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5型肺炎链球菌荚膜多糖与CRM197蛋白结合疫苗的制备及免疫原性的研究 被引量:3
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作者 张利 彭少丹 +3 位作者 孟欣 朱涛 王浩猛 李军强 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1521-1525,共5页
目的:研制5型肺炎链球菌荚膜多糖(PN5PS)与白喉无毒突变体(CRM197)结合疫苗。方法:采用还原胺化法制备结合物,即以肺炎5型多糖的邻位羟基作为活化位点,用高碘酸钠进行氧化,形成的醛基与CRM197蛋白上的氨基生成席夫碱反应,在氰基硼氢化... 目的:研制5型肺炎链球菌荚膜多糖(PN5PS)与白喉无毒突变体(CRM197)结合疫苗。方法:采用还原胺化法制备结合物,即以肺炎5型多糖的邻位羟基作为活化位点,用高碘酸钠进行氧化,形成的醛基与CRM197蛋白上的氨基生成席夫碱反应,在氰基硼氢化钠的作用下形成共价结合物,并将制备的结合物与两种不同铝佐剂吸附,用间接ELISA法检测大鼠血清中针对肺炎5型多糖的抗体效价,比较结合疫苗与不同佐剂吸附前后的免疫原性。结果:当多糖活化度为7. 3时,总糖及蛋白的回收率较高,游离糖含量较低,糖蛋白结合比在1. 2~2.7时结合疫苗具有较强的免疫原性,结合比为1. 9时结合疫苗的免疫原性最强;结合物吸附磷酸铝佐剂后所产生的抗体水平略高于氢氧化铝。结论:通过还原胺化法制备的PN5PSCRM197结合疫苗具有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 荚膜多糖 结合疫苗 免疫原性
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新型腺病毒载体肺结核疫苗的免疫原性研究 被引量:3
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作者 史晓雨 隋秀文 +4 位作者 苗伟 高德进 王畅 魏梦函 朱涛(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期719-722,共4页
目的:评价双价肺结核疫苗的免疫原性。方法:ESAT6、rv3407、RpfB三种抗原基因融合后(TPA-3Ag)与Ag85A一种抗原基因均用重组人5型腺病毒载体进行表达,按照1∶0.2、1∶1、1∶2、1∶4四种不同滴度配比免疫小鼠。使用酶联免疫吸附实验(ELISA... 目的:评价双价肺结核疫苗的免疫原性。方法:ESAT6、rv3407、RpfB三种抗原基因融合后(TPA-3Ag)与Ag85A一种抗原基因均用重组人5型腺病毒载体进行表达,按照1∶0.2、1∶1、1∶2、1∶4四种不同滴度配比免疫小鼠。使用酶联免疫吸附实验(ELISA)进行抗原特异性体液免疫评价,使用酶联免疫斑点法(ELISpot)和细胞内细胞因子染色(ICS)进行抗原特异性细胞免疫评价。结果:双价疫苗均产生体液免疫应答和细胞免疫应答。结论:双价疫苗有提高肺结核保护范围的可能性,可能成为预防结核病的新型疫苗。 展开更多
关键词 人5型腺病毒 ESAT6 rv3407 RpfB AG85A 肺结核
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木聚糖酶的分子改造方法及其工业应用研究现状 被引量:12
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作者 张燕青 张超群 王浩猛 《中国酿造》 CAS 北大核心 2018年第1期25-29,共5页
木聚糖酶作为一种多酶体系普遍存在各种微生物中,在造纸工业、饲料工业、能源工业以及食品医药等领域的应用价值引起科学界的广泛关注。但由于天然木聚糖酶温度及酸碱性度耐受性差,活性差、表达水平低、生产成本高,严重限制了它的推广... 木聚糖酶作为一种多酶体系普遍存在各种微生物中,在造纸工业、饲料工业、能源工业以及食品医药等领域的应用价值引起科学界的广泛关注。但由于天然木聚糖酶温度及酸碱性度耐受性差,活性差、表达水平低、生产成本高,严重限制了它的推广和应用。人工改造技术的出现使得天然木聚糖酶在保留其原有优势特性的同时向着更适合社会生产需要的方向转变。从而开辟了更广阔的应用领域,创造出更大的商业价值,推动了社会和人类更大的进步。该文从木聚糖酶的生化特性着手,进而介绍木聚糖酶改良的方法,概述木聚糖酶的主要应用成果。 展开更多
关键词 木聚糖酶 生化特性 分子改造方法 应用成果
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rAAV5阴离子交换层析工艺的开发
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作者 许琳 梁欢欢 +4 位作者 李红英 韩旭 戴柳冰 马超 朱涛 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期107-113,共7页
建立一种有效提高重组5型腺相关病毒(rAAV5)实心载体比率的阴离子交换层析的纯化方法。对亲和层析捕获的rAAV5样品,使用多种阴离子交换层析柱进行离子强度线性梯度洗脱,CIMmultus QA(CIMQ)层析柱能够有效分离不含目的基因组的病毒(病毒... 建立一种有效提高重组5型腺相关病毒(rAAV5)实心载体比率的阴离子交换层析的纯化方法。对亲和层析捕获的rAAV5样品,使用多种阴离子交换层析柱进行离子强度线性梯度洗脱,CIMmultus QA(CIMQ)层析柱能够有效分离不含目的基因组的病毒(病毒空颗粒)和含目的基因组的病毒(实心载体)。基于CIMQ层析柱,进行纯化缓冲液体系、紫外目标峰收集范围的优化。通过qPCR检测病毒基因组(Vg)含量计算回收率,高效液相色谱法(HPLC)或体积排阻色谱-多角度静态光散射技术(SEC-MALS)测定实心载体比率。使用Tris,Na_(2) HPO_(4),pH 8.0缓冲体系,洗脱时收集紫外吸收值UV_(260)/UV_(280)比值大于1的部分,收集的样品实心载体比率达到80.3%。成功建立一种简单方便的阴离子交换层析方法,能去除rAAV5样品中的病毒空颗粒,使实心载体比率达到基因治疗临床产品要求。 展开更多
关键词 rAAV5 阴离子交换层析 实心载体比率 回收率 纯化
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