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鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白的截短表达及其兔抗血清制备
1
作者
孙芬芬
高玉龙
+1 位作者
潘伟
王笑梅
《江苏农业科学》
2018年第17期175-177,共3页
通过制备原核表达鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白(VP1),以进行抗VP1蛋白兔源血清制备。首先以CIAV M9905株基因组DNA为模板,通过PCR扩增N末端截短129个氨基酸的VP1基因片段(VP1Nd129),经EcoRⅠ/SalⅠ酶双酶切处理后与经相同酶切处理的p ET28a...
通过制备原核表达鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白(VP1),以进行抗VP1蛋白兔源血清制备。首先以CIAV M9905株基因组DNA为模板,通过PCR扩增N末端截短129个氨基酸的VP1基因片段(VP1Nd129),经EcoRⅠ/SalⅠ酶双酶切处理后与经相同酶切处理的p ET28a(+)载体连接,获得阳性重组子p ET-28a-VP1Nd129,将其转化入E.coli BL21(DE3)菌,经IPTG诱导,表达出VP1Nd129蛋白;后者通过Ni-NTA树脂纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗血清,用间接免疫荧光试验和Western blot试验检测该血清的特异性,用酶联免疫吸附试验(ELISA)滴定其效价。结果显示,CAV VP1Nd129基因在大肠杆菌中正确表达,并主要以包涵体形式存在;纯化后免疫兔获得的抗血清可与真核细胞表达的全长VP1蛋白特异性反应。表明本试验成功对VP1蛋白进行截短表达,制备的兔抗血清反应性好,为深入开展CIAV的生物学功能奠定基础。
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关键词
鸡传染性贫血病毒
VP1蛋白
原核表达
纯化
兔抗血清
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题名
鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白的截短表达及其兔抗血清制备
1
作者
孙芬芬
高玉龙
潘伟
王笑梅
机构
徐州
医科
大学
形态
学
实验
教
学
中心
中国农业科
学
院哈尔滨兽医研究所兽医
生物
技术国家
重点
实验室
徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室/江苏省免疫与代谢重点实验室
出处
《江苏农业科学》
2018年第17期175-177,共3页
基金
国家肉鸡产业技术体系建设专项(编号:CARS-42-G07)
徐州医科大学优秀人才启动基金(编号:D2015004)
文摘
通过制备原核表达鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白(VP1),以进行抗VP1蛋白兔源血清制备。首先以CIAV M9905株基因组DNA为模板,通过PCR扩增N末端截短129个氨基酸的VP1基因片段(VP1Nd129),经EcoRⅠ/SalⅠ酶双酶切处理后与经相同酶切处理的p ET28a(+)载体连接,获得阳性重组子p ET-28a-VP1Nd129,将其转化入E.coli BL21(DE3)菌,经IPTG诱导,表达出VP1Nd129蛋白;后者通过Ni-NTA树脂纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗血清,用间接免疫荧光试验和Western blot试验检测该血清的特异性,用酶联免疫吸附试验(ELISA)滴定其效价。结果显示,CAV VP1Nd129基因在大肠杆菌中正确表达,并主要以包涵体形式存在;纯化后免疫兔获得的抗血清可与真核细胞表达的全长VP1蛋白特异性反应。表明本试验成功对VP1蛋白进行截短表达,制备的兔抗血清反应性好,为深入开展CIAV的生物学功能奠定基础。
关键词
鸡传染性贫血病毒
VP1蛋白
原核表达
纯化
兔抗血清
分类号
S858.31 [农业科学—临床兽医学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白的截短表达及其兔抗血清制备
孙芬芬
高玉龙
潘伟
王笑梅
《江苏农业科学》
2018
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