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猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达
被引量：
5
1
作者
包新奇
黄绍华
+5 位作者
刘巧荣
孙明
杨璐
申屠芬琴
康立平
陈西钊
《中国比较医学杂志》
CAS
2012年第3期12-16,共5页
目的分段表达伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)gB基因,用于PRV疫苗免疫抗体评估试剂盒研究。方法分析gB抗原表位,设计4对特异性引物,从PRV新疆分离株中扩增gB基因的4个片段,分别命名为gB-1、gB-3、gB-4和gB-5基因,克隆到pGEM-T-easy...
目的分段表达伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)gB基因,用于PRV疫苗免疫抗体评估试剂盒研究。方法分析gB抗原表位,设计4对特异性引物,从PRV新疆分离株中扩增gB基因的4个片段,分别命名为gB-1、gB-3、gB-4和gB-5基因,克隆到pGEM-T-easy载体并测序。再将4个gB基因片段融合到pGEX-6P-1原核表达载体中,表达并纯化。Western Blotting进行重组蛋白的抗原性检测。以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法,检测猪血清临床样品。结果构建的4种表达质粒均可在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE分析,表达分子量分别为75.05、53.86、49.96和49.72×103Da,其中gB-3、gB-4和gB-5表达量较高,表达产物主要存在于包涵体中。Western Bloting鉴定显示,4种融合蛋白均可被猪伪狂犬阳性血清特异识别。以gB-3、gB-4和gB-5建立的ELISA方法与IDEXX公司的gB-ELISA试剂盒符合率分别为40.9%、81.8%和81.8%。结论本研究成功表达了PRV的gB-1、gB-3、gB-4和gB-5重组蛋白,gB-3、gB-4和gB-5表达量较高;其中以gB-4和gB-5建立的间接ELISA方法与IDEXX公司的符合率较高。
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关键词
PRV
GB
分段表达
ELISA
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职称材料
题名
猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达
被引量：
5
1
作者
包新奇
黄绍华
刘巧荣
孙明
杨璐
申屠芬琴
康立平
陈西钊
机构
江苏省疾病预防控制中心
徐州市高校兽医站
北京世纪元亨动物防疫技术有限公司
中国动物疫病预防控制中心
出处
《中国比较医学杂志》
CAS
2012年第3期12-16,共5页
文摘
目的分段表达伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)gB基因,用于PRV疫苗免疫抗体评估试剂盒研究。方法分析gB抗原表位,设计4对特异性引物,从PRV新疆分离株中扩增gB基因的4个片段,分别命名为gB-1、gB-3、gB-4和gB-5基因,克隆到pGEM-T-easy载体并测序。再将4个gB基因片段融合到pGEX-6P-1原核表达载体中,表达并纯化。Western Blotting进行重组蛋白的抗原性检测。以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法,检测猪血清临床样品。结果构建的4种表达质粒均可在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE分析,表达分子量分别为75.05、53.86、49.96和49.72×103Da,其中gB-3、gB-4和gB-5表达量较高,表达产物主要存在于包涵体中。Western Bloting鉴定显示,4种融合蛋白均可被猪伪狂犬阳性血清特异识别。以gB-3、gB-4和gB-5建立的ELISA方法与IDEXX公司的gB-ELISA试剂盒符合率分别为40.9%、81.8%和81.8%。结论本研究成功表达了PRV的gB-1、gB-3、gB-4和gB-5重组蛋白,gB-3、gB-4和gB-5表达量较高;其中以gB-4和gB-5建立的间接ELISA方法与IDEXX公司的符合率较高。
关键词
PRV
GB
分段表达
ELISA
Keywords
PRV
gB
Fractional expression
ELISA
分类号
R332 [医药卫生—人体生理学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达
包新奇
黄绍华
刘巧荣
孙明
杨璐
申屠芬琴
康立平
陈西钊
《中国比较医学杂志》
CAS
2012
5
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参考文献
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