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PLCε对人骨肉瘤细胞迁移侵袭影响的实验研究 被引量:1
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作者 吴金霞 曹文嘉 +2 位作者 桑苗苗 郑骏年 裴冬生 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1388-1392,共5页
目的研究磷脂酶Cε(phospholipase C epsilon,PLCε)对人骨肉瘤细胞株U2OS迁移侵袭能力的影响。方法 siRNA干扰U2OS细胞PLCε的表达,应用CCK-8实验检测PLCε对细胞增殖能力的影响,以划痕实验、Transwell小室模型实验测定细胞迁移能力改... 目的研究磷脂酶Cε(phospholipase C epsilon,PLCε)对人骨肉瘤细胞株U2OS迁移侵袭能力的影响。方法 siRNA干扰U2OS细胞PLCε的表达,应用CCK-8实验检测PLCε对细胞增殖能力的影响,以划痕实验、Transwell小室模型实验测定细胞迁移能力改变情况,以明胶酶谱实验测定细胞分泌基质金属蛋白酶MMP2的变化。结果体外合成特异性PLCε基因siRNA可明显抑制U2OS细胞中PLCε的表达;沉默PLCε后,U2OS细胞的增殖能力无明显变化,而划痕愈合能力、迁移活力较对照组细胞明显下降,其分泌MMP2的水平也明显下降。结论沉默PLCε可致人骨肉瘤细胞U2OS的迁移和侵袭能力下降。 展开更多
关键词 PLCe SIRNA 增殖 迁移 侵袭 骨肉瘤
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Rap2a真核表达质粒的鉴定及其对肺癌细胞迁移能力的影响 被引量:1
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作者 吴金霞 桑苗苗 +2 位作者 曹文嘉 郑骏年 裴冬生 《中国肺癌杂志》 CAS 北大核心 2014年第9期643-648,共6页
背景与目的小G蛋白家族成员Rap2a可调控内皮素和细胞粘附从而影响细胞运动及细胞与基质间相互作用,但其在肿瘤发生发展中的作用仍属未知。克隆人Ras家族小G蛋白Rap2a的cDNA,构建其真核表达质粒并在肺癌细胞表达,初步探讨Rap2a在肺癌发... 背景与目的小G蛋白家族成员Rap2a可调控内皮素和细胞粘附从而影响细胞运动及细胞与基质间相互作用,但其在肿瘤发生发展中的作用仍属未知。克隆人Ras家族小G蛋白Rap2a的cDNA,构建其真核表达质粒并在肺癌细胞表达,初步探讨Rap2a在肺癌发生发展中的作用。方法Western blot检测Rap2a在肺癌细胞中的内源性表达。人骨肉瘤细胞株U2OS提取细胞总RNA,经逆转录聚合酶链式反应逆转录成cDNA,PCR扩增Rap2a基因,酶切后插入pcDNA3.1(+)构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Rap2a,采用酶切及测序鉴定。重组质粒转染H1299和A549细胞,Western blot检测目的基因表达。Transwell小室迁移实验观察Rap2a对肺癌细胞迁移能力的影响。明胶酶谱实验检测Rap2a对细胞分泌基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)2的影响。结果与正常细胞相比,肺癌细胞中Rap2a基础表达水平明显增高。双酶切及测序结果显示重组质粒pcDNA3.1(+)-Rap2a成功构建,Werstern blot检测到H1299和A549细胞有相应蛋白表达。迁移实验结果显示转染Rap2a基因后肿瘤细胞迁移能力明显增加。明胶酶谱实验结果显示Rap2a过表达后肺癌细胞分泌MMP2的量随之增加。结论人Rap2a真核表达质粒成功构建,Rap2a基因在肺癌细胞株成功表达并能促进肺癌细胞的迁移能力。 展开更多
关键词 基因克隆 迁移 A549 H1299
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