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猫Ⅰ型疱疹病毒DAN疫苗的构建及免疫效果的评估
1
作者
李立鹏
林委卫
+5 位作者
冯可昕
陈梦茹
康洪涛
姜骞
刘家森
赵鹏
《中国预防兽医学报》
北大核心
2025年第7期751-756,共6页
猫Ⅰ型疱疹病毒(FHV-1)表面糖蛋白gB、gD是病毒感染侵入和复制过程所必须的糖蛋白,均具有免疫原性。为评价FHV-1 gB和gD基因DNA疫苗的免疫效果,本研究设计并优化基因编码序列后合成FHV-1 gB和gD基因,分别连接至pVAX1载体构建真核表达载...
猫Ⅰ型疱疹病毒(FHV-1)表面糖蛋白gB、gD是病毒感染侵入和复制过程所必须的糖蛋白,均具有免疫原性。为评价FHV-1 gB和gD基因DNA疫苗的免疫效果,本研究设计并优化基因编码序列后合成FHV-1 gB和gD基因,分别连接至pVAX1载体构建真核表达载体pVAX1-gB、pVAX1-gD,经PCR和测序鉴定结果显示二者插入位置及基因序列均与预期一致。将重组质粒pVAX1-gB、pVAX1-gD分别转染猫肾细胞(CRFK),经间接免疫荧光试验(IFA)检测gB和gD蛋白在细胞中是否表达。结果显示gB、gD蛋白在细胞中均获得了表达。分别取重组质粒pVAX1-gB、pVAX1-gD各50μg,经肌肉注射6周龄~7周龄雌性BALB/c小鼠,4次免疫后采用IFA检测小鼠抗体水平,结果显示小鼠体内产生的抗体效价在1:64~1:256。将50μg pVAX1-gB和50μg pVAX1-gD重组质粒混合后,分别经肌肉注射45日龄~90日龄中华田园猫,二免后不同时间采血分离血清,经固定病毒稀释血清法检测猫血清的中和抗体效价,结果显示其中和抗体效价达1:141左右。二免后21 d的猫经FHV-1(10^(6)TCID50/mL)滴鼻攻毒(0.5 mL/只),结果显示,对照组猫全部发病,免疫组猫仅产生轻微临床症状,表明本实验制备的含FHV-1 gD和gB重组质粒的混合物免疫后可诱导猫产生良好的免疫保护效果。本实验首次证实FHV-1 gB基因和gD基因的DNA疫苗具有良好的免疫原性,为FHV-1 DNA疫苗的研究提供了实验依据。
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关键词
猫Ⅰ型疱疹病毒
gB蛋白
gD蛋白
DNA疫苗
免疫原性
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职称材料
SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究
被引量：
1
2
作者
赵仁双
朱羿龙
+10 位作者
尚超
韩继成
刘子睿
修志儒
李善智
李雅茹
杨霞
李霄
金宁一
金鑫
李一权
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期19-25,共7页
目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭...
目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内,经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后,检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响;通过肌肉免疫小鼠后,分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平;通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果 利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选,成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论 成功构建并获得SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD并通过各项试验证明其安全性和免疫原性。
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关键词
严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)
天坛株痘苗病毒
TK基因
同源重组
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职称材料
题名
猫Ⅰ型疱疹病毒DAN疫苗的构建及免疫效果的评估
1
作者
李立鹏
林委卫
冯可昕
陈梦茹
康洪涛
姜骞
刘家森
赵鹏
机构
延边大学农学院兽医学
中国农业科
学院
哈尔滨
兽医
研究所动物疫病防控全国重点实验室
出处
《中国预防兽医学报》
北大核心
2025年第7期751-756,共6页
基金
黑龙江省重点研发计划重点项目:伴侣动物疫病防控制剂创制(2022ZX02B12)。
文摘
猫Ⅰ型疱疹病毒(FHV-1)表面糖蛋白gB、gD是病毒感染侵入和复制过程所必须的糖蛋白,均具有免疫原性。为评价FHV-1 gB和gD基因DNA疫苗的免疫效果,本研究设计并优化基因编码序列后合成FHV-1 gB和gD基因,分别连接至pVAX1载体构建真核表达载体pVAX1-gB、pVAX1-gD,经PCR和测序鉴定结果显示二者插入位置及基因序列均与预期一致。将重组质粒pVAX1-gB、pVAX1-gD分别转染猫肾细胞(CRFK),经间接免疫荧光试验(IFA)检测gB和gD蛋白在细胞中是否表达。结果显示gB、gD蛋白在细胞中均获得了表达。分别取重组质粒pVAX1-gB、pVAX1-gD各50μg,经肌肉注射6周龄~7周龄雌性BALB/c小鼠,4次免疫后采用IFA检测小鼠抗体水平,结果显示小鼠体内产生的抗体效价在1:64~1:256。将50μg pVAX1-gB和50μg pVAX1-gD重组质粒混合后,分别经肌肉注射45日龄~90日龄中华田园猫,二免后不同时间采血分离血清,经固定病毒稀释血清法检测猫血清的中和抗体效价,结果显示其中和抗体效价达1:141左右。二免后21 d的猫经FHV-1(10^(6)TCID50/mL)滴鼻攻毒(0.5 mL/只),结果显示,对照组猫全部发病,免疫组猫仅产生轻微临床症状,表明本实验制备的含FHV-1 gD和gB重组质粒的混合物免疫后可诱导猫产生良好的免疫保护效果。本实验首次证实FHV-1 gB基因和gD基因的DNA疫苗具有良好的免疫原性,为FHV-1 DNA疫苗的研究提供了实验依据。
关键词
猫Ⅰ型疱疹病毒
gB蛋白
gD蛋白
DNA疫苗
免疫原性
Keywords
feline herpesvirus type I
gB protein
gD protein
DNA vaccine
immunogenicity
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究
被引量：
1
2
作者
赵仁双
朱羿龙
尚超
韩继成
刘子睿
修志儒
李善智
李雅茹
杨霞
李霄
金宁一
金鑫
李一权
机构
延边
大学
农学院
预防
兽医学
实验室
长春中医药
大学
院士工作站
中国农业科
学院
长春
兽医
研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期19-25,共7页
基金
吉林省自然科学基金项目(YDZJ202201ZYTS257)
吉林省教育厅科学技术研究项目(JJKH20220873KJ)。
文摘
目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内,经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后,检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响;通过肌肉免疫小鼠后,分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平;通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果 利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选,成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论 成功构建并获得SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD并通过各项试验证明其安全性和免疫原性。
关键词
严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)
天坛株痘苗病毒
TK基因
同源重组
Keywords
SARS-CoV-2
vaccinia virus Tiantan strain(VVT)
TK gene
homologous recombination
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
R373.1 [医药卫生—病原生物学]
S942.5 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猫Ⅰ型疱疹病毒DAN疫苗的构建及免疫效果的评估
李立鹏
林委卫
冯可昕
陈梦茹
康洪涛
姜骞
刘家森
赵鹏
《中国预防兽医学报》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究
赵仁双
朱羿龙
尚超
韩继成
刘子睿
修志儒
李善智
李雅茹
杨霞
李霄
金宁一
金鑫
李一权
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
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