目的:探讨人早孕蜕膜基质细胞(DSCs)对育龄女性外周血Treg细胞的影响。方法:分离培养育龄期女性外周血淋巴细胞(PBLC);分离培养正常人早孕DSCs并传至第3代或第4代,后分为4组。1对照组:单纯培养PBLC;2共培养组:PBLC+DSCs培养组;3脂多糖(L...目的:探讨人早孕蜕膜基质细胞(DSCs)对育龄女性外周血Treg细胞的影响。方法:分离培养育龄期女性外周血淋巴细胞(PBLC);分离培养正常人早孕DSCs并传至第3代或第4代,后分为4组。1对照组:单纯培养PBLC;2共培养组:PBLC+DSCs培养组;3脂多糖(LPS)刺激组:PBLC+DSCs+LPS培养组;4吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)阻断组:PBLC+DSCs+LPS+PDTC培养组。蛋白质印迹法(Western blotting)检测核因子κB抑制因子α(IκBα)蛋白表达水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Fox P3 m RNA表达水平;流式细胞仪检测Treg细胞亚群比例。结果:分离培养的人原代DSCs的纯度大于95%。Western blotting和RT-PCR结果显示,共培养组IκBα蛋白、Fox P3 m RNA表达明显高于其余3组(P<0.05);与共培养组相比,LPS刺激组IκBα蛋白、Fox P3 m RNA表达降低(P<0.05),与LPS刺激组相比,PDTC阻断组IκBα蛋白、Fox P3 m RNA表达升高,但仍低于共培养组(P<0.05)。流式细胞术检测显示,共培养组Treg细胞亚群比例高于其余3组(P<0.05);与共培养组相比,LPS刺激组Treg细胞亚群比例下降;PDTC阻断组Treg细胞亚群比例高于LPS刺激组,但仍低于共培养组(P<0.05)。结论:人早孕DSCs能上调育龄期女性外周血淋巴细胞中Treg细胞亚群比例,加入LPS刺激后Treg细胞亚群比例下降,可能与级联活化IκB激酶,降解IκBα,活化NF-κB信号通路,从而抑制Fox P3表达增高有关。展开更多
文摘目的:探讨人早孕蜕膜基质细胞(DSCs)对育龄女性外周血Treg细胞的影响。方法:分离培养育龄期女性外周血淋巴细胞(PBLC);分离培养正常人早孕DSCs并传至第3代或第4代,后分为4组。1对照组:单纯培养PBLC;2共培养组:PBLC+DSCs培养组;3脂多糖(LPS)刺激组:PBLC+DSCs+LPS培养组;4吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)阻断组:PBLC+DSCs+LPS+PDTC培养组。蛋白质印迹法(Western blotting)检测核因子κB抑制因子α(IκBα)蛋白表达水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Fox P3 m RNA表达水平;流式细胞仪检测Treg细胞亚群比例。结果:分离培养的人原代DSCs的纯度大于95%。Western blotting和RT-PCR结果显示,共培养组IκBα蛋白、Fox P3 m RNA表达明显高于其余3组(P<0.05);与共培养组相比,LPS刺激组IκBα蛋白、Fox P3 m RNA表达降低(P<0.05),与LPS刺激组相比,PDTC阻断组IκBα蛋白、Fox P3 m RNA表达升高,但仍低于共培养组(P<0.05)。流式细胞术检测显示,共培养组Treg细胞亚群比例高于其余3组(P<0.05);与共培养组相比,LPS刺激组Treg细胞亚群比例下降;PDTC阻断组Treg细胞亚群比例高于LPS刺激组,但仍低于共培养组(P<0.05)。结论:人早孕DSCs能上调育龄期女性外周血淋巴细胞中Treg细胞亚群比例,加入LPS刺激后Treg细胞亚群比例下降,可能与级联活化IκB激酶,降解IκBα,活化NF-κB信号通路,从而抑制Fox P3表达增高有关。
