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β-伴大豆球蛋白α′-亚基的基因克隆及原核表达 被引量:3
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作者 许妍妍 董宇 +5 位作者 王新 彭飞 孙晓静 余少璟 辰巳英三 栾广忠 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期304-310,共7页
为制备N-连接糖基缺失的重组β-伴大豆球蛋白α′-亚基,以‘鲁96150’大豆种子为原料提取总RNA,经RT-PCR一步法获得‘鲁96150’大豆的全长cDNA,采用自行设计的引物F1/F2扩增得到目的基因α′,与pGEM-T easy载体相连构建重组克隆载体pGEM... 为制备N-连接糖基缺失的重组β-伴大豆球蛋白α′-亚基,以‘鲁96150’大豆种子为原料提取总RNA,经RT-PCR一步法获得‘鲁96150’大豆的全长cDNA,采用自行设计的引物F1/F2扩增得到目的基因α′,与pGEM-T easy载体相连构建重组克隆载体pGEM-α′,经XhoⅠ/EcoRⅠ双酶切得到目的基因与载体pET-28a连接构建重组原核表达载体pET-28a-α′,将经菌落PCR、双酶切及测序鉴定正确的表达载体转入感受态细胞E.coli BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白α′-亚基。对重组α′-亚基的诱导表达条件进行筛选,发现在菌液OD600值为0.8、诱导温度30℃、IPTG浓度为0.2mmol/L的诱导条件下诱导9h后α′-亚基的表达量较高,重组α′-亚基的分子质量大小约为70ku;工程菌pET-28a-α′-BL21经超声破碎、离心后发现重组α′-亚基部分存在于上清液中,部分形成包涵体蛋白。重组α′-亚基的克隆及表达为β-伴大豆球蛋白结构及功能特性的研究奠定基础。 展开更多
关键词 Β-伴大豆球蛋白 亚基 重组蛋白 克隆 基因表达
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格列吡嗪片在健康人体内的药代动力学及相对生物利用度 被引量:2
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作者 李清芳 王静 袁保梅 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第16期1692-1693,共2页
目的测定格列吡嗪片在健康人体内的药代动力学参数及相对生物利用度。方法18例健康男性志愿者随机交叉口服10mg格列吡嗪片后,用HPLC法测定血浆药物浓度。结果口服参比制剂或受试制剂后的主要药代动力学参数Tmax分别为(2.39±0.50)、... 目的测定格列吡嗪片在健康人体内的药代动力学参数及相对生物利用度。方法18例健康男性志愿者随机交叉口服10mg格列吡嗪片后,用HPLC法测定血浆药物浓度。结果口服参比制剂或受试制剂后的主要药代动力学参数Tmax分别为(2.39±0.50)、(2.33±0.49)h;Cmax分别为(675.3±151.7)、(647.1±166.7)μg/L;AUC0-t分别为(3565.4±733.4)、(3304.8±588.4)μg.h-1.L-1。结论两种制剂具有生物等效性。 展开更多
关键词 格列吡嗪片 药代动力学 HPLC 生物等效性
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高效液相色谱串联质谱检测食用植物油中的乙基麦芽酚 被引量:7
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作者 葛敏敏 李赵平 董宇 《中国粮油学报》 CSCD 北大核心 2023年第7期184-190,共7页
为了建立食用植物油中乙基麦芽酚检测的高效液相色谱串联质谱方法,食用植物油样品与二氯甲烷混合后,以1.5%NaOH水溶液做为提取溶剂,涡旋、离心后,用磷酸将上层提取液调至4~7,调节pH后的上清液用PLS固相萃取柱进行净化除杂。采用电喷雾... 为了建立食用植物油中乙基麦芽酚检测的高效液相色谱串联质谱方法,食用植物油样品与二氯甲烷混合后,以1.5%NaOH水溶液做为提取溶剂,涡旋、离心后,用磷酸将上层提取液调至4~7,调节pH后的上清液用PLS固相萃取柱进行净化除杂。采用电喷雾电离源正离子多反应监测模式进行检测,采用溶剂匹配标准曲线外标法进行定量。结果表明:该方法在6.25~100 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好(R^(2)>0.999),方法定量限为25.0μg/kg,在3个加标水平下的平均回收率为82.9%~105.1%,相对标准偏差小于5%,重复性好。该方法准确、灵敏度高,能有效减少芝麻油的基质效应,适用于多种食用植物油中乙基麦芽酚的检测。 展开更多
关键词 食用植物油 高效液相色谱串联质谱 固相萃取 检测
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UPLC⁃MS/MS法同时测定女金胶囊中10种成分 被引量:8
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作者 梁艳 张峰 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1713-1717,共5页
目的建立UPLC⁃MS/MS法同时测定女金胶囊(当归、白芍、川芎等)中益母草碱、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、延胡索乙素、橙皮苷、黄芩苷、桂皮醛、甘草酸、欧前胡素的含量。方法该药物70%乙醇提取液的分析采用Phenomenex Kinetex C18色谱柱... 目的建立UPLC⁃MS/MS法同时测定女金胶囊(当归、白芍、川芎等)中益母草碱、芍药苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、延胡索乙素、橙皮苷、黄芩苷、桂皮醛、甘草酸、欧前胡素的含量。方法该药物70%乙醇提取液的分析采用Phenomenex Kinetex C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,2.6μm);流动相0.1%甲酸⁃乙腈,梯度洗脱;体积流量0.4 mL/min;柱温35℃;ESI离子源;MRM模式。结果10种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9990),平均加样回收率96.6%~99.9%,RSD 1.8%~2.8%。结论该方法快速灵敏,专属性强,可用于女金胶囊的质量控制。 展开更多
关键词 女金胶囊 化学成分 UPLC⁃MS/MS
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食用油中黄曲霉毒素B1含量的测定能力验证 被引量:7
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作者 许妍妍 董宇 《安徽农业科学》 CAS 2020年第22期185-186,189,共3页
[目的]浅析影响食用油中黄曲霉毒素B 1检测结果的因素。[方法]根据国标GB 5009.22—2016高效液相色谱柱后光衍生法并优化试验条件。[结果]能力验证样品中黄曲霉毒素B 1含量为3.66μg/kg,相关系数为0.9999,采用甲醇水(70+30)溶液提取和3 ... [目的]浅析影响食用油中黄曲霉毒素B 1检测结果的因素。[方法]根据国标GB 5009.22—2016高效液相色谱柱后光衍生法并优化试验条件。[结果]能力验证样品中黄曲霉毒素B 1含量为3.66μg/kg,相关系数为0.9999,采用甲醇水(70+30)溶液提取和3 mL/min的净化速率,加标回收率为98.7%,RSD为0.73%。通过了中国国家认证认可监督管理委员会开展的能力验证《食用油中黄曲霉毒素B 1含量的测定》(NIL PT-1637),Z比分数为0。[结论]能力验证结果满意,完善了国标测定黄曲霉毒素B 1的细节操作,为广大分析测试人员提供参考。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B 1 能力验证 食用油 高效液相色谱 柱后光衍生
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UPLC-MS-MS法同时测定复方益肝丸中12种成分 被引量:3
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作者 梁艳 张峰 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期2783-2789,共7页
目的建立UPLC-MS/MS法同时测定复方益肝丸(茵陈、野菊花、牡丹皮等)中绿原酸、毛蕊花糖苷、柚皮苷、橙皮苷、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸、大黄酸、柴胡皂苷A、五味子醇甲、柴胡皂苷D、大黄素的含量。方法该药物70%乙醇提取液的分析采用Phen... 目的建立UPLC-MS/MS法同时测定复方益肝丸(茵陈、野菊花、牡丹皮等)中绿原酸、毛蕊花糖苷、柚皮苷、橙皮苷、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸、大黄酸、柴胡皂苷A、五味子醇甲、柴胡皂苷D、大黄素的含量。方法该药物70%乙醇提取液的分析采用Phenomenex Kinetex C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,2.6μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.35 mL/min;柱温35℃;电喷雾离子源(ESI);多反应监测(MRM)模式。结果12种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9950),平均加样回收率96.9%~99.4%,RSD 1.7%~2.8%。结论该方法专属性强,快速灵敏,可用于复方益肝丸的质量控制。 展开更多
关键词 复方益肝丸 化学成分 UPLC-MS/MS
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高效液相色谱法测定消银胶囊中苦参碱和牛蒡苷的含量 被引量:2
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作者 李清芳 梁艳 +1 位作者 张峰 孙轶梅 《世界中医药》 CAS 2018年第4期984-987,共4页
目的:探讨高效液相色谱法测定消银胶囊中苦参碱和牛蒡苷的含量,阐释中药合理配伍的科学内涵。方法:精密量取10μL的样品进样量或对照品溶液,采用250 mm×4.6 mm,5μm的色谱柱,选择流动相的条件是在乙腈和0.1%磷酸(12∶88)的中以1 mL... 目的:探讨高效液相色谱法测定消银胶囊中苦参碱和牛蒡苷的含量,阐释中药合理配伍的科学内涵。方法:精密量取10μL的样品进样量或对照品溶液,采用250 mm×4.6 mm,5μm的色谱柱,选择流动相的条件是在乙腈和0.1%磷酸(12∶88)的中以1 mL/min的流速开展实验,柱温为30℃,检测波长为230 nm,根据高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱的梯度洗脱程序进行试验,并在LCsolution色谱工作站上进行指纹图谱分析消银胶囊中苦参碱和牛蒡苷的含量。结果:通过HPLC指纹图谱分析,牛蒡苷和苦参碱对照品分别于供试品溶液的色谱峰保留时间一致,且阴性对照溶液未对其造成干扰影响。牛蒡苷此在0.14~3.5μg范围内线性关系良好;苦参碱在0.1~2.0μg范围内线性关系良好。牛蒡苷加样回收率试验结果中平均回收率为99.80%,RSD为2.01%;苦参碱加样回收率试验结果中平均回收率为108.24%,RSD为1.97%。不同批次消银胶囊中牛蒡苷和苦参碱的含量差异无统计学意义(P>0.05),平均每粒消银胶囊中牛蒡苷含量为0.817 mg,苦参碱为0.437 mg。结论:高效液相色谱法可用于消银胶囊中苦参碱和牛蒡苷含量测定,进而对该药物进行质量控制。 展开更多
关键词 高效液相色谱法 消银胶囊 苦参碱 牛蒡苷
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HPLC法同时测定十五味骨伤丸中11种成分 被引量:1
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作者 韩吴琦 吕晋 +2 位作者 方慧祥 牛英颖 刘威峰 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3210-3214,共5页
目的建立HPLC法同时测定十五味骨伤丸中儿茶素、2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、橙皮苷、丹酚酸B、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、隐丹参酮、大黄酚、大黄素甲醚、丹参酮ⅡA的含量。方法该药物甲醇提取液的分析采用依利特... 目的建立HPLC法同时测定十五味骨伤丸中儿茶素、2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、橙皮苷、丹酚酸B、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、隐丹参酮、大黄酚、大黄素甲醚、丹参酮ⅡA的含量。方法该药物甲醇提取液的分析采用依利特C18色谱柱(250 mm×46 mm,5μm);流动相乙腈-01%磷酸,梯度洗脱;体积流量10 mL/min;柱温30℃;检测波长254、283 nm。结果11种成分在各自范围内线性关系良好(r>099990),平均加样回收率9816%~9959%,RSD 034%~100%。结论该方法简便可靠,重复性好,可用于十五味骨伤丸的质量控制。 展开更多
关键词 十五味骨伤丸 化学成分 HPLC
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大豆油煎炸过程中极性组分及苯并(a)芘含量变化研究
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作者 马利杰 蔡佳琦 陈霄 《安徽农业科学》 CAS 2020年第17期182-184,188,共4页
[目的]掌握煎炸过程中大豆油的极性组分及苯并(a)芘污染物含量的变化规律。[方法]在190℃对含抗氧化剂特丁基对苯二酚(TBHQ)的大豆油进行连续煎炸试验,连续煎炸14 h,分别在煎炸0、0.5、1、2、4、6、8、10、12、14 h时取样,测定煎炸油中... [目的]掌握煎炸过程中大豆油的极性组分及苯并(a)芘污染物含量的变化规律。[方法]在190℃对含抗氧化剂特丁基对苯二酚(TBHQ)的大豆油进行连续煎炸试验,连续煎炸14 h,分别在煎炸0、0.5、1、2、4、6、8、10、12、14 h时取样,测定煎炸油中的酸价、极性组分、苯并(a)芘这3个检测指标并进行分析。[结果]在煎炸过程中,酸价随煎炸时间延长而逐渐升高;极性组分随着煎炸时间的延长,上升趋势逐渐加快;而苯并(a)芘浓度先升高,然后稍有下降,之后又继续升高,整个煎炸过程中苯并(a)芘浓度总体呈上升趋势。[结论]该研究为煎炸店选择适当的煎炸时间,最大程度减轻煎炸油对人体的损害提供了理论依据。 展开更多
关键词 煎炸油 酸价 极性组分 苯并(A)芘
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