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Yes相关蛋白对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响
1
作者 赵芳 李珍玲 +4 位作者 朴丽花 韩龙哲 崔银姬 权春姬 金雪梅 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期68-75,共8页
目的:探讨Yes相关蛋白(YAP)沉默对人宫颈癌(CC)SiHa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:对人CC细胞株SiHa细胞进行体外培养,慢病毒YAPshRNA转染到SiHa细胞,建立稳定转染的YAP-shRNA实验组(sh-YAP组)和空载质粒对照组(对照组),采用Wes... 目的:探讨Yes相关蛋白(YAP)沉默对人宫颈癌(CC)SiHa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:对人CC细胞株SiHa细胞进行体外培养,慢病毒YAPshRNA转染到SiHa细胞,建立稳定转染的YAP-shRNA实验组(sh-YAP组)和空载质粒对照组(对照组),采用Western blotting法检测YAP沉默效果;免疫荧光法检测2组细胞中肌动蛋白(F-actin)微丝数量及形态变化;CCK-8法、Transwell小室实验和细胞划痕实验检测2组细胞存活率、迁移及侵袭细胞数以及细胞划痕愈合率;Western blotting法检测2组细胞中上皮-间质转化(EMT)相关标记物[E钙黏蛋白(E-cadherin)和锌指转录因子(Snail)]、DNA损伤修复相关蛋白γ(γ-H2AX)和凋亡相关蛋白[c-MYC和B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)]蛋白表达水平。结果:慢病毒YAPshRNA转染SiHa细胞后,SiHa细胞中YAP蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。免疫荧光实验,YAP沉默后SiHa细胞中F-actin微丝稀疏且排列规则,细胞数量减少、细胞呈现蜷缩的状态。CCK-8法,与对照组比较,sh-YAP组培养24和48 h后SiHa细胞存活率明显降低(P<0.01);Transwell小室实验和细胞划痕实验,与对照组比较,sh-YAP组的SiHa细胞迁移和侵袭细胞数明显减少(P<0.01),细胞划痕愈合率明显降低(P<0.05);Western blotting法,与对照组比较,sh-YAP组细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05),c-MYC、Bcl-2和γ-H2AX蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论:YAP基因沉默导致人CC SiHa细胞F-actin的解聚,并调控细胞凋亡和DNA损伤修复,可能会逆转EMT进程,从而抑制肿瘤细胞增殖和迁移。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 Yes相关蛋白 细胞增殖 细胞迁移
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PKC-mTOR通路对糖尿病大鼠胃平滑肌细胞凋亡的影响及作用机制
2
作者 范秀娟 蔡英兰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1797-1805,共9页
目的:探讨蛋白激酶C(PKC)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路在糖尿病(diabetes)大鼠胃平滑肌细胞凋亡的影响及作用机制。方法:将72只雌雄不分的SPF级4周龄SD大鼠随机分为正常对照(control)组、糖尿病组、diabetes+0.1μmol/L佛波酯(PMA... 目的:探讨蛋白激酶C(PKC)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路在糖尿病(diabetes)大鼠胃平滑肌细胞凋亡的影响及作用机制。方法:将72只雌雄不分的SPF级4周龄SD大鼠随机分为正常对照(control)组、糖尿病组、diabetes+0.1μmol/L佛波酯(PMA)组、diabetes+0.2μmol/L PMA组、diabetes+0.5μmol/L PMA组、diabetes+2μmol/L双吲哚马来酰亚胺I(GF109203X)组、diabetes+5μmol/LGF109203X组和diabetes+10μmol/L GF109203X组,每组各9只。体外高糖环境下培养大鼠原代胃平滑肌细胞分为对照(CK)组、0.1μmol/L PMA处理组、0.2μmol/L PMA处理组、0.5μmol/L PMA处理组、2μmol/L GF109203X处理组、5μmol/L GF109203X处理组和10μmol/L GF109203X处理组。采用离体肌条实验技术检测胃窦平滑肌的自发性收缩,HE染色和流式细胞术检测大鼠胃平滑肌的病理变化及细胞凋亡,Western blot检测SCF、c-Kit、mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K、4E-BP1、p-4E-BP1、caspase-3、Bax和Bcl-2的蛋白表达变化。结果:(1)与control组相比,diabetes组胃窦平滑肌收缩性下降(P<0.05),胃平滑肌萎缩,细胞凋亡率增加(P<0.01),SCF、c-Kit和p-mTOR表达均下降(P<0.05或P<0.01)。(2)与diabetes组相比,diabetes+0.1μmol/L PMA组胃窦平滑肌自发性收缩无显著差异,diabetes+0.2μmol/L PMA组(P<0.05)和diabetes+0.5μmol/L PMA组(P<0.01)胃窦平滑肌自发性收缩显著增强,diabetes+0.2μmol/L PMA组和diabetes+0.5μmol/L PMA组mTOR、p70S6K(T421/S424)和p70S6K(T389)的磷酸化水平升高(P<0.05),diabetes+0.5μmol/L PMA组4E-BP1的磷酸化水平升高(P<0.05)。(3)与diabetes组相比,diabetes+2μmol/L GF109203X组胃窦平滑肌自发性收缩无显著差异,diabetes+5μmol/L GF109203X组(P<0.05)和diabetes+10μmol/L GF109203X组(P<0.01)胃窦平滑肌自发性收缩显著减弱,diabetes+5μmol/L GF109203X组和diabetes+10μmol/L GF109203X组mTOR、p70S6K(T389)的磷酸化水平下降(P<0.05),diabetes+10μmol/L GF109203X组p70S6K(T421/S424)的磷酸化水平下降(P<0.05),diabetes+GF109203X(2、5和10μmol/L)组4E-BP1的磷酸化水平均下降(P<0.05)。(4)与CK组相比,GF109203X(2、5和10μmol/L)处理组大鼠胃平滑肌细胞凋亡率增加(P<0.01),PMA(0.1、0.2和0.5μmol/L)处理组Bax和caspase-3表达均下降(P<0.05),Bcl-2的表达增加(P<0.05)。结论:在糖尿病大鼠胃平滑肌PKCmTOR信号通路的下调通过调节Bax/Bcl-2和caspase-3导致胃平滑肌细胞凋亡,并下调SCF和c-Kit,这可能会在糖尿病胃动力障碍中发挥重要的作用。 展开更多
关键词 胃平滑肌 糖尿病胃动力障碍 PKC-mTOR信号通路 干细胞因子 细胞凋亡
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氧化应激-NLRP3-TGF-β_(3)通路参与糖尿病胃轻瘫大鼠胃平滑肌细胞外基质的重构 被引量：5
3
作者 包伊特格乐 金恚戎 +1 位作者 魏宇轩 张默函 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期698-703,共6页
目的:观察糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠胃平滑肌细胞外基质(ECM)的变化,探讨氧化应激-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)-转化生长因子β_(3)(TGF-β_(3))通路在该变化中的作用。方法:SPF级4周龄雄性SD大鼠40只。将20只大鼠以链脲佐... 目的:观察糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠胃平滑肌细胞外基质(ECM)的变化,探讨氧化应激-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)-转化生长因子β_(3)(TGF-β_(3))通路在该变化中的作用。方法:SPF级4周龄雄性SD大鼠40只。将20只大鼠以链脲佐菌素诱导建立糖尿病模型,并随机分为2组(diabitic 1、2组),每组各10只;另20只正常大鼠随机分为2个正常对照组(NC 1、2组),每组各10只。检测胃内色素残留率与胃肠推进率,确定DGP大鼠模型建立。从diabitic 1、2组成功建立DGP模型的大鼠中选取10只作为DGP组,从NC 1、2组中随机选取10只作为NC组。生化检测胃平滑肌组织总超氧化物歧化酶(T-SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量;Masson染色和免疫组织化学染色观察胃平滑肌ECM及I型胶原蛋白(Col I)和III型胶原蛋白(Col III)表达变化;Western blot检测Col I、Col III、caspase-1(CASP-1)、TGF-β_(3)、NLRP3、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)的蛋白表达;ELISA检测胃平滑肌白细胞介素1β(IL-1β)含量。结果:DGP组较NC组T-SOD和CAT活性降低,MDA含量增加(P<0.01),ECM含量和Col I表达减少(P<0.01),Col III表达变化不显著(P>0.05),NLRP3、CASP-1、TGF-β_(3)和MMP-2表达均升高(P<0.01或P<0.05),TIMP-1表达下降(P<0.01),IL-1β含量增加(P<0.01)。结论:DGP大鼠胃平滑肌存在ECM重构,且氧化应激-NLRP3-TGF-β_(3)通路变化是该重构发生的原因之一。 展开更多
关键词 糖尿病胃轻瘫 细胞外基质 重构 氧化应激 NLRP3/TGF-β 信号通路
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