学方法的班级学生平均成绩高于采用同伴讨论法。问卷调查显示,学生课堂以外的学习习惯对学习成绩无显著影响,说明课堂学习仍是学生学习医学微生物学知识的主渠道,教学方法对提高教学效果有重要影响。 展开更多

关键词 医学微生物学 大型课堂教学 辅助教学方法 教学视频法 同伴讨论法 比较研究

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医学微生物学教学中《生物安全法》的引介 被引量：5

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作者 黎志东 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2022年第4期123-128,共6页

医学微生物学是医学生所学全部课程中与生物安全关系最密切的课程之一,新近颁布施行的《生物安全法》中有多个主题与医学微生物学内容密切相关。阐述了在医学微生物学教学过程中,通过引介《生物安全法》的相关主题引导学生总结新发突发... 医学微生物学是医学生所学全部课程中与生物安全关系最密切的课程之一,新近颁布施行的《生物安全法》中有多个主题与医学微生物学内容密切相关。阐述了在医学微生物学教学过程中,通过引介《生物安全法》的相关主题引导学生总结新发突发传染病及动物源性传染病的概念、特点及危害,关注传染病的动物起源问题,了解生物恐怖、生物犯罪、微生物法医学的概念、特点及典型案例等,以此来巩固、加深及拓展学生对医学微生物学的理解和掌握,使学生逐渐树立起生物安全意识,从而提高教学效果。 展开更多

关键词 医学微生物学 生物安全法 引介 生物安全意识 教学效果

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病原微生物与肿瘤细胞共有的免疫逃逸机制及应用研究进展 被引量：3

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作者 郑伊婷 王文秋 +3 位作者 马瑞雪 韩明伟 吴兴安 刘蓉蓉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期858-862,共5页

致病菌、寄生虫、病毒感染的宿主细胞与肿瘤细胞之间存在共同的免疫逃逸机制,主要包括对抗宿主免疫系统、产生免疫抑制因子、改变或隐藏自身抗原、诱导肿瘤细胞进入休眠状态、将糖代谢重编程为有氧糖酵解过程(Warburg效应)等,能量代谢... 致病菌、寄生虫、病毒感染的宿主细胞与肿瘤细胞之间存在共同的免疫逃逸机制,主要包括对抗宿主免疫系统、产生免疫抑制因子、改变或隐藏自身抗原、诱导肿瘤细胞进入休眠状态、将糖代谢重编程为有氧糖酵解过程(Warburg效应)等,能量代谢模式的改变会导致肿瘤细胞的乳酸过度分泌从而导致宿主局部免疫力降低。病原体和肿瘤细胞共有的免疫逃逸机制在赋予各类病原体根本的生存能力,同时也可成为感染性疾病治疗中的新靶点,所以借鉴抑制乳酸分泌等癌症治疗策略,可干扰致病菌、寄生虫和病毒增殖所依赖的有氧糖酵解代谢重编程,最终达到治疗感染性及肿瘤相关性疾病的目的。 展开更多

关键词 免疫逃逸 病原体 肿瘤 代谢重编程 有氧糖酵解 综述

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模式识别受体NLRC3的生物学效应及在免疫相关疾病中的研究进展 被引量：2

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作者 萧颖畴 孙雯洁 +3 位作者 刘蓉蓉 吴兴安 党冬梅 罗颖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期376-382,共7页

固有免疫系统是宿主抵御病原微生物攻击的第一道防线.可以快速识别并产生免疫反应,清除致病微生物.然而,强烈的免疫反应可能会导致过度炎症,甚至自身免疫性疾病.含胱天蛋白酶活化和募集结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体3(NLRC3)位于细... 固有免疫系统是宿主抵御病原微生物攻击的第一道防线.可以快速识别并产生免疫反应,清除致病微生物.然而,强烈的免疫反应可能会导致过度炎症,甚至自身免疫性疾病.含胱天蛋白酶活化和募集结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体3(NLRC3)位于细胞质中,是固有免疫系统的重要负调节因子,可以抑制体内过度的免疫反应.NLRC3既能够通过影响核因子κB(NF-κB)和干扰素基因刺激因子(STING)相关信号通路,减少促炎细胞因子的产生;还能通过干扰含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)炎性体复合体的组装和活性来抑制炎症反应.此外,还可以通过调控磷脂酰肌醇激酶3/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/mTOR)等通路影响细胞的代谢、增殖、凋亡等生物学行为.NLRC3对细胞功能的这些调控作用,与感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等多种免疫相关性疾病的发生发展密切相关,通过调控NLRC3的表达可能成为治疗这些疾病的一个有效途径. 展开更多

关键词 模式识别受体(PRR) 含胱天蛋白酶活化和募集结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体3(NLRC3) 综述

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c-di-AMP为佐剂的重组卡介苗免疫对小鼠白色脂肪的调节作用

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作者 董梦娟 常宇骁 +8 位作者 宁唤唤 路延之 康健 徐铭泽 代婷 李嘉玲 郝乐冉 张琳娜 柏银兰 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第4期370-375,共6页

目的研究c-di-AMP为佐剂的重组卡介苗(rBCG)调节小鼠附睾白色脂肪(eWAT)代谢及免疫的作用和机制。方法SPF级雄性C57BL/6小鼠经静脉免疫卡介苗(BCG)和重组卡介苗(rBCG),监测小鼠体重变化。分离并称重小鼠eWAT重量,血球仪计血管基质成分(S... 目的研究c-di-AMP为佐剂的重组卡介苗(rBCG)调节小鼠附睾白色脂肪(eWAT)代谢及免疫的作用和机制。方法SPF级雄性C57BL/6小鼠经静脉免疫卡介苗(BCG)和重组卡介苗(rBCG),监测小鼠体重变化。分离并称重小鼠eWAT重量,血球仪计血管基质成分(SVFs)数量。制备小鼠脂肪组织切片,HE染色后显微镜下观察和比较各组小鼠eWAT脂肪细胞大小、数量和形态以及冠状结构(CLS)形成等变化。qRT-PCR检测各组小鼠脂肪代谢相关因子、细胞因子和衰老相关基因的转录水平。结果BCG和rBCG免疫小鼠体重随时间逐渐增加,rBCG免疫诱导eWAT比重增加,SVFs数量降低。HE染色结果显示,BCG免疫促进eWAT脂肪细胞增生和rBCG免疫促进脂肪细胞肥大,BCG和rBCG免疫均可诱导eWAT中CLS形成。qRT-PCR检测结果显示,rBCG免疫可抑制eWAT脂肪分解和能量消耗相关基因表达。BCG免疫对细胞因子转录作用影响不大,而rBCG可诱导IFN-γ和IL-1Ra显著表达,抑制IL-15和IL-2的转录,但不诱导衰老相关基因的表达。结论rBCG免疫可诱导eWAT脂肪细胞肥大,其机制与抑制eWAT脂肪分解及调节细胞因子表达有关。 展开更多

关键词 卡介苗 重组卡介苗 环二腺苷酸 白色脂肪 脂肪代谢 细胞因子

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结核分枝杆菌磷酸二酯酶重组腺病毒黏膜免疫诱导的免疫应答特点

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作者 代婷 路延之 +6 位作者 赵瑞华 宁唤唤 康健 郝乐冉 李嘉玲 常宇骁 柏银兰 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第1期1-8,共8页

目的结核分枝杆菌(Mtb)耐药菌株的流行加剧了结核病(TB)的全球负担,凸显了对新的TB治疗策略的需求。方法表达环二腺苷酸(c-di-AMP)分解酶磷酸二酯酶B(CnpB)的重组腺病毒疫苗(rAd-CnpB)经黏膜免疫正常小鼠,单独或联合药物免疫治疗Mtb呼... 目的结核分枝杆菌(Mtb)耐药菌株的流行加剧了结核病(TB)的全球负担,凸显了对新的TB治疗策略的需求。方法表达环二腺苷酸(c-di-AMP)分解酶磷酸二酯酶B(CnpB)的重组腺病毒疫苗(rAd-CnpB)经黏膜免疫正常小鼠,单独或联合药物免疫治疗Mtb呼吸道感染小鼠。ELISA检测小鼠血清及肺泡灌洗液(BALF)抗体水平,实时定量PCR检测小鼠肺组织中细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)转录水平,流式细胞术检测肺、脾CD4^(+)、CD8^(+)T细胞亚群细胞比例,ELISA检测脾细胞抗原刺激后的细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-10、炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌水平,平板计数法计数Mtb感染小鼠肺、脾的荷菌数。结果rAd-CnpB滴鼻免疫可诱导小鼠血清高滴度的IgG,以及BALF中IgG和IgA产生,肺、脾T淋巴细胞亚群改变。rAd-CnpB单独或联合药物治疗Mtb感染小鼠可诱导血清IgG水平、BALF中IgA和IgG水平显著增高,rAd-CnpB免疫促进Mtb感染小鼠的脾细胞CnpB抗原特异性的细胞因子和炎症因子分泌。rAd-CnpB单独或联合药物免疫治疗并不显著影响Mtb呼吸道感染小鼠肺、脾荷菌数。结论rAd-CnpB经黏膜免疫可诱导小鼠显著的黏膜、体液免疫反应,并显著增强Mtb感染小鼠中CnpB特异性细胞免疫应答。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌(Mtb) 环核苷酸磷酸二酯酶B(CnpB) 重组腺病毒 免疫治疗

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发热伴血小板减少综合征疫苗研究进展

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作者 姜东绅 王波波 +1 位作者 张芳琳 叶伟 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期322-330,338,共10页

发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)是由大别班达病毒(Dabie bandavirus,DBV)引起的一种急性传染病,病死率高,且报告病例数呈逐年稳步上升趋势。DBV主要由蜱虫叮咬传播,其流行范围正随着传播媒... 发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)是由大别班达病毒(Dabie bandavirus,DBV)引起的一种急性传染病,病死率高,且报告病例数呈逐年稳步上升趋势。DBV主要由蜱虫叮咬传播,其流行范围正随着传播媒介的扩散而逐步扩大,严重威胁人类健康。目前尚无预防性疫苗上市,世界卫生组织已将SFTS列为需要优先关注的传染病之一。本文基于近年来相关研究报道,对SFTS疫苗研究方向和进展作一综述,以期为DBV疫苗研发和疫病防控提供有益借鉴。 展开更多

关键词 大别班达病毒 发热伴血小板减少综合征病毒 发热伴血小板减少综合征 亚单位疫苗 重组载体疫苗 DNA疫苗 mRNA疫苗

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m6A甲基化修饰过程中关键分子对日本脑炎病毒复制增殖影响的研究

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作者 程治蓉 姚敏 +5 位作者 李雪云 柴超杰 党品香 王思雨 张芳琳 吕欣 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第2期150-157,共8页

目的 探讨N6-甲基腺苷酸(m6A)修饰中关键分子去甲基化酶—脂肪和肥胖相关蛋白(FTO)及甲基化转移酶—甲基转移酶样蛋白3(METTL3)对日本脑炎病毒(JEV)复制增殖的影响。方法 利用表达FTO及绿色荧光蛋白的重组慢病毒,感染Neuro2a(小鼠神经... 目的 探讨N6-甲基腺苷酸(m6A)修饰中关键分子去甲基化酶—脂肪和肥胖相关蛋白(FTO)及甲基化转移酶—甲基转移酶样蛋白3(METTL3)对日本脑炎病毒(JEV)复制增殖的影响。方法 利用表达FTO及绿色荧光蛋白的重组慢病毒,感染Neuro2a(小鼠神经母细胞瘤细胞),通过嘌呤霉素筛选获取稳定表达FTO细胞系,荧光显微镜观察绿色荧光表达,实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测细胞中FTO的表达情况。JEV分别感染对照组(空载体组)及实验组(过表达FTO)Neuro2a细胞。此外,用METTL3特异性抑制剂STM2457处理JEV感染的Neuro2a细胞。实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测JEV的复制、干扰素及相关分子表达。结果 FTO过表达细胞中FTO mRNA和蛋白水平均显著升高,且与对照组相比,JEV复制被显著抑制,同样的抑制效应也发生在抑制剂STM2457处理的JEV感染细胞组中,而且JEV感染后的FTO过表达细胞中干扰素及相关分子的表达显著增加。结论 抑制细胞的m6A甲基化修饰过程可抑制JEV的复制,进一步明确了甲基化修饰在JEV复制中的调控作用。 展开更多

关键词 脂肪和肥胖相关蛋白(FTO) 甲基转移酶样蛋白3(METTL3) m6A甲基化修饰 日本脑炎病毒 干扰素

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卡介苗用于小鼠黑色素瘤模型免疫治疗的效应及其机制

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作者 徐铭泽 宁唤唤 +8 位作者 路延之 康健 彭钰君 张婧瑶 胡家豪 代婷 董梦娟 薛飒 柏银兰 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第6期1420-1426,共7页

目的:探究卡介苗(BCG)和c-di-AMP为佐剂的重组卡介苗(rBCG)用于黑色素瘤小鼠的免疫治疗效果及机制。方法:构建小鼠黑色素瘤细胞B16F10腹股沟皮下注射荷瘤模型,分别采用1×10^(6)CFU BCG和rBCG皮下瘤旁注射免疫治疗3次,观察小鼠生存... 目的:探究卡介苗(BCG)和c-di-AMP为佐剂的重组卡介苗(rBCG)用于黑色素瘤小鼠的免疫治疗效果及机制。方法:构建小鼠黑色素瘤细胞B16F10腹股沟皮下注射荷瘤模型,分别采用1×10^(6)CFU BCG和rBCG皮下瘤旁注射免疫治疗3次,观察小鼠生存情况、肿瘤生长与转移情况;分离小鼠肿瘤组织制备细胞悬液,流式细胞术检测各免疫细胞比例;qRTPCR检测肿瘤组织免疫相关基因转录水平。结果:BCG和rBCG免疫治疗均可显著抑制小鼠黑色素瘤生长,延长小鼠生存时间,且rBCG免疫治疗抑制肿瘤转移的效果优于BCG。两菌株均可显著降低肿瘤生长和转移相关M2型巨噬细胞和髓源性抑制细胞比例。两菌株均能促进肿瘤组织淋巴细胞浸润,rBCG显著促进肿瘤组织B细胞浸润增加。BCG免疫治疗上调肿瘤转移相关细胞因子转录水平,而rBCG治疗并不影响上述基因转录。结论:BCG和rBCG免疫均对小鼠黑色素瘤具有治疗作用,c-diAMP为佐剂的rBCG抑制肿瘤转移的效果优于BCG,其作用机制与调节肿瘤组织内免疫应答水平有关。 展开更多

关键词 卡介苗 重组卡介苗 黑色素瘤 c-di-AMP 免疫治疗

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结核分枝杆菌c-di-AMP磷酸二酯酶重组腺病毒的构建及其诱导的体液免疫应答

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作者 胡家豪 宁唤唤 +7 位作者 董梦娟 路延之 代婷 张从玥 徐子晴 王姝予 周正言 柏银兰 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第4期364-369,共6页

目的构建表达结核分枝杆菌(M.tb)c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒(rAd)并检测其诱导的体液免疫应答。方法经密码子优化的M.tb CnpB编码基因克隆入质粒pcADV,获得的重组质粒pcADV-CnpB转染HEK293T细胞,并用Western blot鉴定表达。重... 目的构建表达结核分枝杆菌(M.tb)c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒(rAd)并检测其诱导的体液免疫应答。方法经密码子优化的M.tb CnpB编码基因克隆入质粒pcADV,获得的重组质粒pcADV-CnpB转染HEK293T细胞,并用Western blot鉴定表达。重组pcADV-CnpB与骨架质粒共转染HEK293T细胞包装获得重组腺病毒rAd-CnpB,以HEK293T细胞扩增rAd-CnpB,Western blot和免疫荧光检测rAd-CnpB表达目的蛋白。以rAd-CnpB滴鼻免疫小鼠,收集小鼠血清与肺泡灌洗液(BALF),ELISA检测抗原特异性抗体水平。结果酶切和测序鉴定表明重组质粒pcADV-CnpB构建成功,该质粒能够在真核细胞中表达。在HEK293T细胞内包装并获得rAd-CnpB,大量扩增并纯化获得滴度为5.53×10^(10) PFU/mL的rAd-CnpB。rAd-CnpB可在HEK293T细胞中表达目的蛋白CnpB。rAd-CnpB滴鼻免疫小鼠,可诱导BALF中CnpB特异性IgG与分泌型IgA水平的增加,同时诱导血清中产生高水平的CnpB特异性IgG。结论成功构建表达M.tb c-di-AMP磷酸二酯酶CnpB的重组腺病毒rAd-CnpB,并且rAd-CnpB经黏膜免疫可诱导抗原特异性体液免疫与黏膜免疫应答,可用于结核病新疫苗的研究。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 重组腺病毒 c-di-AMP 磷酸二酯酶 黏膜免疫

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基于O-PIRTAS翻转课堂探讨我校《免疫与感染基础》模块教学新模式 被引量：4

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作者 刘赫 张惠 +5 位作者 马宏炜 吕欣 雷迎峰 王芳 张芳琳 程林峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期761-766,共6页

《医学微生物学》和《医学免疫学》是我校《免疫与感染基础》模块化教学中的重要组成部分。其中,《细菌的感染与免疫》是连接《医学微生物学》与《医学免疫学》的桥梁章节。该章节主要介绍致病菌如何侵入机体导致感染,以及机体免疫系统... 《医学微生物学》和《医学免疫学》是我校《免疫与感染基础》模块化教学中的重要组成部分。其中,《细菌的感染与免疫》是连接《医学微生物学》与《医学免疫学》的桥梁章节。该章节主要介绍致病菌如何侵入机体导致感染,以及机体免疫系统如何抵抗细菌感染,通过学习可以帮助学生构建“感染-免疫”知识框架。然而,该章节内容庞杂,课程时长有限,传统教学模式难以帮助学生理清知识脉络,教学效果较差,急需进行变革。作者以《细菌的感染与免疫》章节为例,探讨基于通用教学环节(O-PIRTAS)翻转课堂模式下的《免疫与感染基础》模块教学改革,为后续教学改革提供宝贵的经验。 展开更多

关键词 O-PIRTAS翻转课堂 细菌的感染与免疫 教学设计 教学模式

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八年制医学整合课程《感染与免疫前沿进展》的教学实践与思考 被引量：2

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作者 雷迎峰 吕欣 +5 位作者 柏银兰 庄然 徐志凯 张瑞 陈丽华 张芳琳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1050-1054,共5页

医学整合课程是现代医学教育模式发展变革的重要模式之一,以模块为单元的整合课程对知识、能力与素质目标提出了更高要求。空军军医大学八年制医学整合课程《感染与免疫前沿进展》教学改革实践包括教学内容的选择与整合,多种教学方法的... 医学整合课程是现代医学教育模式发展变革的重要模式之一,以模块为单元的整合课程对知识、能力与素质目标提出了更高要求。空军军医大学八年制医学整合课程《感染与免疫前沿进展》教学改革实践包括教学内容的选择与整合,多种教学方法的创新应用,多元化教学评估与反馈和教学团队建设。该课程不仅拓展了学生的知识深度,促进学生的能力发展,还提升了学生的综合素养和国际视野,培养的高素质医学人才能够适应未来医学发展需要。 展开更多

关键词 八年制医学整合课程 感染与免疫前沿进展 教学内容 教学评估 教学团队

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3-脱氮腺苷(3-DAA)加速小鼠及仓鼠细胞日本脑炎病毒复制并下调炎症因子水平 被引量：2

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作者 李雪云 姚敏 +4 位作者 李越香 程治蓉 张世哲 张芳琳 吕欣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期235-243,共9页

目的利用N_(6)-甲基腺苷酸(m^(6)A)甲基化修饰抑制剂3-脱氮腺苷(3-DAA)初步明确其对日本脑炎病毒(JEV)复制的影响。方法JEV分别感染Neuro2a小鼠神经母细胞瘤细胞、N9小鼠小胶质细胞和BHK幼仓鼠肾传代细胞,然后用3-DAA处理;在C57BL/6成... 目的利用N_(6)-甲基腺苷酸(m^(6)A)甲基化修饰抑制剂3-脱氮腺苷(3-DAA)初步明确其对日本脑炎病毒(JEV)复制的影响。方法JEV分别感染Neuro2a小鼠神经母细胞瘤细胞、N9小鼠小胶质细胞和BHK幼仓鼠肾传代细胞,然后用3-DAA处理;在C57BL/6成年小鼠足底接种JEV,腹腔注射3-DAA。实时定量PCR检测细胞与小鼠脑组织中JEV,白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)、α干扰素(IFN-α)、IFN-β、IFN-γ、CXC趋化因子配体10(CXCL10)的mRNA表达,Western blot法检测细胞及小鼠脑组织中JEV蛋白表达,观察小鼠生存情况,并通过HE染色检测小鼠脑部病理变化。结果3-DAA可剂量依赖性的促进JEV在小鼠和仓鼠细胞及小鼠脑组织的核酸复制与蛋白表达,显著加速JEV感染小鼠的发病进程,降低小鼠生存率。3-DAA的处理下调IL-6、TNF-α、CXCL10、IL-1β、iNOS多种炎症因子的表达,免疫反应减弱。结论3-DAA促进JEV感染,加速被感染细胞及小鼠死亡,提示m^(6)A修饰可能对JEV复制起负向调控作用。 展开更多

关键词 3-脱氮腺苷(3-DAA) N^(6)-甲基腺苷酸(m^(6)A) 日本脑炎病毒(JEV) 复制

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结核分枝杆菌双组分系统PhoP蛋白的免疫学特性 被引量：1

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作者 李雪 宁唤唤 +6 位作者 康健 徐铭泽 崔若囡 代婷 路延之 薛飒 柏银兰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期352-358,共7页

目的探究结核分枝杆菌双组分系统PhoP蛋白的免疫学特性。方法采用生物信息学方法预测PhoP蛋白的B细胞和T细胞表位。将Mtb H37Rv phoP基因克隆到pET-28a(+)原核表达载体上,并将重组质粒转化到E.coli BL21菌株中,经IPTG诱导表达及亲和层... 目的探究结核分枝杆菌双组分系统PhoP蛋白的免疫学特性。方法采用生物信息学方法预测PhoP蛋白的B细胞和T细胞表位。将Mtb H37Rv phoP基因克隆到pET-28a(+)原核表达载体上,并将重组质粒转化到E.coli BL21菌株中,经IPTG诱导表达及亲和层析法纯化获得PhoP重组蛋白。用ELISA分析Mtb感染小鼠和TB患者血清中PhoP特异性抗体水平。PhoP重组蛋白经肌肉注射途径免疫小鼠,分离小鼠多抗血清,用ELISA和Western blot分别检测抗体效价和抗体特异性。分离小鼠脾细胞,用ELISpot和ELISA法分别检测分泌IFN-γ细胞频数及其分泌水平。结果经生物信息学预测发现PhoP含有24个B细胞抗原表位和11个优势T细胞表位。成功构建PhoP原核表达载体并获得纯化的PhoP蛋白。Mtb感染小鼠和TB患者血清中的PhoP特异性抗体显著升高,查准率分别为99.9%和82.5%,特异度均为100%。PhoP免疫小鼠诱导产生高水平特异性抗体,免疫小鼠脾细胞经抗原体外刺激后,IFN-γ的分泌水平和细胞频数均显著增加,IL-2和IL-10分泌水平上调。结论PhoP蛋白可诱导体液免疫应答和Th1型为主的细胞免疫。PhoP蛋白有良好的免疫原性,且具有一定的TB诊断效能。本研究为阐明PhoP在Mtb感染中的作用及其用于TB诊断奠定了一定的基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 双组分系统 PHOP 体液免疫应答 细胞免疫应答

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核苷酸结合寡聚结构域样受体(NLR)在免疫代谢中的研究进展 被引量：1

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作者 杨紫薇 孙雯洁 +6 位作者 丁亚鑫 马瑞雪 吕云华 刘梓谕 侯诗源 刘蓉蓉 吴兴安 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期729-736,共8页

固有免疫中的核苷酸结合寡聚结构域样受体(NLR)家族对免疫功能的发挥起着至关重要的作用。含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、核苷酸结合寡聚结构域样受体X1(NLRX1)和含CRAD结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体... 固有免疫中的核苷酸结合寡聚结构域样受体(NLR)家族对免疫功能的发挥起着至关重要的作用。含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、核苷酸结合寡聚结构域样受体X1(NLRX1)和含CRAD结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRC3)是NLR家族中的关键成员,它们与免疫代谢之间的关联成为研究的新焦点。NLRP3的激活可促进炎性小体的组装,导致白细胞介素1β(IL-1β)的激活,进而引发炎症反应。NLRC3则能抑制核因子κB(NF-κB)和干扰素基因刺激物/TANK结合激酶1(STING/TBK1)信号通路的激活,以及炎性小体的形成,进而调控免疫反应。而NLRX1则通过调节Ⅰ型干扰素、NF-κB信号传导以及自噬等过程,对免疫应答进行精细调控。这些NLR成员不仅参与病原体的识别,更与免疫代谢的调控密切相关。对NLR家族的深入研究将有助于揭示免疫代谢的奥秘,为疾病的治疗提供新的思路。 展开更多

关键词 免疫代谢 核苷酸结合寡聚结构域样受体(NLR) 含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3) 含CRAD结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRC3) 核苷酸结合寡聚结构域样受体X1(NLRX1) 综述

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小鼠抗西方马脑炎病毒E2蛋白胞外区(E2ecto)单克隆抗体的制备

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作者 武福星 董阳超 +6 位作者 张剑 薛潘 袁若栋 陈洋 元航 李宝莉 雷迎峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期62-68,共7页

目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通... 目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通过变性、复性、超滤等制备得到E2ecto蛋白;以QuickAntibody-Mouse5W为佐剂,将E2ecto蛋白肌肉免疫BALB/c小鼠,间隔21 d加强1次。免疫后35 d,取效价超过1×104的小鼠腹腔接种1次E2ecto蛋白,3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。通过有限稀释法筛选稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,接种小鼠腹腔后制备腹水;利用ELISA检测抗体亚型及腹水中抗体效价的水平;将真核表达质粒pCAGGS-WEEV-CE3E2E1转染BHK-21细胞,通过免疫荧光法(IFA)鉴定上述mAb的生物学活性;利用东方马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)的E2ecto蛋白进行ELISA鉴定上述抗体的特异性。结果成功表达及复性获得了纯化的WEEV E2ecto蛋白;制备了3G6G10、3D7G2、3B9E8、3D5B7四株mAb,其亚型分别为IgG2c(κ)、IgM(κ)、IgM(κ)、IgG1(κ);3G6G10、3B9E8、3D7G2腹水抗体效价均为105,3D5B7达到107;该4株抗体与VEEV和EEEV等其他脑炎甲病毒无交叉反应。结论成功制备了4株特异性结合WEEVE2ecto的小鼠mAb。 展开更多

关键词 西方马脑炎病毒(WEEV) E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto) 原核表达 单克隆抗体(mAb)

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小鼠抗寨卡病毒包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体的制备

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作者 薛潘 董阳超 +7 位作者 武福星 陈洋 张剑 元航 武苏闪 袁若栋 李宝莉 雷迎峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期447-454,共8页

目的制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法首先构建ZIKV Eecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表... 目的制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法首先构建ZIKV Eecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表达,经过变性、复性和超滤获得纯化的蛋白。将Eecto蛋白3次免疫后,获得多克隆抗体血清,进行效价测定,并利用ZIKV prME真核表达质粒转染的HEK293T细胞进行Western blot法和免疫荧光法分析。取效价较高的小鼠脾脏制备脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法获取分泌抗体的杂交瘤细胞,并进一步制备腹水。对腹水进行抗体效价测定、亚类分析。以ZIKV同属病毒日本脑炎病毒(JEV)、黄热病病毒(YFV)、登革病毒1-4(DENV1-4)、蜱传脑炎病毒(TBEV)的Eecto为包被抗原,利用ELISA分析ZIKV单克隆抗体的交叉反应性,进一步对效价高、特异性强的抗体进行特异性分析。结果成功构建了原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,并获得纯化的Eecto蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性;制备筛选得到1D6、4F11、4H7、4F8四株单克隆抗体,其中三株(1D6、4H7、4F8)为IgGκ型抗体,一株(4F11)为IgMκ,1D6腹水效价大于1∶108;其中1D6和4H7为ZIKV特异性抗体,与其他黄病毒无交叉反应。结论成功制备了小鼠抗ZIKV Eecto单克隆抗体,为后续建立ZIKV检测方法及致病机制研究提供了实验材料。 展开更多

关键词 寨卡病毒(ZIKV) 包膜蛋白胞外区(Eecto) 原核表达 单克隆抗体

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汉滩病毒(HTNV)感染正常人肺上皮细胞及其固有免疫与代谢改变 被引量：1

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作者 丁亚鑫 侯诗源 +5 位作者 孙丹妮 康华瑞 马晓晗 刘梓谕 刘蓉蓉 吴兴安 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期385-394,共10页

目的确定汉滩病毒(HTNV)可感染BEAS-2B正常人肺上皮细胞并通过转录组分析HTNV感染诱导的宿主免疫应答和代谢改变。方法采用蛋白免疫印迹、实时荧光定量PCR和免疫荧光实验检测BEAS-2B细胞内的病毒载量,并使用RNA测序技术进行转录组分析... 目的确定汉滩病毒(HTNV)可感染BEAS-2B正常人肺上皮细胞并通过转录组分析HTNV感染诱导的宿主免疫应答和代谢改变。方法采用蛋白免疫印迹、实时荧光定量PCR和免疫荧光实验检测BEAS-2B细胞内的病毒载量,并使用RNA测序技术进行转录组分析。结果在HTNV感染的BEAS-2B细胞中,HTNV核衣壳蛋白(NP)和小片段(S)表达均随时间增加。对HTNV感染BEAS-2B细胞48 h的转录组数据分析,得到328个差异基因,基因本体论(GO)富集及京东基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析发现其差异主要集中在干扰素应答及固有免疫模式识别受体相关通路。通过蛋白质互作网络分析发现多个固有免疫应答相关基因,此外筛选到4个编码去整合素和具有血小板反应蛋白基序的金属蛋白酶的基因。通过对代谢通路分析发现3个与萜类骨架生物合成相关的基因,2个与糖酵解/糖异生相关基因和2个类固醇激素生物合成相关基因。此外,差异基因的亚细胞定位分析表明多个差异基因位于线粒体。结论HTNV能有效感染BEAS-2B细胞,可作为体外HTNV感染人肺上皮的细胞模型。生物信息学方法筛选的HTNV感染相关的差异基因及代谢通路,可为研究HTNV感染的分子机制提供理论依据。 展开更多

关键词 汉滩病毒(HTNV) 生物信息学 固有免疫应答 代谢

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脑膜免疫在病毒感染性疾病中的作用研究进展

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作者 元航 李梦苑 +1 位作者 雷迎峰 张欠欠 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期849-853,共5页

大脑是受血脑屏障保护的中枢神经系统,脑实质被由外到内的三层重叠的硬脑膜、蛛网膜和软脑膜所包裹,这些膜统称为脑膜。近年来一系列突破性研究发现,脑膜中存在淋巴系统及免疫细胞,参与脑脊液及外周血液的物质交换,发挥免疫监视作用,提... 大脑是受血脑屏障保护的中枢神经系统,脑实质被由外到内的三层重叠的硬脑膜、蛛网膜和软脑膜所包裹,这些膜统称为脑膜。近年来一系列突破性研究发现,脑膜中存在淋巴系统及免疫细胞,参与脑脊液及外周血液的物质交换,发挥免疫监视作用,提示大脑不再是与外周免疫相互隔离的“免疫豁免器官”。基于脑膜的独特位置、结构组成以及脑膜免疫细胞的功能特征,脑膜免疫如何在稳态和病理条件下影响中枢神经系统的功能逐渐成为研究热点,为中枢神经系统疾病的致病机制和干预靶点提供了新的方向。本文将对脑膜免疫的基本构成和功能进行综述,并主要总结了脑膜免疫在不同病毒感染性疾病中的作用及进展。 展开更多

关键词 脑膜免疫 病毒感染 中枢神经系统 综述

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小鼠流行性乙型脑炎疾病进展中反应性星形胶质细胞活化模式的变化及干预

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作者 周子清 李婧 +5 位作者 王小可 思越 朱旭东 雷迎峰 马宏炜 张芳琳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期303-310,共8页

目的 明确星形胶质细胞活化模式与流行性乙型脑炎疾病进展的关系。方法 首先通过足垫注射乙型脑炎病毒(JEV)构建流行性乙型脑炎小鼠模型,采用免疫荧光技术(IFA)检测JEV非结构蛋白3(NS3)在小鼠全脑的表达情况;进一步利用IFA、 RNA测序技... 目的 明确星形胶质细胞活化模式与流行性乙型脑炎疾病进展的关系。方法 首先通过足垫注射乙型脑炎病毒(JEV)构建流行性乙型脑炎小鼠模型,采用免疫荧光技术(IFA)检测JEV非结构蛋白3(NS3)在小鼠全脑的表达情况;进一步利用IFA、 RNA测序技术(RNA-seq)、实时定量PCR明确流行性乙型脑炎发病不同阶段星形胶质细胞活化模式的变化;最后,通过侧脑室注射鸢尾素(irisin)调控补体C3阳性A1型星形胶质细胞、 S100钙结合蛋白A10(S100A10)阳性的A2型星形胶质细胞活化比例,探索其是否可改善乙型脑炎模型小鼠的体质量、行为学评分及脑组织损伤情况。结果 流行性乙型脑炎模型组小鼠的M1、 M2等运动皮层脑区和海马组织中NS3蛋白显著增加。上述区域胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性星形胶质细胞的数目和体积较对照组也显著增加,其中JEV感染后与A1/A2型星形胶质细胞活化相关的基因均显著升高。侧脑室或者腹腔注射irisin虽不能改善流行性乙型脑炎预后,但可在一定程度上抑制A1型星形胶质细胞活化,减轻神经炎症。结论 JEV主要感染小鼠的运动皮质和海马神经元,且星形胶质细胞异常激活导致神经炎症损伤。Irisin可能抑制A1型星形胶质细胞激活,减轻JEV感染后的神经炎症。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 星形胶质细胞 A1型星形胶质细胞 A2型星形胶质细胞 C3 S100A10

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