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抗真菌内切几丁质酶酶学性质及制备低聚壳寡糖功能分析
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作者 赵节昌 王启源 +4 位作者 宋珂昕 陈腾 王峰 杨杰 高兆建 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第5期49-58,共10页
为开发几丁质及壳聚糖生物转化活性寡聚糖并实现几丁质酶在食品防腐及生防方面的应用,从金色链霉菌(Streptomyces aureofaciens)XZ-Sa62中分离纯化几丁质酶(ChiA-Sa62),并研究其生物转化及抗菌功能。本实验采用Q-Sepharose Fast Flow、S... 为开发几丁质及壳聚糖生物转化活性寡聚糖并实现几丁质酶在食品防腐及生防方面的应用,从金色链霉菌(Streptomyces aureofaciens)XZ-Sa62中分离纯化几丁质酶(ChiA-Sa62),并研究其生物转化及抗菌功能。本实验采用Q-Sepharose Fast Flow、Sephadex G-100层析和反相高效液相色谱纯化ChiA-Sa62,经纯化后ChiA-Sa62纯化倍数为41.3倍,比活力为1119.8 U/mg。并采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱测得ChiA-Sa62是分子质量为62.55 kDa的单亚基蛋白。ChiA-Sa62在50℃和pH 5.0的条件下,活性最高,并在60℃以下及pH 3.0~9.0范围内有良好稳定性。金属盐离子Ca^(2+)、Mn^(2+)、Mg^(2+)和Co^(2+)可激活酶活性。ChiA-Sa62对几丁质及脱乙酰度75%的壳聚糖具有专一内切水解活性,薄层色谱显示,水解产物分别为2~5个N-乙酰氨基葡萄糖单位的几丁寡糖和2~4个D-氨基葡萄糖单位的壳寡糖。ChiA-Sa62对底物胶体几丁质的米氏常数K_m和最大反应速率V_(max)值分别为2.75 mg/mL和64.52 U/mg。ChiA-Sa62可强烈抑制所试病原真菌菌丝生长;碘化丙啶染色显示,经ChiA-Sa62处理后的灰葡萄孢菌丝其细胞膜受到破坏。水解产物壳寡糖对致病性G^(-)菌(大肠杆菌和铜绿假单胞菌)和G~+菌(金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌)有抑制作用,并且LIVE/DEAD染色显示壳寡糖可致使金黄色葡萄球菌死亡。本实验结果表明,Chi A-Sa62几丁质及壳聚糖在生物转化以及食品防腐及生物防治方面具有较大的应用潜力。 展开更多
关键词 几丁质酶 金色链霉菌 酶学特性 生物转化 抗真菌活性
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亚临界水萃取蛹虫草蛋白及其功能特性研究 被引量:1
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作者 杨文雅 张海晖 +3 位作者 杨杰 王海刚 曲文娟 段玉清 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期23-27,共5页
以蛹虫草为原料,通过单因素试验和响应面试验对亚临界水萃取蛹虫草蛋白的工艺条件进行优化并对其功能特性进行评价。结果表明:亚临界水萃取蛹虫草蛋白最佳工艺条件为萃取温度140℃、萃取时间20 min、水料比40∶1、萃取p H 8,在最佳工艺... 以蛹虫草为原料,通过单因素试验和响应面试验对亚临界水萃取蛹虫草蛋白的工艺条件进行优化并对其功能特性进行评价。结果表明:亚临界水萃取蛹虫草蛋白最佳工艺条件为萃取温度140℃、萃取时间20 min、水料比40∶1、萃取p H 8,在最佳工艺条件下,蛹虫草蛋白得率达33.25%;蛹虫草蛋白乳化性为103.63 m2/g,乳化稳定性为83.94%,起泡性为70.10%,泡沫稳定性为35.47%,持水性为5.95 g/g,持油性为4.12 g/g,溶解度为63.77%。传统热水浸提蛹虫草蛋白提取时间和得率分别为5 h和28.13%,与此相比亚临界水萃取蛹虫草蛋白具有明显优势,且对蛹虫草蛋白功能特性未造成不利影响。 展开更多
关键词 蛹虫草 蛹虫草蛋白 亚临界水萃取 功能特性
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蛹虫草退化菌株的生理生化特征 被引量:7
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作者 周思池 邹根 +5 位作者 杨占山 鲍大鹏 姚威威 杨杰 汪滢 李晓玲 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期23-28,共6页
为了初步鉴定蛹虫草(Cordyceps militaris)退化菌株的生理生化特征,采用倒置显微镜、扫描电子显微镜观察蛹虫草退化菌株与正常菌株的形态特征,分别用高效液相色谱(HPLC)、氟硼二吡咯(BODIPY)脂滴染色、荧光定量PCR测定腺苷与虫草素含量... 为了初步鉴定蛹虫草(Cordyceps militaris)退化菌株的生理生化特征,采用倒置显微镜、扫描电子显微镜观察蛹虫草退化菌株与正常菌株的形态特征,分别用高效液相色谱(HPLC)、氟硼二吡咯(BODIPY)脂滴染色、荧光定量PCR测定腺苷与虫草素含量、脂质含量、细胞自噬相关基因的表达水平。结果表明:蛹虫草退化菌株的菌丝体分枝多、畸形,呈弯曲的不规则状;退化菌株的菌丝中腺苷含量比正常菌株的低30.23%,两者发酵液中的腺苷含量无差异,而退化菌株的菌丝和发酵液中均未检测到虫草素;退化菌株的荧光亮度明显低于正常菌株;细胞自噬相关基因Atg13、Atg18、Atg22、Atg22-2表达量在退化菌株中上升,退化菌株比正常菌株分别上升了432.19%、170.45%、336.06%、61.01%;Atg17呈下调表达,退化菌株比正常菌株下调了65.28%,两者Atg28的表达量无差异。 展开更多
关键词 蛹虫草 菌株退化 腺苷 虫草素 脂质 自噬相关基因
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灰绿青霉阿魏酸酯酶的分离纯化和酶学性质研究
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作者 徐大伟 高兆建 +3 位作者 张铁柱 杨杰 王东星 杜永凯 《安徽农业科学》 CAS 2016年第15期24-27,30,共5页
[目的]研究青霉(Penicillium glaucum)XGY36胞外产阿魏酸酯酶的纯化和酶学性质。[方法]菌株胞外产酶发酵液经硫酸铵沉淀、DEAE-cellulose DE52离子交换柱层析、Sephadex-G75分子筛层析进行纯化,得到纯度较高的酶蛋白,并对其酶学性质进... [目的]研究青霉(Penicillium glaucum)XGY36胞外产阿魏酸酯酶的纯化和酶学性质。[方法]菌株胞外产酶发酵液经硫酸铵沉淀、DEAE-cellulose DE52离子交换柱层析、Sephadex-G75分子筛层析进行纯化,得到纯度较高的酶蛋白,并对其酶学性质进行研究。[结果]从菌株发酵液中分离纯化到电泳纯的阿魏酸酯酶,纯化倍数6.54,酶活性回收59.7%。阿魏酸酯酶经SDS-PAGE获得1个条带,其表观分子量为36.5 ku。催化底物阿魏酸乙酯的最适反应温度为50℃,最适p H为5.0。阿魏酸酯酶在60℃以下和p H 3.0~7.0范围内稳定。金属离子Zn^(2+)、Mg^(2+)、Ca^(2+)对酶有明显的激活作用,而Pb^(2+)、Hg^(2+)和Ag+对阿魏酸酯酶有强烈的抑制作用,Na+、K+、Mn^(2+)、Cu^(2+)和Fe^(2+)对酶活的影响不大。[结论]青霉阿魏酸酯酶具有潜在的应用价值,适合应用于食品、医药及生物等领域。 展开更多
关键词 灰绿青霉 阿魏酸酯酶 纯化 酶学性质
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