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长链非编码RNANEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的影响
1
作者
唐志铭
丁继存
+4 位作者
陆鹭
单霄
王咏露
鹿晓兰
荆梦晴
《临床皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期75-83,共9页
目的:探讨LncRNA NEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的调控及对HaCaT细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用PCR、Western印迹法检测HaCat细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK细胞)中LncRNANEAT1、miR-485-5p及STAT3 mRNA和蛋白表达情...
目的:探讨LncRNA NEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的调控及对HaCaT细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用PCR、Western印迹法检测HaCat细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK细胞)中LncRNANEAT1、miR-485-5p及STAT3 mRNA和蛋白表达情况。荧光原位杂交技术(FISH)和双荧光素酶报告基因检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p和STAT3之间的靶向调控关系。再通过RNA干扰技术分别沉默HaCat细胞中LncRNANEAT1、STAT3表达,以及转染miR-485-5p模拟剂(mimic)和抑制剂(inhibitor)分别上、下调miR-485-5p,然后应用PCR、Western Blot、流式细胞术、CCK8等实验技术分别检测LncRNANEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及细胞增殖、凋亡情况。结果:与NHEK细胞组相比,LncRNA NEAT1和STAT3在HaCaT细胞组中高表达,而miR-485-5p在HaCaT细胞中低表达;miR-485-5p与LncRNA NEAT1共定位于HaCaT细胞质,且miR-485-5p与LncRNA NEAT1 3′-UTR、STAT3 3′-UTR之间存在互补结合序列;共转染转野生型psiCHECK-LncRNA NEAT1-3′UTR-WT、psiCHECK-STAT3-3′UTR-WT重组质粒时,miR-485-5pmimic组相对萤光素酶活性明显低于miR-NC组。而共转染突变型psiCHECK-LncRNANEAT1-3′UTR-MUT、psiCHECK-STAT3-3′UTR-MUT重组载体质粒时,miR-485-5p mimic组和miR-NC组萤光素酶活性无明显差异;沉默LncRNA NEAT1或STAT3均可抑制HaCaT细胞增殖及促进其凋亡;下调miR-485-5p可促进HaCaT细胞增殖及抑制其凋亡,而上调miR-485-5p则与之相反;下调miR-485-5p可减弱沉默LncRNANEAT1对HaCaT细胞功能的影响。结论:LncRNANEAT1可通过充当竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)吸附miR-485-5p增强STAT3表达来促进HaCaT细胞增殖并抑制其凋亡。
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关键词
HACAT细胞
银屑病
LncRNA
NEAT1
miR-485-5p
STAT3
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职称材料
MicroRNA-21对瘢痕疙瘩成纤维细胞mTOR信号通路的调控作用研究
被引量：
3
2
作者
唐志铭
翟晓翔
+3 位作者
丁继存
荆梦晴
陆鹭
尹新江
《临床皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第8期454-459,共6页
目的:探讨MicroRNA(miR)-21对瘢痕疙瘩成纤维细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控作用及机制。方法:应用miR-21抑制物(inhibitor)及阴性对照(NC)序列转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞后,反转录(RT)-PCR检测miR-21及10号染色体张力...
目的:探讨MicroRNA(miR)-21对瘢痕疙瘩成纤维细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控作用及机制。方法:应用miR-21抑制物(inhibitor)及阴性对照(NC)序列转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞后,反转录(RT)-PCR检测miR-21及10号染色体张力缺失蛋白磷酸酶(PTEN)mRNA表达水平;western blot检测mTOR信号通路关键分子PTEN、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶BPKB(p-Akt,又称Akt)及p-mTOR蛋白的表达。生物信息学方法预测miR-21与PTEN mRNA 3′-UTR结合位点,并用双萤光素酶报告基因验证miR-21对PTEN mRNA的靶向作用;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖。结果:miR-21能够靶向调控PTEN mRNA表达,抑制miR-21表达可导致PTEN的mRNA和蛋白表达增加,进而抑制p-Akt及p-mTOR蛋白的表达,从而抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖。结论:miR-21可通过靶基因PTEN调控瘢痕疙瘩成纤维细胞mTOR信号通路关键分子p-Akt和p-mTOR的表达。
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关键词
MICRORNA-21
瘢痕疙瘩
成纤维细胞
MTOR信号通路
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职称材料
题名
长链非编码RNANEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的影响
1
作者
唐志铭
丁继存
陆鹭
单霄
王咏露
鹿晓兰
荆梦晴
机构
徐州市
中
医院
皮肤
科
徐州市第一人民医院烧伤整形科
出处
《临床皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期75-83,共9页
基金
江苏省中医药科技发展计划项目(YB2020049)资助项目。
文摘
目的:探讨LncRNA NEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的调控及对HaCaT细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用PCR、Western印迹法检测HaCat细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK细胞)中LncRNANEAT1、miR-485-5p及STAT3 mRNA和蛋白表达情况。荧光原位杂交技术(FISH)和双荧光素酶报告基因检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p和STAT3之间的靶向调控关系。再通过RNA干扰技术分别沉默HaCat细胞中LncRNANEAT1、STAT3表达,以及转染miR-485-5p模拟剂(mimic)和抑制剂(inhibitor)分别上、下调miR-485-5p,然后应用PCR、Western Blot、流式细胞术、CCK8等实验技术分别检测LncRNANEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及细胞增殖、凋亡情况。结果:与NHEK细胞组相比,LncRNA NEAT1和STAT3在HaCaT细胞组中高表达,而miR-485-5p在HaCaT细胞中低表达;miR-485-5p与LncRNA NEAT1共定位于HaCaT细胞质,且miR-485-5p与LncRNA NEAT1 3′-UTR、STAT3 3′-UTR之间存在互补结合序列;共转染转野生型psiCHECK-LncRNA NEAT1-3′UTR-WT、psiCHECK-STAT3-3′UTR-WT重组质粒时,miR-485-5pmimic组相对萤光素酶活性明显低于miR-NC组。而共转染突变型psiCHECK-LncRNANEAT1-3′UTR-MUT、psiCHECK-STAT3-3′UTR-MUT重组载体质粒时,miR-485-5p mimic组和miR-NC组萤光素酶活性无明显差异;沉默LncRNA NEAT1或STAT3均可抑制HaCaT细胞增殖及促进其凋亡;下调miR-485-5p可促进HaCaT细胞增殖及抑制其凋亡,而上调miR-485-5p则与之相反;下调miR-485-5p可减弱沉默LncRNANEAT1对HaCaT细胞功能的影响。结论:LncRNANEAT1可通过充当竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)吸附miR-485-5p增强STAT3表达来促进HaCaT细胞增殖并抑制其凋亡。
关键词
HACAT细胞
银屑病
LncRNA
NEAT1
miR-485-5p
STAT3
Keywords
HaCaT cells
psoriasis
LncRNA NEATl
miR-485-5p
STAT3
分类号
R751 [医药卫生—皮肤病学与性病学]
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职称材料
题名
MicroRNA-21对瘢痕疙瘩成纤维细胞mTOR信号通路的调控作用研究
被引量：
3
2
作者
唐志铭
翟晓翔
丁继存
荆梦晴
陆鹭
尹新江
机构
南京中医药大学
徐州
附属
医院
皮肤
科
浙江中医药大学
第一
临床医学院
上海市第七
人民医院
皮肤
科
徐州市第一人民医院烧伤整形科
出处
《临床皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第8期454-459,共6页
基金
国家自然科学基金面上项目(81673976)
浦东新区卫生和计划生育委员会临床中医高原学科建设项目(PDZY-2018-0604)
文摘
目的:探讨MicroRNA(miR)-21对瘢痕疙瘩成纤维细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控作用及机制。方法:应用miR-21抑制物(inhibitor)及阴性对照(NC)序列转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞后,反转录(RT)-PCR检测miR-21及10号染色体张力缺失蛋白磷酸酶(PTEN)mRNA表达水平;western blot检测mTOR信号通路关键分子PTEN、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶BPKB(p-Akt,又称Akt)及p-mTOR蛋白的表达。生物信息学方法预测miR-21与PTEN mRNA 3′-UTR结合位点,并用双萤光素酶报告基因验证miR-21对PTEN mRNA的靶向作用;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖。结果:miR-21能够靶向调控PTEN mRNA表达,抑制miR-21表达可导致PTEN的mRNA和蛋白表达增加,进而抑制p-Akt及p-mTOR蛋白的表达,从而抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖。结论:miR-21可通过靶基因PTEN调控瘢痕疙瘩成纤维细胞mTOR信号通路关键分子p-Akt和p-mTOR的表达。
关键词
MICRORNA-21
瘢痕疙瘩
成纤维细胞
MTOR信号通路
Keywords
microRNA-21
keloid
fibroblasts
mTOR signaling pathway
分类号
R751 [医药卫生—皮肤病学与性病学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
长链非编码RNANEAT1对HaCaT细胞中miR-485-5p和STAT3表达的影响
唐志铭
丁继存
陆鹭
单霄
王咏露
鹿晓兰
荆梦晴
《临床皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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下载PDF
职称材料
2
MicroRNA-21对瘢痕疙瘩成纤维细胞mTOR信号通路的调控作用研究
唐志铭
翟晓翔
丁继存
荆梦晴
陆鹭
尹新江
《临床皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
3
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职称材料
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