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人IgG Fc基因的扩增及其在真核细胞中的分泌性表达
被引量：
1
1
作者
仲峰
李秀锦
+1 位作者
贾翠云
仲飞
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期496-499,共4页
目的:通过扩增人IgG Fc基因并与人CD5基因信号肽序列融合,构建真核分泌型表达载体,实现在真核细胞中高效表达,为利用Fc基因制备融合抗原,研究抗原基因和抗原蛋白的免疫治疗奠定了基础。方法:从外科手术切除的扁桃体中分离人淋巴细胞,用T...
目的:通过扩增人IgG Fc基因并与人CD5基因信号肽序列融合,构建真核分泌型表达载体,实现在真核细胞中高效表达,为利用Fc基因制备融合抗原,研究抗原基因和抗原蛋白的免疫治疗奠定了基础。方法:从外科手术切除的扁桃体中分离人淋巴细胞,用Trizol试剂提取淋巴细胞的总RNA,通过RT-PCR方法从淋巴细胞中扩增人IgG Fc片段的基因序列,并将其克隆到pMD-T18质粒载体上。然后以上述含有Fc片段序列的质粒载体和含有人CD5基因的质粒为模板,通过重叠延伸PCR方法将Fc片段与CD5信号肽基因序列进行融合,并将其插入到pcDNA3.1A真核表达载体上,构建成与CD5信号肽融合的Fc片段基因的分泌型表达载体。经磷酸钙介导转染293T细胞使其表达。结果:测序表明扩增的Fc基因序列与GeneBank发表的序列完全一致,Western blot检测结果表明,本实验构建的Fc基因分泌型表达载体能够在真核细胞进行高效分泌性表达,表达水平在转染后48小时可达50μg/1×106细胞。结论:采用RT-PCR扩增了人IgG Fc cDNA基因,经过与人CD5信号肽序列融合构建了分泌型表达载体,实现了在293T细胞中的高效表达,这为今后构建特定抗原基因与IgG Fc基因融合表达载体,研究DNA疫苗及Fc的生物佐剂提供了实验依据。
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关键词
IgG
FC
293T细胞
分泌表达
CD5信号肽
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职称材料
题名
人IgG Fc基因的扩增及其在真核细胞中的分泌性表达
被引量：
1
1
作者
仲峰
李秀锦
贾翠云
仲飞
机构
开滦
(
集团
)
蔚州
矿业
有限责任公司
医院
燕山大学环境与化学工程学院生物工程系
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期496-499,共4页
基金
燕山大学校长基金项目(XZJJ200206)
文摘
目的:通过扩增人IgG Fc基因并与人CD5基因信号肽序列融合,构建真核分泌型表达载体,实现在真核细胞中高效表达,为利用Fc基因制备融合抗原,研究抗原基因和抗原蛋白的免疫治疗奠定了基础。方法:从外科手术切除的扁桃体中分离人淋巴细胞,用Trizol试剂提取淋巴细胞的总RNA,通过RT-PCR方法从淋巴细胞中扩增人IgG Fc片段的基因序列,并将其克隆到pMD-T18质粒载体上。然后以上述含有Fc片段序列的质粒载体和含有人CD5基因的质粒为模板,通过重叠延伸PCR方法将Fc片段与CD5信号肽基因序列进行融合,并将其插入到pcDNA3.1A真核表达载体上,构建成与CD5信号肽融合的Fc片段基因的分泌型表达载体。经磷酸钙介导转染293T细胞使其表达。结果:测序表明扩增的Fc基因序列与GeneBank发表的序列完全一致,Western blot检测结果表明,本实验构建的Fc基因分泌型表达载体能够在真核细胞进行高效分泌性表达,表达水平在转染后48小时可达50μg/1×106细胞。结论:采用RT-PCR扩增了人IgG Fc cDNA基因,经过与人CD5信号肽序列融合构建了分泌型表达载体,实现了在293T细胞中的高效表达,这为今后构建特定抗原基因与IgG Fc基因融合表达载体,研究DNA疫苗及Fc的生物佐剂提供了实验依据。
关键词
IgG
FC
293T细胞
分泌表达
CD5信号肽
Keywords
IgG Fc
293T cells
Secretary expression
CD5 signal peptide
分类号
R392.3 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人IgG Fc基因的扩增及其在真核细胞中的分泌性表达
仲峰
李秀锦
贾翠云
仲飞
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
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