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聚乙二醇衍生物修饰的IL-12制备及体外评价
被引量：
1
1
作者
刘艺
邹镇阳
+3 位作者
李宗艳
韩峰
乔天奎
王建刚
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第7期1495-1500,1506,共7页
目的:制备聚乙二醇衍生物修饰的IL-12,确定其修饰位点,并在稳定性、血象恢复、抗肿瘤等多方面对其进行体外评价。方法:使用聚乙二醇丙醛、马来酰亚胺衍生物修饰IL-12,超高效液相色谱(UPLC)确定两种不同衍生物的修饰位点;使用重组人IL-12...
目的:制备聚乙二醇衍生物修饰的IL-12,确定其修饰位点,并在稳定性、血象恢复、抗肿瘤等多方面对其进行体外评价。方法:使用聚乙二醇丙醛、马来酰亚胺衍生物修饰IL-12,超高效液相色谱(UPLC)确定两种不同衍生物的修饰位点;使用重组人IL-12、PEG-IL-12刺激NK92细胞,试剂盒评估IFN-γ活性及细胞毒性;刺激CD34+评估其血象恢复潜力;刺激NK细胞杀伤活力评估其在提高免疫力、抗肿瘤方面的效果。结果:与重组人IL-12相比,PEG-IL-12具有更高的稳定性、血象恢复潜能和抗肿瘤效果。结论:PEG-IL-12可有效克服重组人IL-12的诸多缺点,显著提高IL-12在临床试验中广泛应用的可能。
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关键词
聚乙二醇
IL-12
血象恢复
抗肿瘤
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职称材料
KIH结构在人白介素-35体外重组表达中的应用
被引量：
1
2
作者
张凯跃
李宗艳
+4 位作者
曹瑞晴
孟琳琳
胡祥维
顾玉超
王建刚
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第6期857-866,共10页
白细胞介素35(interleukin-35,IL-35)是非常重要的免疫抑制性细胞因子,被证实在多种疾病的免疫应答中发挥作用。本研究通过克隆人IL-35基因编码序列,构建单亚基表达载体pXC17.4-p35和pcDNA3.1(+)-EBI3,共转染CHO-K1细胞体外表达IL-35,...
白细胞介素35(interleukin-35,IL-35)是非常重要的免疫抑制性细胞因子,被证实在多种疾病的免疫应答中发挥作用。本研究通过克隆人IL-35基因编码序列,构建单亚基表达载体pXC17.4-p35和pcDNA3.1(+)-EBI3,共转染CHO-K1细胞体外表达IL-35,经检测未发现p35亚基与EBI3亚基的结合。Knobs-into-Holes(KIH)可解决异源抗体重链错配的问题,因此,在原始序列的基础上融合KIH结构构建表达载体pXC17.4-p35-Fch和pcDNA3.1(+)-EBI3-Fck来表达KIH-IL-35重组融合蛋白质;同时交换2个亚基的表达载体来验证不同表达载体对KIH-IL-35表达量的影响。经过多种蛋白质检测方法的分析,显示KIH-IL-35结构的正确表达率明显提高。大量表达后对KIH-IL-35进行亲和纯化,采用ELISA法检测纯化后的KIH-IL-35与糖蛋白130(gp130)分子的结合活性,结果表明,KIH-IL-35与gp130的结合呈浓度依赖性。采用细胞活性检测方法检测KIH-IL-35与M1细胞的间接活性,结果表明,M1细胞的抑制率与KIH-IL-35的浓度呈剂量依赖性增长。此外,本研究成功建立了一种利用激活的人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)对IL-35进行活性检测的方法,结果显示,激活的PBMCs与KIH-IL-35的浓度呈剂量依赖性增长。总之,本研究利用KIH-IL-35模型,提高了重组人IL-35的正确表达率,并验证其在体外的高活性,为IL-35的研究及类似异源二聚体细胞因子的重组表达提供新思路。
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关键词
人白细胞介素-35
Knobs-into-Holes
融合蛋白质
多聚体
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职称材料
氨基酸序列比对分析IL-12的种属特异性
3
作者
陈丽娜
王建刚
+2 位作者
王亚俊
秦欢
丁会芹
《化学与生物工程》
CAS
2021年第10期53-56,共4页
采用生物信息分析学方法,通过UniProt数据库检索人、鼠、兔、犬和猴的白介素-12(IL-12)氨基酸序列,运用ClustalW及Espript软件进行两序列比对,运用Blat数据库进行多序列比对,分析了人的IL-12氨基酸序列与其它种属的差异。结果表明,人的I...
采用生物信息分析学方法,通过UniProt数据库检索人、鼠、兔、犬和猴的白介素-12(IL-12)氨基酸序列,运用ClustalW及Espript软件进行两序列比对,运用Blat数据库进行多序列比对,分析了人的IL-12氨基酸序列与其它种属的差异。结果表明,人的IL-12α亚基及IL-12β亚基氨基酸序列与各种属的同源性大小顺序均为猴源>犬源>兔源>鼠源,说明人的IL-12氨基酸序列与恒河猴、食蟹猴的一致性较高,与其它种属的一致性普遍较低,因此存在种属特异性。该研究为IL-12产品的非临床研究和评价中的动物种属选择提供了参考,可指导新药产品的注册申报。
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关键词
白介素(IL-12)
氨基酸序列
非临床研究
种属特异性
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职称材料
题名
聚乙二醇衍生物修饰的IL-12制备及体外评价
被引量：
1
1
作者
刘艺
邹镇阳
李宗艳
韩峰
乔天奎
王建刚
机构
中国海洋大学
医药
学院
康立泰
生物医药
(
青岛
)
有限公司
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第7期1495-1500,1506,共7页
基金
国家科技重大专项“重大新药创制”(2017ZX09303017)
山东省重大科技创新工程项目(NO2018CXGC1404)。
文摘
目的:制备聚乙二醇衍生物修饰的IL-12,确定其修饰位点,并在稳定性、血象恢复、抗肿瘤等多方面对其进行体外评价。方法:使用聚乙二醇丙醛、马来酰亚胺衍生物修饰IL-12,超高效液相色谱(UPLC)确定两种不同衍生物的修饰位点;使用重组人IL-12、PEG-IL-12刺激NK92细胞,试剂盒评估IFN-γ活性及细胞毒性;刺激CD34+评估其血象恢复潜力;刺激NK细胞杀伤活力评估其在提高免疫力、抗肿瘤方面的效果。结果:与重组人IL-12相比,PEG-IL-12具有更高的稳定性、血象恢复潜能和抗肿瘤效果。结论:PEG-IL-12可有效克服重组人IL-12的诸多缺点,显著提高IL-12在临床试验中广泛应用的可能。
关键词
聚乙二醇
IL-12
血象恢复
抗肿瘤
Keywords
PEG
IL-12
Hemogram recovery
Anti-tumor
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
KIH结构在人白介素-35体外重组表达中的应用
被引量：
1
2
作者
张凯跃
李宗艳
曹瑞晴
孟琳琳
胡祥维
顾玉超
王建刚
机构
中国海洋大学海洋药物教育部重点实验室
康立泰
生物医药
(
青岛
)
有限公司
青岛
科技大学海洋科学与
生物
工程学院
生物
工程系
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第6期857-866,共10页
基金
山东省重点研发计划2023(No.2023CXGC010510)
青岛市关键技术攻关及产业化示范类项目(No.23-1-4-xxgg-14-nsh)资助。
文摘
白细胞介素35(interleukin-35,IL-35)是非常重要的免疫抑制性细胞因子,被证实在多种疾病的免疫应答中发挥作用。本研究通过克隆人IL-35基因编码序列,构建单亚基表达载体pXC17.4-p35和pcDNA3.1(+)-EBI3,共转染CHO-K1细胞体外表达IL-35,经检测未发现p35亚基与EBI3亚基的结合。Knobs-into-Holes(KIH)可解决异源抗体重链错配的问题,因此,在原始序列的基础上融合KIH结构构建表达载体pXC17.4-p35-Fch和pcDNA3.1(+)-EBI3-Fck来表达KIH-IL-35重组融合蛋白质;同时交换2个亚基的表达载体来验证不同表达载体对KIH-IL-35表达量的影响。经过多种蛋白质检测方法的分析,显示KIH-IL-35结构的正确表达率明显提高。大量表达后对KIH-IL-35进行亲和纯化,采用ELISA法检测纯化后的KIH-IL-35与糖蛋白130(gp130)分子的结合活性,结果表明,KIH-IL-35与gp130的结合呈浓度依赖性。采用细胞活性检测方法检测KIH-IL-35与M1细胞的间接活性,结果表明,M1细胞的抑制率与KIH-IL-35的浓度呈剂量依赖性增长。此外,本研究成功建立了一种利用激活的人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)对IL-35进行活性检测的方法,结果显示,激活的PBMCs与KIH-IL-35的浓度呈剂量依赖性增长。总之,本研究利用KIH-IL-35模型,提高了重组人IL-35的正确表达率,并验证其在体外的高活性,为IL-35的研究及类似异源二聚体细胞因子的重组表达提供新思路。
关键词
人白细胞介素-35
Knobs-into-Holes
融合蛋白质
多聚体
Keywords
human interleukin-35(IL-35)
Knobs in to Holes(KIH)
fusion protein
polymer
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
氨基酸序列比对分析IL-12的种属特异性
3
作者
陈丽娜
王建刚
王亚俊
秦欢
丁会芹
机构
康立泰
生物医药
(
青岛
)
有限公司
青岛
大学
出处
《化学与生物工程》
CAS
2021年第10期53-56,共4页
基金
2020年度山东省新旧动能转换重大工程重大课题攻关项目(鲁发改动能办[2020]1220号)。
文摘
采用生物信息分析学方法,通过UniProt数据库检索人、鼠、兔、犬和猴的白介素-12(IL-12)氨基酸序列,运用ClustalW及Espript软件进行两序列比对,运用Blat数据库进行多序列比对,分析了人的IL-12氨基酸序列与其它种属的差异。结果表明,人的IL-12α亚基及IL-12β亚基氨基酸序列与各种属的同源性大小顺序均为猴源>犬源>兔源>鼠源,说明人的IL-12氨基酸序列与恒河猴、食蟹猴的一致性较高,与其它种属的一致性普遍较低,因此存在种属特异性。该研究为IL-12产品的非临床研究和评价中的动物种属选择提供了参考,可指导新药产品的注册申报。
关键词
白介素(IL-12)
氨基酸序列
非临床研究
种属特异性
Keywords
interleukin-12(IL-12)
amino acid sequence
non-clinical research
species specificity
分类号
TQ464 [化学工程—制药化工]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
聚乙二醇衍生物修饰的IL-12制备及体外评价
刘艺
邹镇阳
李宗艳
韩峰
乔天奎
王建刚
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
在线阅读
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职称材料
2
KIH结构在人白介素-35体外重组表达中的应用
张凯跃
李宗艳
曹瑞晴
孟琳琳
胡祥维
顾玉超
王建刚
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
氨基酸序列比对分析IL-12的种属特异性
陈丽娜
王建刚
王亚俊
秦欢
丁会芹
《化学与生物工程》
CAS
2021
0
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