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流式细胞术定量检测细胞凋亡3种方法的比较研究 被引量:36
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作者 郑骏年 谢叔良 +1 位作者 陈家存 黄键 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第10期467-469,共3页
目的:探讨流式细胞术定量检测细胞凋亡3 种方法的价值。方法:同时使用PI染色、TUNEL及Annexin VPI3 种方法定量检测地塞米松处理小鼠的胸腺细胞凋亡发生率。结果:PI染色、Annexin VPI、TUNE... 目的:探讨流式细胞术定量检测细胞凋亡3 种方法的价值。方法:同时使用PI染色、TUNEL及Annexin VPI3 种方法定量检测地塞米松处理小鼠的胸腺细胞凋亡发生率。结果:PI染色、Annexin VPI、TUNEL3 种方法凋亡检出率分别为27.19% 、32 .28% 、50 .17 % ,两两之间均有显著差异( P< 0 .01) 。但仅Annexin VPI法可将正常细胞、凋亡细胞、死亡细胞区分开来。结论:Annexin VPT法是目前最为理想的凋亡定量检测方法。 展开更多
关键词 流式细胞术 ANNEXIN V TUNEL PI 细胞凋亡
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Ki67基因RNA干扰腺病毒表达载体的构建及其抗结肠肿瘤作用研究 被引量:2
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作者 毛立军 郑骏年 +4 位作者 郑宏祥 刘俊杰 温儒民 陈家存 孙晓青 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期190-193,共4页
目的:构建针对肿瘤增殖基因Ki67的小干扰RNA(Ki67-siRNA)腺病毒表达载体,体外研究其对人结肠癌细胞株SW620细胞生长影响,为结肠癌的基因治疗提供参考。方法:设计可形成小发夹结构的Ki67-siRNA对应模板DNA序列,克隆至缺陷型腺病毒质粒pCA... 目的:构建针对肿瘤增殖基因Ki67的小干扰RNA(Ki67-siRNA)腺病毒表达载体,体外研究其对人结肠癌细胞株SW620细胞生长影响,为结肠癌的基因治疗提供参考。方法:设计可形成小发夹结构的Ki67-siRNA对应模板DNA序列,克隆至缺陷型腺病毒质粒pCA13,构建Ki67-siRNA表达质粒pCA13-Ki67。鉴定正确后,将pCA13-Ki67与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染至293细胞,包装成复制缺陷型腺病毒Ad-Ki67。大量扩增Ad-Ki67,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度。Ad-Ki67感染人结肠癌细胞,结晶紫染色法检测细胞病理作用,MTT法检测细胞存活,Western印迹法检测Ki67表达。结果:酶切分析、测序鉴定表明pCA13-Ki67构建成功,PCR分析表明Ad-Ki67含有Ki67-siRNA序列。Ad-Ki67可显著抑制Ki67蛋白表达及结肠癌细胞生长。结论:含有Ki67-siRNA的重组腺病毒构建成功,其能抑制人结肠癌细胞Ki67基因表达和生长。 展开更多
关键词 KI67基因 RNA干扰 腺病毒载体
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门静脉注射供体脾细胞联合应用环孢素A诱导免疫耐受的实验研究 被引量:2
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作者 周广臣 谢叔良 +1 位作者 陈家存 孙晓青 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期50-52,共3页
目的:利用大鼠异位心脏移植模型,行移植时经门静脉注射供体脾细胞联合应用环孢素A(CsA)诱导免疫耐受的实验研究,并从细胞免疫角度探讨其诱导免疫耐受机制。方法:受体鼠移植术前经门静脉注射供体脾细胞联合短期应用环孢素A(CsA)。采用MT... 目的:利用大鼠异位心脏移植模型,行移植时经门静脉注射供体脾细胞联合应用环孢素A(CsA)诱导免疫耐受的实验研究,并从细胞免疫角度探讨其诱导免疫耐受机制。方法:受体鼠移植术前经门静脉注射供体脾细胞联合短期应用环孢素A(CsA)。采用MTT法检测术后受体鼠脾淋巴细胞IL-2产生水平及NK细胞活性,采用ELISA检测受体鼠IFN-γ表达水平。结果:门静脉注射供体脾细胞联合应用CsA能显著延长大鼠心脏移植物的存活期,且明显抑制受体脾淋巴细胞IL-2,IFN-γ的表达及NK细胞活性。结论:门静脉注射供体脾细胞能有效地诱导免疫耐受,干扰IL-2-NK-IFN-γ免疫网络功能可能是门静脉注射供体脾细胞诱导免疫耐受的机制之一。 展开更多
关键词 免疫耐受 心脏移植 细胞因子 环孢素A 门静脉注射 供体脾细胞
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细胞因子对肾癌细胞株786-0、GRC-1 Fas、FasL表达的调节及其意义 被引量:2
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作者 郑骏年 孙晓青 +2 位作者 陈家存 姜福金 李望 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期766-768,共3页
目的 :研究细胞因子对肾癌株Fas、FasL表达的影响及其意义。方法 :单独或联合应用IFNγ ,IFNα ,IL 2 ,TNFα刺激肾癌株 786 0、GRC 1细胞并检测Fas、FasL表达 ,以Fas单克隆抗体 (FasAb)诱导其凋亡 ,以JurkatT细胞共培养试验检测其Fas... 目的 :研究细胞因子对肾癌株Fas、FasL表达的影响及其意义。方法 :单独或联合应用IFNγ ,IFNα ,IL 2 ,TNFα刺激肾癌株 786 0、GRC 1细胞并检测Fas、FasL表达 ,以Fas单克隆抗体 (FasAb)诱导其凋亡 ,以JurkatT细胞共培养试验检测其FasL功能。结果 :1 IFNγ、IFNα均能显著上调 786 0、GRC 1细胞的Fas表达 (P <0 0 1,P <0 0 1) ,并促进FasAb诱导的凋亡 (P <0 0 1,P <0 0 1)。 2 TNFα、IFNα能分别上调 786 0、GRC 1细胞的FasL表达。IFNγ能显著上调 786 0、GRC 1细胞的FasL表达(P<0 0 1,P <0 0 1) ,并促进JurkatT细胞凋亡 (P <0 0 1,P <0 0 1)。结论 :IFNγ、IFNα可增强肾癌细胞株的Fas表达 ,并促进FasAb介导的凋亡。但其亦能上调肾癌细胞FasL表达并增强其对淋巴细胞的攻击作用。 展开更多
关键词 细胞因子 肾癌 细胞株 786-0 GRC-1 FAS FASL
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