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不同生长因子对人胚胎脑海马区神经干细胞体外生长的影响 被引量：5
1
作者 姚瑞芹 徐铁军 张凤真 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期154-158,共5页
本研究比较了不同生长因子对人胚胎脑海马区神经干细胞(NSCs)体外生长的影响.取胎龄8～12周的人胚胎脑海马,按基础培养液中生长因子的不同将培养细胞分为:h-EGF组、h-bFGF组、h-EGF+h-bFGF组、h-EGF+h-LIF组、h-bFGF+h-LIF组、h-EGF+h-b... 本研究比较了不同生长因子对人胚胎脑海马区神经干细胞(NSCs)体外生长的影响.取胎龄8～12周的人胚胎脑海马,按基础培养液中生长因子的不同将培养细胞分为:h-EGF组、h-bFGF组、h-EGF+h-bFGF组、h-EGF+h-LIF组、h-bFGF+h-LIF组、h-EGF+h-bFGF+h-LIF组,将机械分离的单细胞悬液以2×106个细胞/ml接种到上述组别,观察各生长因子的作用.结果发现,原代细胞培养6 h时,各组细胞情形区别不大;随培养时间的延长,h-EGF+h-bFGF组和h-EGF+h-bFGF+h-LIF组先形成许多小细胞簇,7 d后,这两组的细胞球数量进一步增加;而h-bFGF+h-LIF组和h-EGF+h-LIF组有较少的细胞球,h-bFGF组偶见小细胞球,h-EGF组细胞几乎全部死亡.将培养的h-EGF+h-bFGF+h-LIF组的神经干细胞用1%FBS诱导分化后,行免疫细胞化学鉴定.结果表明,诱导分化12 h时,细胞呈RNA-结合蛋白(Musashil)阳性,7 d时,细胞大部分呈β-Ⅲ-管蛋白(β-Ⅲ-tu-bulin)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性,极少数为半乳糖脑苷脂(Galc)阳性.以上结果提示,人胚胎脑海马区NSCs的体外存活增殖必须依赖于h-EGF和h-bFGF的共同作用,而h-LIF对早期培养的人NSCs的影响不明显. 展开更多
关键词 生长因子 人胚胎 脑 海马 神经干细胞 体外生长
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NR2A反义寡核苷酸对短暂性脑缺血/再灌注大鼠海马神经元损伤的保护作用 被引量：1
2
作者 刘志安 李梅 +3 位作者 张旭 滕大才 裴冬生 徐铁军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1424-1428,共5页
目的探讨NMDA受体亚单位2A(NR2A)反义寡核苷酸在短暂性脑缺血/再灌注大鼠海马神经元损伤中的保护作用,为研制和开发针对NR2A的特异性新药提供理论基础和形态学依据。方法健康♂SD大鼠随机分为正常对照组、假手术对照组和缺血/再灌注组... 目的探讨NMDA受体亚单位2A(NR2A)反义寡核苷酸在短暂性脑缺血/再灌注大鼠海马神经元损伤中的保护作用,为研制和开发针对NR2A的特异性新药提供理论基础和形态学依据。方法健康♂SD大鼠随机分为正常对照组、假手术对照组和缺血/再灌注组。经生理盐水、错义寡核苷酸和反义寡核苷酸预处理后,以四血管阻断法建立短暂性全脑缺血(15min)/再灌注(1、2、3和5d)动物模型。在确定的时间点进行灌注固定、取材、石蜡包埋和组织切片(片厚8μm),然后行TUNEL反应、焦油紫染色、原位杂交染色以及免疫组织化学染色。结果短暂性脑缺血/再灌注(I/R)3d,大鼠海马CA1区出现大量的凋亡阳性细胞;I/R5d大鼠海马CA1区细胞严重受损,与对照组相比二组差异具有显著性(P<0.05)。经NR2A反义寡核苷酸预处理后,I/R3d和I/R5d海马CA1区的细胞凋亡和细胞损伤明显减轻,与对照组相比二组差异具有显著性(P<0.05)。NR2A反义寡核苷酸能抑制I/R1d NR2A mRNA表达和I/R2d蛋白质表达,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05)。结论短暂性全脑缺血后,NR2A反义寡核苷酸能明显地减轻缺血诱导的大鼠海马CA1区细胞凋亡和细胞损伤,且这种作用与NR2A反义寡核苷酸特异性抑制NR2A及其mRNA的表达密切相关。 展开更多
关键词 NR2A反义寡核苷酸 神经保护 NR2A 脑缺血 神经元损伤 大鼠 海马
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离体培养人神经干细胞中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达 被引量：1
3
作者 胡忠浩 王姗姗 徐铁军 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期637-641,共5页
目的:研究早期离体培养的人胚胎海马神经干细胞(NSCs)中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达。方法:取胎龄8～12周人胚脑海马,进行NSCs分离、培养、传代和鉴定。通过免疫细胞化学和RT-PCR等方法检测传代1次和2次的人胚胎海马NSCs中NMDA受体... 目的:研究早期离体培养的人胚胎海马神经干细胞(NSCs)中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达。方法:取胎龄8～12周人胚脑海马,进行NSCs分离、培养、传代和鉴定。通过免疫细胞化学和RT-PCR等方法检测传代1次和2次的人胚胎海马NSCs中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的蛋白和mRNA表达。结果:自孕8～12周人胚脑海马分离培养的NSCs,NMDA受体亚单位NR2A和NR2B免疫细胞化学反应呈阳性,这两种受体亚单位的mRNA均被检测到。结论:体外培养的早期人胚胎海马NSCs能稳定表达NMDA受体亚单位NR2A和NR2B。 展开更多
关键词 人 神经干细胞 NMDA受体亚单位 RT-PCR
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人胚胎脑海马区神经前体细胞移植到损伤的成年大鼠脑内存活及迁移的研究 被引量：1
4
作者 姚瑞芹 徐铁军 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期614-618,共5页
本文从人胚胎脑海马区分离、培养、鉴定了神经前体细胞（neural precursor cells，NPCs），并初步观察了大鼠纹状体海人酸（kainic acid，KA）损伤后，人神经前体细胞（hNPCs）移植到成年大鼠侧脑室和纹状体后存活和迁移的情况。取胎龄8... 本文从人胚胎脑海马区分离、培养、鉴定了神经前体细胞（neural precursor cells，NPCs），并初步观察了大鼠纹状体海人酸（kainic acid，KA）损伤后，人神经前体细胞（hNPCs）移植到成年大鼠侧脑室和纹状体后存活和迁移的情况。取胎龄8～12周的人胚胎脑海马区细胞，用含人表皮生长因子（human epidermal growth factor，h-EGF）、人碱性成纤维细胞生长因子（human basic fibroblast growth factor，h-bFGF）以及人白细胞抑制因子（human leukemia inhibitory growth factor，h-LIF）的DMEM／F12培养液离体培养，以含1％胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）的DMEM／F12诱导分化，巢蛋白（nestin）免疫荧光染色鉴定NPCs的特征。向成年大鼠右侧纹状体内立体定位注射KA，造成大鼠纹状体局部损伤。用溴脱氧尿嘧啶核苷（bromodeoxyuridine，BrdU）体外标记第2代hNPCs，48h后分别移植到正常成年大鼠和损伤大鼠手术侧的侧脑室和纹状体。6周后用抗BrdU抗体检测HNPCs的存活和迁移。结果显示：体外培养呈悬浮球状生长的细胞是nestin阳性的hNPCs。hNPCs移植6周后，在大鼠损伤侧的纹状体和侧脑室内，均检测到了BrdU阳性细胞，并有一部分细胞迁移到了周围纹状体实质和胼胝体。结果提示：体外分离培养的hNPCs移植到成年大鼠脑损伤区周围可以存活和迁移，损伤区域可能对移植细胞的迁移有一定的诱向作用。 展开更多
关键词 人神经前体细胞 细胞培养 移植 免疫细胞化学 大鼠
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短暂性前脑缺血后大鼠海马各区NMDA受体亚单位NR2A和NR2B mRNA的表达变化 被引量：12
5
作者 刘志安 徐铁军 +2 位作者 张凤真 王梅申 彭裕文 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期153-157,共5页
应用原位杂交组织化学和图像处理与分析的方法 ,观察短暂性前脑缺血 (15 m in)再灌注 (0 .5 h～ 7d)大鼠海马各区NR2 A和 NR2 B m RNA的表达变化 ,探讨二者在缺血性脑损伤中的作用。结果发现 ,缺血后 ,NR2 A和 NR2 B m RNA在海马各区呈... 应用原位杂交组织化学和图像处理与分析的方法 ,观察短暂性前脑缺血 (15 m in)再灌注 (0 .5 h～ 7d)大鼠海马各区NR2 A和 NR2 B m RNA的表达变化 ,探讨二者在缺血性脑损伤中的作用。结果发现 ,缺血后 ,NR2 A和 NR2 B m RNA在海马各区呈现出一种相对一致的表达。在海马 CA1 区 ,NR2 A和 NR2 B m RNA的表达分别在缺血再灌 6h和 12 h降至低谷 (P<0 .0 5 ) ,然后表达开始回升 ,在缺血再灌 48h都升至高峰 (P<0 .0 5 ) ,之后表达再次下降 ,直至缺血后 7d(P<0 .0 5 ) ;在海马 CA3区 ,二者的表达变化规律与 CA1 区相似 ,不同的是表达变化的幅度明显减小。在齿状回 ,缺血后 0 .5 h～ 72 h,NR2 A和 NR2 B m RNA的表达未见显著性变化 ,72 h后表达开始下降 ,直至缺血后 7d(P<0 .0 5 )。以上结果提示 ,短暂性前脑缺血后 ,NR2 A和 NR2 B m R-NA在大鼠海马各区表达变化的模式不同 。 展开更多
关键词 脑缺血 大鼠 海马 NMDA受体亚单位 NR2A NR2B mRNA 表达
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生后早期大鼠海马NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的表达变化 被引量：11
6
作者 王玉兰 徐铁军 +3 位作者 樊红彬 张凤真 王梅申 彭裕文 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期413-418,共6页
运用免疫组织化学反应和图象分析处理技术研究生后 1d、4d、1周、2周、3周、4周、5周、6周的 SD大鼠海马结构中NMDA受体亚单位 NR1、NR2 A、NR2 B三种蛋白质的表达变化规律。结果表明 ,生后各时间点海马结构各区锥体细胞及颗粒细胞胞体... 运用免疫组织化学反应和图象分析处理技术研究生后 1d、4d、1周、2周、3周、4周、5周、6周的 SD大鼠海马结构中NMDA受体亚单位 NR1、NR2 A、NR2 B三种蛋白质的表达变化规律。结果表明 ,生后各时间点海马结构各区锥体细胞及颗粒细胞胞体中均有 NR1、NR2 A、NR2 B的表达 ,NR2 B还在锥体细胞的顶树突中有较强表达。 NR1与 NR2 B的生后表达变化模式相似 ,在生后 1d和 4d,两者在 CA3区的表达均高于 CA1 区 ;生后 1周后两者在 CA1 区的表达则高于 CA3区 ;到生后 2～ 3周其表达达到峰值。而 NR2 A却与此不同 ,生后 1d、4d时其在海马结构各区的表达较高 ,随发育时间延长表达逐渐下降 ,大约在生后 4周降至谷底。整个发育过程中 ,NR1在海马结构各区的表达始终高于 NR2 A和 NR2 B的表达。这些结果提示 ,生后早期大鼠海马结构 NR1、NR2 A、NR2 B的表达具有发育性时空差异和亚单位差异 ,这种差异可能与发育早期海马学习功能的特异性以及海马各区对缺血敏感性不同有关。 展开更多
关键词 NMDA受体亚单位 生后发育 海马 大鼠
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Bcl-2、Bax蛋白在NRs抗体预处理后缺氧缺糖海马脑片CA_1区的表达变化
7
作者 王玉兰 徐铁军 +2 位作者 樊红彬 张凤真 彭裕文 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期147-152,共6页
运用海马脑片培养技术、海马脑片缺氧缺糖方法、免疫组织化学染色和图像分析处理技术观察用 NMDA受体亚单位抗体预处理后再缺氧缺糖的海马脑片 CA1 区 Bcl-2和 Bax蛋白的表达变化 ,以探究其亚单位与海马脑片缺氧缺糖性损伤的关系。结果... 运用海马脑片培养技术、海马脑片缺氧缺糖方法、免疫组织化学染色和图像分析处理技术观察用 NMDA受体亚单位抗体预处理后再缺氧缺糖的海马脑片 CA1 区 Bcl-2和 Bax蛋白的表达变化 ,以探究其亚单位与海马脑片缺氧缺糖性损伤的关系。结果显示 ,各实验组海马脑片 CA1 区均有不同程度 Bcl-2、Bax蛋白表达和细胞缺失形成的空洞。 Bcl-2蛋白在 NR1+ OGD组、NR2 A+ OGD组和 NR2 A + NR2 B+ OGD组 CA1 区的表达均明显弱于 OGD组 (3组均 P<0 .0 5 ) ;其在 NR2 B+ OGD组和HOTC组的表达则强于 OGD组 (两者 P<0 .0 5 )。 Bax蛋白在 NR1+ OGD组、NR2 A+ OGD组和 NR2 A+ NR2 B+ OGD组的表达均强于 OGD组 (NR2 A+ OGD组 P<0 .0 5 ) ;在 NR2 B+ OGD组和 HOTC组其表达则明显弱于 OGD组 (后者 P<0 .0 5 )。结论 :单纯缺氧缺糖可引起海马脑片 CA1 区锥体细胞的迟发性损伤 ,同时引起 Bcl-2蛋白和 Bax蛋白的表达变化 ;预加 NMDA受体亚单位 NR1、NR2 A抗体和 NR2 A+ NR2 B抗体可以加重缺氧缺糖性海马脑片 CA1 区细胞损伤程度 ;预加 NR2 B抗体则可减轻其损伤程度。提示 NMDA受体亚单位成分的变化可以调节 Bcl-2和 Bax蛋白在缺氧缺糖性海马脑片 CA1 区的表达 ,从而调节CA1 展开更多
关键词 Bcl-2 BAX蛋白 NRs 抗体 海马脑片 CAl区 表达 缺氧 缺糖 NMDA受体亚单位
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NR2B反义寡核苷酸对脑缺血海马CA1区NR2BmRNA表达的影响
8
作者 滕大才 徐铁军 张凤真 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期108-113,共6页
为研究NMDA受体2B亚单位(NR2B)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide to NR2B,ANR2B)对短暂性脑缺血后海马CA1区NR2B mRNA表达的影响,分别向成年SD大鼠海马CA1区内立体定位注射ANR2B、NR2B正义寡核苷酸(SNR2B)、无菌生理盐水(NS),或... 为研究NMDA受体2B亚单位(NR2B)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide to NR2B,ANR2B)对短暂性脑缺血后海马CA1区NR2B mRNA表达的影响,分别向成年SD大鼠海马CA1区内立体定位注射ANR2B、NR2B正义寡核苷酸(SNR2B)、无菌生理盐水(NS),或者插针不注射(NSNO),24h后行四动脉阻断前脑缺血手术(缺血15min、再灌注24h),经心冲灌固定取脑,连续冰冻切片,原位杂交组织化学方法染色,光镜下观察各组每侧鼠脑NR2B mRNA的表达变化,并用LEICAQWin进行图像分析。结果显示,单纯缺血组海马各区的NR2B mRNA显色强度明显增加;缺血再灌组、假手术组和正常组海马CA1区内ANR2B注射点及其周围的NR2B mRNA显色明显下降;而在注射SNR2B、NS或NSNO的各组海马切片上,NR2B mRNA显色均无明显变化。结果表明ANR2B可以特异性地在体局部防止缺血后NR2B mRNA的高水平表达。 展开更多
关键词 NMDA受体 反义寡聚核苷酸 脑缺血 海马
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GDNF剪接体α-pro-GDNF在大鼠C6胶质瘤细胞中的表达及其意义
9
作者 魏赫 李亨 +3 位作者 雷宇 于如同 虞正权 高殿帅 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期471-476,共6页
目的:探讨大鼠C6胶质瘤细胞中GDNF选择性剪接体的表达情况及意义。方法:通过检测C6胶质瘤细胞中GDNF基因△78位点剪接体α-pro-GDNF mRNA和β-pro-GDNF mRNA及其受体蛋白GFRα1、GFRα2、Ret和NCAM表达,结合介导肿瘤迁移相关蛋白RhoA、C... 目的:探讨大鼠C6胶质瘤细胞中GDNF选择性剪接体的表达情况及意义。方法:通过检测C6胶质瘤细胞中GDNF基因△78位点剪接体α-pro-GDNF mRNA和β-pro-GDNF mRNA及其受体蛋白GFRα1、GFRα2、Ret和NCAM表达,结合介导肿瘤迁移相关蛋白RhoA、Cdc42、Rac1的表达情况,分析其相关关系。结果:(1)C6胶质瘤细胞中,可以检测到α-pro-GDNF和β-pro-GDNF的mRNA表达,且α-pro-GDNF mRNA表达水平比β-proGDNF高;与星形胶质细胞相比,α-pro-GDNF mRNA表达水平的增高趋势较β-pro-GDNF明显;(2)C6胶质瘤细胞中RhoA mRNA表达水平与α-pro-GDNF mRNA表达水平成显著正相关(R2=0.699,P<0.05),Cdc 42 mRNA表达水平与α-pro-GDNF mRNA表达水平呈显著正相关(R2=0.803,P<0.05),与β-pro-GDNF mRNA表达相关性不显著。结论:C6胶质瘤中α-pro-GDNF具有优先表达,可能与胶质瘤细胞的迁移具有相关性。 展开更多
关键词 胶质瘤 GDNF 选择性剪接 RhoA CDC42 RAC1
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