广西某猪场一株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离鉴定及致病性分析

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作者 李逸楠 张佳妮 +7 位作者 纪宛彤 吴钰兴 麻润雯 张凌源 李茂宁 韦懿仙 王晓晔 李珣 《广西畜牧兽医》 2025年第1期17-21,共5页

为探究2023年11月广西南宁西乡塘区某规模化养猪场内仔猪全身皮炎的感染病因,确定导致该病的病原菌并探究其病原学特性,为广西地区该疾病临床防控提供一定的理论依据。本研究无菌采集患病仔猪皮炎样本,分离培养病原菌,并通过细菌分离鉴... 为探究2023年11月广西南宁西乡塘区某规模化养猪场内仔猪全身皮炎的感染病因,确定导致该病的病原菌并探究其病原学特性,为广西地区该疾病临床防控提供一定的理论依据。本研究无菌采集患病仔猪皮炎样本,分离培养病原菌,并通过细菌分离鉴定、耐药基因的扩增、细菌全基因的测序、药物敏感性试验、动物回归试验等试验方法,从病原菌的生物学特性、耐药性以及临床发病率进行分析。结果:致病菌株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),分离菌在TSA平板上长出金黄色凸起菌落,革兰氏染色可见革兰氏阳性葡萄串状球菌。药敏试验结果提示该致病菌对阿莫西林、环丙沙星等喹诺酮类和β-内酰胺类等药物敏感,对庆大霉素、泰乐霉素等氨基糖苷类、大环内酯类药物呈耐药,对多西环素表现为中介。通过动物回归试验,将该菌株接种到健康猪的皮肤上能造成严重且典型的皮炎症状。本研究顺利分离到一株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,并对其进行全基因分析和致病性分析,本研究结果能够为该病的预防及用药提供指导性意见。 展开更多

关键词 仔猪皮炎 金黄色葡萄球菌 药物敏感性试验 动物回归试验

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广西地区腹泻仔猪呼肠孤病毒的感染及序列分析 被引量：2

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作者 隆美金 陆颖 +8 位作者 李茂宁 易春华 廖梦娟 余科辰 覃一峰 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期31-37,共7页

为了解广西地区腹泻仔猪中哺乳动物呼肠孤病毒(MRV)的感染情况及主要流行毒株,应用套式RT-PCR对广西部分地区2020-2022年173份腹泻猪样品进行检测,并选取部分阳性样品进行S 1基因扩增与分析,进一步了解广西地区MRV主要流行毒株的基因特... 为了解广西地区腹泻仔猪中哺乳动物呼肠孤病毒(MRV)的感染情况及主要流行毒株,应用套式RT-PCR对广西部分地区2020-2022年173份腹泻猪样品进行检测,并选取部分阳性样品进行S 1基因扩增与分析,进一步了解广西地区MRV主要流行毒株的基因特征。结果显示,2020-2022年173份样品MR总阳性率为18%(32/173),各年阳性率分别为29.6%、9.9%和33%。获得1株S 1基因全长序列,序列比对结果发现该序列与其他MRV S 1基因序列的核苷酸同源性为43.4%~97.9%,氨基酸同源性为26.1%~97.8%;遗传进化分析显示,获得的毒株序列为MRV3型,与其他猪源MRV3型毒株ZJ2013、IND/MZ/3013789/reo在同一分支上,同属于谱系Ⅳ。结果表明广西地区猪群存在一定程度的MRV感染,为进一步防控广西腹泻猪群中MRV的流行提供科学依据。 展开更多

关键词 哺乳动物呼肠孤病毒 S 1基因 序列分析 感染情况

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3型哺乳动物正呼肠孤病毒SYBR Green I荧光定量PCR方法的建立及应用

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作者 汤文菲 罗宇航 +12 位作者 董覃婷 朱鑫玥 王杨林 韦祖樟 陈樱 欧阳康 覃一峰 钟舒红 谢江 陈集成 王小玲 黄伟坚 潘艳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期819-824,共6页

哺乳动物正呼肠孤病毒(MRV)是双链RNA病毒,可以感染自然宿主的哺乳动物和脊椎动物。为建立一种针对3型哺乳动物正呼肠孤病毒(MRV-3)的特异且快速的检测方法,本研究根据Genbank登录的MRV-3(OQ627746-OQ627755)S1基因保守区设计1对特异性... 哺乳动物正呼肠孤病毒(MRV)是双链RNA病毒,可以感染自然宿主的哺乳动物和脊椎动物。为建立一种针对3型哺乳动物正呼肠孤病毒(MRV-3)的特异且快速的检测方法,本研究根据Genbank登录的MRV-3(OQ627746-OQ627755)S1基因保守区设计1对特异性引物,并从MRV-3中扩增S1基因,构建重组质粒p MD18-S1,经PCR和测序鉴定正确后作为质粒标准品,经反应体系及反应条件优化后首次初步建立了检测MRV-3的SYBR Green I荧光定量PCR(q PCR)方法。将质粒标准品10倍倍比稀释后作为模板经该q PCR扩增,建立标准曲线,结果显示,质粒标准品在1.3×10^(8)拷贝/μL~1.3×10^(3)拷贝/μL与各自的Ct值均呈良好的线性关系,斜率为-3.1706,R^(2)为0.9999,熔解曲线为单峰。以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛肠道病毒(BEV)、水牛匈爱病毒(Buf Hu V)、牛冠状病毒(BCo V)、牛细小病毒(BPV)和MRV-3的基因组DNA/c DNA为模板,利用本研究建立的q PCR方法检测,评估该方法的特异性;将质粒标准品10倍倍比稀释至1.3×10^(2)拷贝/μL~1.3×10^(8)拷贝/μL后作为模板,分别利用本研究建立的q PCR和常规PCR检测,比较两种方法的检测结果,评估本研究建立q PCR方法的敏感性;以1.3×10^(3)拷贝/μL~1.3×10^(7)拷贝/μL 5个不同浓度的质粒标准品为模板,利用该方法分别进行批内和批间的重复性试验,评估该方法的重复性。结果显示,该方法只能检测出MRV-3,其他相关病原的检测结果均为阴性;该q PCR对质粒标准品的检测限为1.3×10^(3)拷贝/μL,比常规PCR敏感性高10 000倍;批内和批间重复性试验的变异系数均小于或等于1.0%,表明该q PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好。利用该方法检测220份牛粪便样品,结果显示MRV-3的检出率(3.64%,8/220)高于常规PCR的检出率(1.36%,3/220),两种检测方法的阳性符合率达100%,阴性符合率为97.75%,总符合率为97.78%。综上所述,本研究首次建立的检测MRV-3的SYBR Green I q PCR方法可以用于临床牛腹泻病原的检测,为MRV-3尤其是牛源MRV-3提供了一种快速灵敏的检测手段,也为MRV-3的后续研究奠定了基础。 展开更多

关键词 哺乳动物正呼肠孤病毒 SYBR Green I 荧光定量PCR 病毒检测

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广西地区猪流行性腹泻案例及病毒序列分析 被引量：2

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作者 陆颖 王亚鹏 +6 位作者 王若木 曾德平 覃一峰 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 《云南畜牧兽医》 2024年第6期10-14,共5页

以广西某规模化养殖场暴发猪流行性腹泻(PED)为背景进行调查研究,两个养殖场分批采样69份,其中A猪场样品28份,猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性率为71.43%(20/28);B猪场样品41份,PEDV阳性率为39.02%(16/41)。通过RT-PCR检测对广西钦州(GXQZ)... 以广西某规模化养殖场暴发猪流行性腹泻(PED)为背景进行调查研究,两个养殖场分批采样69份,其中A猪场样品28份,猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性率为71.43%(20/28);B猪场样品41份,PEDV阳性率为39.02%(16/41)。通过RT-PCR检测对广西钦州(GXQZ)阳性样品进行PEDV S1部分基因的扩增,GXQZ样品S基因与国内外参考毒株的S基因进行同源性分析,氨基酸同源性为84.3%~98.7%;氨基酸序列比较结果显示,该GXQZ样品氨基酸在多个位点发生了变异,进行序列分析并构建遗传进化树。结果表明,GXQZ样品属于G2a亚群,对进一步研究广西PEDV的遗传变异提供科学依据,为广西PED疫情的防控提供参考。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 S基因 遗传进化

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猪流行性腹泻病毒感染仔猪空肠组织的转录组学分析

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作者 曾德平 陆颖 +8 位作者 余科辰 卢峥朴 柏家果 秦秋英 隆美金 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期11-18,共8页

猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染仔猪可引起严重腹泻,导致肠道黏膜损伤、免疫功能低下。为探究PEDV感染仔猪空肠基因组转录水平的变化,筛选宿主免疫应答的差异表达基因,本研究收集PEDV感染仔猪的空肠组织,利用RNA-Seq技术进行转录组学测序... 猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染仔猪可引起严重腹泻,导致肠道黏膜损伤、免疫功能低下。为探究PEDV感染仔猪空肠基因组转录水平的变化,筛选宿主免疫应答的差异表达基因,本研究收集PEDV感染仔猪的空肠组织,利用RNA-Seq技术进行转录组学测序分析。RNA-seq结果显示,与正常未感染仔猪相比,PEDV感染仔猪存在339个显著差异表达基因(DEGs),其中182个上调基因,157个下调基因。GO分子功能结果显示,免疫相关差异表达基因主要与免疫球蛋白和受体结合、T细胞增殖等有关。KEGG通路富集结果显示,差异表达基因主要涉及TNF信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用、Toll样受体信号通路、Janus激酶/信号转导与转录激活子信号通路以及RIG-I受体信号通路等;最后再利用qRT-PCR对差异表达基因进行验证,其结果与转录组学结果基本一致。本研究为进一步研究PEDV感染导致宿主免疫应答变化机制提供了科学依据。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 转录组分析 差异表达 RNA-SEQ 先天免疫

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A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体制备与竞争ELISA方法的建立

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作者 何启杰 农作荣 +7 位作者 王豪 牛晨霞 莫勇芳 欧阳康 陈樱 黄伟坚 黄稳妃 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2025年第2期23-29,共7页

依据A型塞内卡病毒(SVA)结构蛋白VP2基因序列构建原核表达质粒pET-30a-VP2,经转化和诱导,表达出VP2重组蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,采集血清获得VP2的多克隆抗体。用间接ELISA方法测定血清中VP2抗体效价,并用Western blot与IFA验证其... 依据A型塞内卡病毒(SVA)结构蛋白VP2基因序列构建原核表达质粒pET-30a-VP2,经转化和诱导,表达出VP2重组蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,采集血清获得VP2的多克隆抗体。用间接ELISA方法测定血清中VP2抗体效价,并用Western blot与IFA验证其特异性。随后建立竞争ELISA方法,并对实验室收集的2016-2019年广西11个地区64个规模猪场592份猪血清进行SVA抗体检测。结果显示,诱导表达出的重组VP2蛋白主要以可溶性形式表达,血清中VP2抗体效价大于1∶64000,且制备的VP2抗体能特异结合SVA感染细胞中的VP2蛋白。竞争ELISA检测结果显示广西地区猪场SVA血清阳性率高达76.6%,血清样品阳性率高达55.9%,研究结果为SVA的检测和研究奠定了基础。 展开更多

关键词 A型塞内卡 VP2蛋白 原核表达 多克隆抗体 竞争ELISA

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靶向MyD88基因siRNA的筛选及其对狂犬病病毒感染的影响初探

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作者 蔡宗伶 栗朵朵 +2 位作者 谭深根 李晓宁 罗廷荣 《广西畜牧兽医》 2025年第1期1-4,共4页

为探究MyD88在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)感染中的作用,本实验针对MyD88的mRNA靶序列设计并合成3对不同的siRNA序列,利用脂质体瞬时转染BV2细胞,通过实时荧光定量PCR及Western blot检测siRNA对BV2细胞中MyD88的干扰效率。结果显示,... 为探究MyD88在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)感染中的作用,本实验针对MyD88的mRNA靶序列设计并合成3对不同的siRNA序列,利用脂质体瞬时转染BV2细胞,通过实时荧光定量PCR及Western blot检测siRNA对BV2细胞中MyD88的干扰效率。结果显示,转染24 h后,各实验组中MyD88 mRNA表达量均显著低于阴性对照组,其中siRNA-M174的效果最佳、siRNA-M587次之;将200 nM siRNA-M174、siRNA-M587转染BV2细胞24 h后,经计算,干扰效率分别为75.35%和71%,两者共转染后,干扰效率为86.5%。结果表明,本实验成功筛选出靶向MyD88基因的有效干扰序列。脂质体瞬时转染筛选出的2对siRNA于BV2细胞,RABV接种BV2细胞,通过实时荧光定量PCR及Western blot检测。接毒后转染24 h,实验组MyD88基因的mRNA表达量低于阴性对照组,MyD88蛋白及RABV的N蛋白表达量下降。本实验结果证实了MyD88基因被特异性siRNA干扰后,也影响RABV的蛋白合成,为后续MyD88与狂犬病病毒的互作研究提供实验依据。 展开更多

关键词 MYD88 SIRNA RNAI 狂犬病病毒

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猪瘟病毒E^(rns)蛋白原核表达及其多克隆抗体制备

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作者 宋丹丹 金奕欣 +5 位作者 黄袁慧 王文锋 闵开骏 张传亮 罗廷荣 李晓宁 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期2835-2842,共8页

【目的】制备猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)E^(rns)蛋白多克隆抗体,为进一步研究E^(rns)蛋白结构和功能及解析CSFV的致病机理提供理论依据。【方法】采用生物信息学方法预测E^(rns)蛋白结构。以真核表达载体pCMV-HA-E^(r... 【目的】制备猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)E^(rns)蛋白多克隆抗体,为进一步研究E^(rns)蛋白结构和功能及解析CSFV的致病机理提供理论依据。【方法】采用生物信息学方法预测E^(rns)蛋白结构。以真核表达载体pCMV-HA-E^(rns)为模板,PCR克隆CSFV E^(rns)基因,构建原核表达载体pET-32a-E^(rns)。将pET-32a-E^(rns)转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,添加IPTG诱导E^(rns)蛋白表达,确定Erns蛋白表达形式。利用Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,以获得高纯度的E^(rns)蛋白。采用背部皮下多点注射法免疫小鼠,经4次免疫后采集小鼠血液,分离血清制备获得Erns蛋白多克隆抗体,并检测其效价和特异性。【结果】E^(rns)蛋白不含信号肽和跨膜结构域,为亲水性蛋白,含有多个B细胞抗原表位;E^(rns)基因片段大小为681 bp,其重组蛋白主要以包涵体形式表达;E^(rns)蛋白多克隆抗体对原核表达的重组蛋白效价为1∶64000,对真核表达的重组蛋白效价为1∶1000,且能特异性识别CSFV。【结论】制备获得的E^(rns)蛋白多克隆抗体具有效价高和特异性强等特点,可用于ELISA和Western blotting检测细胞中E^(rns)蛋白水平。E^(rns)蛋白多克隆抗体的制备有助于更好地理解E^(rns)蛋白在CSFV感染和免疫过程中的作用,对深入研究E^(rns)蛋白功能、CSFV生物学特性及猪瘟的防治和诊断方法的开发具有重要意义。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E^(rns)蛋白 原核表达 多克隆抗体

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表达IFN-α的重组猪繁殖与呼吸综合病毒的构建及生物学特性分析

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作者 黄静 王玉旭 +5 位作者 王豪 陈樱 欧阳康 黄伟坚 黄稳妃 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期48-53,共6页

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害我国生猪业的重要疫病之一,其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),是一种免疫抑制性病毒。干扰素(IFN)是一类具有免疫调节功能和抗病毒作用的细胞因子。IFN-α除更直接的抗病毒作用外,还可以调节宿主... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害我国生猪业的重要疫病之一,其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),是一种免疫抑制性病毒。干扰素(IFN)是一类具有免疫调节功能和抗病毒作用的细胞因子。IFN-α除更直接的抗病毒作用外,还可以调节宿主的先天性和适应性免疫。论文构建表达IFN-α的重组PRRSV,分析重组病毒的生物学特性以及IFN-α的生物学活性。通过反向遗传操作方法将IFN-α插入到PRRSV ORF1b和ORF2a之间,重组质粒转染细胞后可以拯救出重组病毒(rGXAM-P-IFN-α)。插入到PRRSV基因组中的IFN-α可遗传稳定9代。重组病毒生长特性分析可发现rGXAM-P-IFN-α复制能力显著低于亲本病毒。rGXAM-P-IFN-α感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)可显著上调抗病毒基因(PKR,ISG15和ISG54)mRNA表达水平,为进一步研发新型PRRSV疫苗提供参考。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 感染性克隆 Α干扰素 抗病毒基因

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猪丁型冠状病毒NSP14蛋白截短表达及其间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：1

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作者 刘思雨 何颖 +6 位作者 卢冰霞 赵武 赵硕 许心婷 全琛宇 秦毅斌 欧阳康 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1238-1248,共11页

【目的】进行猪丁型冠状病毒(PDCoV)NSP14蛋白截短原核表达,制备PDCoV NSP14蛋白的多克隆抗体,并建立检测PDCoV抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),为探究PDCoV NSP14蛋白的生物学功能及进行PDCoV监测和诊断提供参考依据。【方法】以PDC... 【目的】进行猪丁型冠状病毒(PDCoV)NSP14蛋白截短原核表达,制备PDCoV NSP14蛋白的多克隆抗体,并建立检测PDCoV抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),为探究PDCoV NSP14蛋白的生物学功能及进行PDCoV监测和诊断提供参考依据。【方法】以PDCoV 1468B毒株为模板,构建NSP14截短基因原核重组质粒pET32a-NSP14,经双酶切和测序鉴定后,通过原核表达系统获得NSP14融合蛋白,将其纯化后免疫新西兰大白兔获得NSP14蛋白的多克隆抗体,进行Western blotting验证,并用间接ELISA测定其效价。以NSP14融合蛋白为抗原包被酶标板,采用方阵滴定法优化一系列反应条件,构建检测PDCoV抗体的间接ELISA。【结果】在构建的pET32a-NSP14重组质粒中,NSP14蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,其大小约40.2 kD;制备的NSP14蛋白多克隆抗体效价在1∶512000以上,经Western blotting验证,能与纯化的NSP14融合蛋白发生特异性反应。经过筛选,确定所构建检测PDCoV抗体间接ELISA的最佳反应条件:NSP14融合蛋白最佳包被浓度为4.0μg/mL,包被条件为37℃、2.0 h;封闭条件为5%脱脂奶粉封闭1.0 h;待检血清按1∶400稀释,孵育2.0 h;酶标二抗1∶2500稀释,孵育60.0 min;TMB底物显色时间为30.0 min。特异性试验结果表明,猪病阳性血清PRRSV、JEV、PCV2、PPV、PEDV和CSFV的OD450均小于0.235,说明优化的间接ELISA检测的病原与其他猪病毒阳性血清无反应,特异性良好。重复性试验结果表明,优化的间接ELISA检测猪病阳性血清的批内和批间变异系数均小于10.000%,说明优化的ELISA具有较好的重复性。【结论】成功制备具有高效价和良好免疫反应性的PDCoV NSP14蛋白多克隆抗体,并建立检测该抗体的特异性、敏感性和重复性良好的间接ELISA,可供进一步研究PDCoV NSP14蛋白的生物学功能及进行PDCoV监测和诊断参考应用。 展开更多

关键词 猪丁型冠状病毒 NSP14蛋白 原核表达 多克隆抗体制备 间接ELISA

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猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立 被引量：1

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作者 覃建光 姚静 +7 位作者 刘文波 刘嘉琪 陈国昌 任同伟 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2024年第9期1-6,共6页

为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白多克隆抗体,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,通过PCR扩增N蛋白基因,将N蛋白基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pE... 为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白多克隆抗体,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,通过PCR扩增N蛋白基因,将N蛋白基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-N。将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞中,通过IPTG诱导N蛋白表达,将纯化后的重组N蛋白免疫小鼠,获得N蛋白多克隆抗体。将纯化后的N蛋白作为抗原,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,并评估该方法的特异性、重复性和准确性。结果表明,表达的重组N蛋白呈可溶性,制备的N蛋白多克隆抗体ELISA效价能达到1∶2048000,IFA和Western blot结果表明制备的鼠多克隆抗体能特异性识别PRRSV N蛋白。建立的间接ELISA方法特异性良好,重复性试验变异系数均小于10%,且与同类型商品化试剂盒结果比较,符合率达到91.10%,可为PRRSV N蛋白的免疫学检测和结构功能的研究提供参考。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白 原核表达 多克隆抗体 间接ELISA

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1株猪源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定及致病性研究 被引量：1

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作者 吴钰兴 邹潍力 +9 位作者 程子馨 莫玉鹏 张凌源 纪宛彤 陈思宇 郑浩东 麻润雯 李珣 李茂宁 王晓晔 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2697-2706,共10页

【目的】探究A型产气荚膜梭菌在仔猪腹泻中的致病性,为A型产气荚膜梭菌感染所致腹泻的诊断和治疗提供理论依据和参考。【方法】通过培养特性和革兰染色镜检对分离菌进行初步鉴定,通过生化试验、毒素基因PCR扩增、16S rRNA序列比对并构... 【目的】探究A型产气荚膜梭菌在仔猪腹泻中的致病性,为A型产气荚膜梭菌感染所致腹泻的诊断和治疗提供理论依据和参考。【方法】通过培养特性和革兰染色镜检对分离菌进行初步鉴定,通过生化试验、毒素基因PCR扩增、16S rRNA序列比对并构建进化树对可疑菌株进一步鉴定,利用药敏试验和动物回归试验研究分离菌株的耐药性和致病性。【结果】分离菌株在TSN平板上呈黑色菌落,在血平板上呈α、β双溶血环,革兰染色呈紫色粗大杆菌。生化试验结果显示,分离菌株葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、还原性硝酸盐试验、H_2S试验和明胶液化均呈阳性,甘露醇、吲哚试验和水杨酸结果呈阴性。16S rRNA序列比对结果显示,分离菌与NCBI数据库中已公布的产气荚膜梭菌16S rRNA基因序列相似性均>99%,鉴定该菌株为产气荚膜梭菌。PCR扩增出plc及cpb2基因,表明该菌株为携带β2毒素的A型产气荚膜梭菌。药敏试验结果显示,分离菌株对青霉素G、庆大霉素、林可霉素、磺胺异噁唑、环丙沙星、诺氟沙星耐药。动物回归试验结果显示,攻菌后仔猪粪便中可检出大量产气荚膜梭菌,该菌株可引起仔猪腹泻,死亡率达50%;死亡仔猪剖检可见小肠充血、出血、鼓气,从脾脏、小肠中可分离出产气荚膜梭菌,且在损伤严重的空肠肠段中分离出高载量A型产气荚膜梭菌。【结论】本试验成功分离出1株A型产气荚膜梭菌,可引起新生仔猪发病,致病性较强,该研究结果为A型产气荚膜梭菌感染仔猪的诊断、流行病学调查、治疗提供了参考依据。 展开更多

关键词 A型产气荚膜梭菌 新生仔猪 分离鉴定 致病性

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植物精油对传染性支气管炎病毒人工感染雏鸡的防治效果 被引量：1

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作者 林家杰 林子学 +6 位作者 王立佳 王国威 黄燕萍 张愉 张桃妮 晋英浩 磨美兰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4605-4619,共15页

旨在探讨植物精油(商品名:舒柠500)对禽传染性支气管炎病毒(IBV)人工感染雏鸡的防治效果。将260羽1日龄健康非免疫雏鸡分成空白组、模型对照组(A、B、C)、预防组(A、B、C)、治疗组(A、B、C)和阳性药物组(A、B、C)共13组,每组20只。除空... 旨在探讨植物精油(商品名:舒柠500)对禽传染性支气管炎病毒(IBV)人工感染雏鸡的防治效果。将260羽1日龄健康非免疫雏鸡分成空白组、模型对照组(A、B、C)、预防组(A、B、C)、治疗组(A、B、C)和阳性药物组(A、B、C)共13组,每组20只。除空白组外,其余各A组雏鸡均在8日龄单感染IBV毒株GX-QZ20181028(LX4型),各B组雏鸡均在8日龄单感染IBV毒株GX-NN20200723(Taiwan型),各C组雏鸡均在8日龄共感染IBV毒株GX-QZ20181028(LX4型)和GX-NN20200723(Taiwan型)。预防组在3日龄(感染前5 d)饮水给药(植物精油,1 mL·L^(-1)水);治疗组(植物精油1 mL·L^(-1)水)和阳性药物组(双黄连口服液,0.7 mL·L^(-1)水)均在感染后半数以上的雏鸡表现临床症状时给药治疗,连续给药5 d。在雏鸡8、9、13、14、15、16、17、18、19、20日龄时,评定临床症状计分与疗效;在雏鸡19、22日龄时,观察病理组织学病变、测定免疫器官指数并检测气管和肾脏病毒载量;在雏鸡8、9、15、17、19、22日龄时,对IBV特异性抗体和血清中细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-6进行检测。结果显示,预防组A、B和C的保护率分别为75.00%、85.00%和70.00%;治疗组A、B、C的有效率分别为92.31%、78.57%、77.78%。模型对照组雏鸡可见大量气管黏膜上皮细胞纤毛减少或消失,并发生变性坏死,肾间质淋巴细胞浸润,其余组均无明显病变。预防组、治疗组和阳性药物组气管和肾组织病毒载量均显著低于模型对照组(P<0.05)。模型对照组胸腺与法氏囊指数显著低于其余各组(P<0.05)。17日龄(给药后第5天),预防组、治疗组、阳性药物组抗体水平上升,至22日龄(停药后第5天),抗体水平显著高于模型对照组(P<0.05)。13至22日龄(给药前至停药后第5天),模型对照组的IL-4、IFN-γ含量均显著低于其余各组(P<0.05),但IL-6含量显著高于其余各组(P<0.05)。综上,在本试验条件下,植物精油对IBV单感染和共感染雏鸡均有较好的防治作用,其防治作用主要通过抑制病毒复制、促进免疫器官发育和抗体生成、调节细胞因子来实现。本研究为禽传染性支气管炎(IB)防治提供新思路,也为其它动物冠状病毒病有效防治提供了参考。 展开更多

关键词 传染性支气管炎病毒 精油 预防 治疗

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基于狂犬病病毒G蛋白Ⅳ区抗原位点的多克隆抗体制备 被引量：1

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作者 张传亮 段辰星 +2 位作者 宋丹丹 李晓宁 罗廷荣 《广西畜牧兽医》 2024年第5期188-191,共4页

基于大肠杆菌原核表达的G重组蛋白缺少糖基化修饰,诱导机体产生中和抗体的能力较弱。为制备G蛋白多克隆抗体,针对G蛋白抗原Ⅳ区第251位氨基酸的中和抗原表位,以日本RABV疫苗株RC-HL的G蛋白序列为模板,设计了含有17个氨基酸的多肽序列MQT... 基于大肠杆菌原核表达的G重组蛋白缺少糖基化修饰,诱导机体产生中和抗体的能力较弱。为制备G蛋白多克隆抗体,针对G蛋白抗原Ⅳ区第251位氨基酸的中和抗原表位,以日本RABV疫苗株RC-HL的G蛋白序列为模板,设计了含有17个氨基酸的多肽序列MQTSDETKWCPPDQLVN(G17),合成后偶联KLH蛋白,与弗氏佐剂乳化后免疫小鼠,采集血液分离血清获得抗G蛋白多克隆抗体。实验显示,制备的多克隆抗体效价在1∶500以上,在1∶200的稀释度下,可以对原核表达的G重组蛋白、真核表达的G重组蛋白进行Western Blot检测。基于狂犬病病毒G蛋白抗原位点Ⅳ区制备获得的抗G蛋白多克隆抗体具有反应性好及特异性强的特点,能够用于检测G重组蛋白,为进一步研究G蛋白功能、研发单抗和设计疫苗打下良好基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 G蛋白 抗原位点Ⅳ区 多克隆抗体

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鼠源ATP5B基因克隆及其原核和真核表达载体构建

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作者 段辰星 黄袁慧 +2 位作者 闵开骏 李晓宁 罗廷荣 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1807-1816,共10页

【目的】克隆鼠源ATP5B基因,构建其原核和真核表达载体,为研究ATP5B蛋白功能及其在病毒感染过程中的作用机制提供基础。【方法】克隆鼠源ATP5B基因编码区(CDS),运用ProtParam、ProtScale和SignalP-5.0等对ATP5B蛋白进行生物信息学分析... 【目的】克隆鼠源ATP5B基因,构建其原核和真核表达载体,为研究ATP5B蛋白功能及其在病毒感染过程中的作用机制提供基础。【方法】克隆鼠源ATP5B基因编码区(CDS),运用ProtParam、ProtScale和SignalP-5.0等对ATP5B蛋白进行生物信息学分析。采用同源重组方法构建原核表达载体pGEX-4T-1-ATP5B-Flag和真核表达载体pcDNA3.0-ATP5B-Flag。以原核表达载体pGEX-4T-1-ATP5B-Flag转化大肠杆菌BL21感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达,分析最适诱导温度和IPTG浓度。以真核表达载体pcDNA3.0-ATP5B-Flag转染HEK-293T细胞,通过Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)检测ATP5B蛋白在细胞中的表达及分布情况。【结果】鼠源ATP5B基因CDS长1590 bp,鼠源ATP5B蛋白由529个氨基酸残基构成,分子量为55 kD,理论等电点(pI)为5.21,属于稳定的疏水性蛋白,无跨膜结构域和信号肽,不属于分泌蛋白;鼠源ATP5B蛋白二级结构中α-螺旋占43.67%,无规则卷曲占32.51%,β-转角占9.45%,延伸链占14.37%。原核表达载体pGEX-4T-1-ATP5B-Flag经IPTG诱导后,通过考马斯亮蓝染色和Western blotting在81 kD处成功检测到融合蛋白,且主要以包涵体形式表达,诱导条件以30℃、0.5 mmol/L IPTG的效果更好。以真核表达载体pcDNA3.0-ATP5B-Flag转染HEK-293T细胞后,在55 kD处检测到Flag标签特异性条带,即ATP5B蛋白在HEK-293T细胞中成功表达,IFA检测结果表明该蛋白主要定位在细胞质中。【结论】成功构建鼠源ATP5B基因原核和真核表达载体,原核表达载体表达出的融合蛋白主要以包涵体形式存在,只有少量可溶蛋白,真核表达的ATP5B蛋白主要定位在细胞质中。鼠源ATP5B蛋白是理化性质稳定的疏水性蛋白,无信号肽位点,不属于分泌蛋白。 展开更多

关键词 鼠源ATP5B基因 基因克隆 生物信息学分析 表达载体构建

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一例犬皮肤细菌真菌混合感染的病例报告 被引量：2

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作者 彭露莹 姜华 +2 位作者 甘泉 周华波 陈樱 《今日畜牧兽医》 2024年第5期104-106,共3页

犬皮肤病是一类易混合感染且发病率高的疾病。犬的皮肤真菌感染以大小孢子菌和马拉色菌多发,皮肤细菌感染常由葡萄球菌、链球菌等细菌所引起,两者易混合发生,临床上常见的感染有球菌与孢子菌混合感染、球菌与马拉色菌混合感染等。本文... 犬皮肤病是一类易混合感染且发病率高的疾病。犬的皮肤真菌感染以大小孢子菌和马拉色菌多发,皮肤细菌感染常由葡萄球菌、链球菌等细菌所引起,两者易混合发生,临床上常见的感染有球菌与孢子菌混合感染、球菌与马拉色菌混合感染等。本文就一例犬皮肤细菌真菌混合感染的临床诊断及治疗方法进行总结,为临床兽医师的诊断与治疗提供参考。 展开更多

关键词 犬 真菌 混合感染 治疗

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一例猫华支睾吸虫病的诊治 被引量：2

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作者 盘冬梅 周华波 +2 位作者 唐盈 冼博耀 陈樱 《云南畜牧兽医》 2024年第2期24-27,共4页

猫华支睾吸虫病是一种寄生虫病,多发生于有食生鱼史的猫,临床上常表现为精神不振、厌食、呕吐、体重减轻、消瘦、贫血、便秘或腹泻、黄疸等症状。现就一例猫华支睾吸虫病的诊断及综合治疗进行总结,为该类疾病的诊治提供参考。

关键词 猫 华支睾吸虫 胆囊炎 脂肪肝

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一例犬传染性性病肿瘤的诊治

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作者 张怡欣 何颖 +3 位作者 班云 徐韦婕 周华波 陈樱 《广西畜牧兽医》 2024年第5期218-220,共3页

犬的传染性性病肿瘤(Transmissible Venereal Tumor,TVT),也被称为传染性性病肉瘤或Sticker’s肉瘤,是一种犬自然发病的水平传播性肿瘤。该病主要损害犬外生殖器,偶尔还会感染犬内生殖器及其他黏膜[1]。该病可发生于犬的任何年龄[2],多... 犬的传染性性病肿瘤(Transmissible Venereal Tumor,TVT),也被称为传染性性病肉瘤或Sticker’s肉瘤,是一种犬自然发病的水平传播性肿瘤。该病主要损害犬外生殖器,偶尔还会感染犬内生殖器及其他黏膜[1]。该病可发生于犬的任何年龄[2],多发于2~5岁的性成熟的繁殖适龄犬,潜伏期通常为2~6个月。该病主要通过交配进行传播,当动物舔舐时也可能发生在其他部位,如口腔、皮肤等,也有研究表明,该病还可影响眼、鼻、口、大脑和淋巴结等内部器官。感染犬的临床表现主要是肿瘤呈菜花状,肿瘤表面溃疡和发炎,且伴有血液渗出[3,4]。患该传染性性病肿瘤的母犬可表现为阴道流血,这与母犬发情的临床表现非常相似。有研究表明,肿瘤细胞来源于组织细胞[5]。 展开更多

关键词 感染犬 内部器官 水平传播 母犬 性成熟 传染性性病肿瘤 组织细胞 内生殖器

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水牛感染大片吸虫前后血清补体C3与C4水平的动态

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作者 郭炎凤 郑梦伟 +3 位作者 杨延坤 李亮 张为宇 邸文达 《广西畜牧兽医》 2024年第3期93-96,共4页

为了探究在大片吸虫(Fasciolagigantica)感染水牛过程中,水牛补体C3与C4的动态变化,探索补体系统在水牛感染大片吸虫中的作用过程,试验将6头片形吸虫阴性水牛分为A组(对照组,3头)和B组(感染组,3头),B组每头经口感染250个囊蚴,A组经口服0... 为了探究在大片吸虫(Fasciolagigantica)感染水牛过程中,水牛补体C3与C4的动态变化,探索补体系统在水牛感染大片吸虫中的作用过程,试验将6头片形吸虫阴性水牛分为A组(对照组,3头)和B组(感染组,3头),B组每头经口感染250个囊蚴,A组经口服0.85%NaCl溶液模拟感染,在感染前(0周)与感染后第1~6、8、10、12、14、16周分别收集血清,应用ELISA检测血清补体C3与C4含量。结果表明:对于补体C3水平,A组不同周次无明显变化;B组不同周次呈波动变化,与0周相比1、12、14周显著升高(P<0.05);B组在感染后1、3、14、16周的水平显著高于A组对应周次的水平(P<0.05)。对于补体C4水平,A组不同周次无明显变化;B组不同周次呈波动变化,与0周相比感染后周次均极显著升高(P<0.01);B组在感染后1、3、4、5、12、14、16周的水平显著高于A组对应周次的水平(P<0.05)。本研究提示:在大片吸虫感染过程中,水牛补体的经典途径和凝集素途径在不同周次可能被大片吸虫抑制,而此抑制作用可能与大片吸虫的免疫逃避有关。 展开更多

关键词 大片吸虫 水牛 补体C3 补体C4

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边缘无形体MSP2的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

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作者 罗雨昕 赵敏 +3 位作者 陈琬婷 邹予 咸承俊 王冬英 《现代畜牧科技》 2024年第3期17-20,共4页

为建立可检测边缘无形体(Anaplasma marginale)的血清学检测方法,该研究根据GenBank收录的边缘无形体MSP2基因序列(登录号:EU526889),构建重组质粒pET28a-MSP2,原核表达获得pET28a-MSP2重组蛋白,将纯化后的蛋白作为抗原,建立间接ELISA... 为建立可检测边缘无形体(Anaplasma marginale)的血清学检测方法,该研究根据GenBank收录的边缘无形体MSP2基因序列(登录号:EU526889),构建重组质粒pET28a-MSP2,原核表达获得pET28a-MSP2重组蛋白,将纯化后的蛋白作为抗原,建立间接ELISA检测方法。结果显示,该研究建立的间接ELISA方法,抗原最佳包被浓度、血清最佳稀释度和酶标二抗最佳工作浓度分别为8μg/mL、1∶400和1∶2 000,特异性、灵敏性和重复性良好。本试验成功表达并纯化了边缘无形体的MSP2蛋白,并建立了边缘无形体抗体间接ELISA方法,为边缘无形体的监测和诊断提供参考。 展开更多

关键词 边缘无形体 MSP2蛋白 原核表达 间接ELISA

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