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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白单克隆抗体制备与鉴定被引量：3: 1; 作者赵孟孟张二芹 +5 位作者冯松林郭依嘉阮海宇王文佳邢星张桂红《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期63-69,共7页; 根据NSP9非结构蛋白参数选取相应30 bp DNA片段,片段串联后人工合成并连接p ET-28a(+)载体,大肠杆菌BL21中表达得到可溶蛋白,镍柱亲和层析纯化后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞骨髓瘤细胞融合。细胞融合后利用间接ELISA法杂... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP9 单克隆抗体杂交瘤; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪繁殖与呼吸综合征病毒FS株Nsp9基因的克隆与序列分析被引量：4: 2; 作者赵孟孟宋中宝 +4 位作者冯松林王文佳邢星冯嘉萍张桂红《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2249-2256,共8页; 为了对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）Nsp9基因的功能进行预测,利用RT-PCR法从细胞毒中扩增PRRSV FS株的Nsp9基因,并将其克隆至pMD18-T载体上,测序得到Nsp9基因序列,利用多种生物信息学软件分析Nsp9序列生物学信息。结果显示,Nsp9基... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp9基因克隆序列分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

Nsp9基因在Marc-145细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响被引量：3: 3; 作者赵孟孟冯松林 +3 位作者王文佳邢星冯嘉萍张桂红《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期3114-3120,共7页; 试验旨在验证Nsp9基因是否影响猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的复制。构建含有Nsp9全长基因的质粒pIRES2-EGFP-Nsp9,并转染到Marc-145细胞中,接毒之后分别通过实时荧光定量PCR和W... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP 9 基因 MARC-145 细胞复制; 在线阅读下载PDF 职称材料

Nsp9基因实时荧光定量PCR检测方法的建立及其在感染细胞过程中表达量的变化被引量：3: 4; 作者赵孟孟冯松林 +3 位作者王文佳邢星冯嘉萍张桂红《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第10期2534-2540,共7页; 试验旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）Nsp9基因的实时荧光定量PCR检测方法,并探究其在感染细胞过程中表达量的变化。根据PPRSV Nsp9基因序列设计引物,建立基于SYBR Green... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR Nsp9基因; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白的亚细胞定位与功能预测被引量：2: 5; 作者赵孟孟冯丽丽 +9 位作者张二芹马红芳冯松林崔甜甜杨春辉王文佳邢星张雅冯嘉萍张桂红《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2016年第12期138-142,共5页; 为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白9(NSP9)的亚细胞定位,并探索NSP9蛋白在PRRSV复制过程中的定位变化,首先预测NSP9蛋白的生物信息学功能,之后将含有NSP9基因的质粒转染Marc-145细胞,并接种PRRSV,通过间接免疫荧光方法检... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP9蛋白真核表达亚细胞定位; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪繁殖与呼吸综合征病毒强、弱毒株Nsp9基因的反向遗传学替换改造被引量：2: 6; 作者赵孟孟钱娟娟 +5 位作者崔甜甜冯松林王文佳邢星冯嘉萍张桂红《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第11期2852-2858,共7页; 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)Nsp9基因编码RNA依赖的RNA聚合酶,在病毒复制中发挥重要作用。为了探索Nsp9基因与病毒的毒力、复制能力及细胞嗜性的相关性,本研究利用反向遗传学... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp9基因反向遗传学病毒拯救; 在线阅读下载PDF 职称材料

PRRSV强、弱毒株Nsp9基因对PRRSV复制的影响被引量：1: 7; 作者赵孟孟冯丽丽 +7 位作者冯松林马红芳张二芹王文佳邢星张雅冯嘉萍张桂红《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期15-20,共6页; 为了探索猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)强、弱毒株的Nsp9基因对PRRSV复制的影响,构建含有PRRSV XH-GD强毒株、CH-1R弱毒株Nsp9全长基因的质粒p IRes2-EGFP-Nsp9-XH-GD、p IRes2-EGFP-Nsp9-CH-1R,并将重组质粒分别转染到Marc-145细胞中,... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp9基因复制病毒滴度; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白单克隆抗体制备与鉴定被引量：3: 1; 作者赵孟孟张二芹冯松林郭依嘉阮海宇王文佳邢星张桂红; 机构华南农业大学兽医学院河南农业大学牧医工程学院河南牧业经济学院制药工程学院广西钦州保税港区出入境检验检疫局; 出处《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期63-69,共7页; 基金国家自然科学基金项目(31272564) 公益性行业(农业)科研专项(201203039) 国家生猪现代农业产业技术体系项目(CARS-36); 文摘根据NSP9非结构蛋白参数选取相应30 bp DNA片段,片段串联后人工合成并连接p ET-28a(+)载体,大肠杆菌BL21中表达得到可溶蛋白,镍柱亲和层析纯化后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞骨髓瘤细胞融合。细胞融合后利用间接ELISA法杂交瘤细胞阳性克隆筛选,2次亚克隆后共获得3株抗PRRSV NSP9单克隆抗体,命名为3B17、3J13、3F19。这3株单抗可与大肠杆菌表达的蛋白产物和PRRSV感染的Marc-145细胞发生特异性反应。在PRRSV感染的Marc-145细胞中,NSP9蛋白表达水平接毒后不断升高,48 h达最高,为深入研究NSP9功能奠定基础。; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP9 单克隆抗体杂交瘤; Keywords PRRSV NSP9 monocional antibodies hybridoma; 分类号 S852.6 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪繁殖与呼吸综合征病毒FS株Nsp9基因的克隆与序列分析被引量：4: 2; 作者赵孟孟宋中宝冯松林王文佳邢星冯嘉萍张桂红; 机构华南农业大学兽医学院国家生猪种业工程技术研究中心广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室河南农业大学牧医工程学院南京农业大学动物医学院河南牧业经济学院制药工程学院广西钦州保税港区出入境检验检疫局; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2249-2256,共8页; 基金国家自然科学基金猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp9功能研究项目(31272564) 公益性行业(农业)科研专项经费(201203039) +1 种基金国家重点研发计划课题(2016YFD0500707); 文摘为了对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）Nsp9基因的功能进行预测,利用RT-PCR法从细胞毒中扩增PRRSV FS株的Nsp9基因,并将其克隆至pMD18-T载体上,测序得到Nsp9基因序列,利用多种生物信息学软件分析Nsp9序列生物学信息。结果显示,Nsp9基因全长1 929bp,目的基因的蛋白分子质量为70.5ku,pI为7.78,表明该蛋白不稳定;抗原性分析显示,Nsp9基因存在多个抗原位点,柔韧性较好,多处位点的亲水性较强,适合作为单抗制备的表位;同种亚型不同毒株的Nsp9基因氨基酸同源性为96.9%~98.9%,这表明Nsp9基因高度保守,可进一步作为检测靶蛋白用于猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的诊断与疫苗免疫;亚细胞定位预测该基因可能定位于细胞质中,而不是细胞核内;同源建模预测三级结构结果显示,三维结构呈右手型,具有3个亚结构域,没有信号肽。此外,亲本株Nsp9基因与疫苗株Nsp9基因存在多个氨基酸的突变,这些氨基酸的插入与缺失是否与病毒的聚合酶活性和毒力有关还需要进一步试验验证。; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp9基因克隆序列分析; Keywords porcine reproductive and respiratory syndrome virus Nsp9 gene clone sequence analysis; 分类号 Q785 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Nsp9基因在Marc-145细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响被引量：3: 3; 作者赵孟孟冯松林王文佳邢星冯嘉萍张桂红; 机构河南农业大学牧医工程学院华南农业大学兽医学院国家生猪种业工程技术研究中心广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室河南牧业经济学院制药工程学院广西钦州保税港区出入境检验检疫局; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期3114-3120,共7页; 基金国家自然科学基金:猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp9功能研究(31272564) 公益性行业(农业)科研专项经费(201203039) +1 种基金国家重点研发计划课题(2016YFD0500707); 文摘试验旨在验证Nsp9基因是否影响猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的复制。构建含有Nsp9全长基因的质粒pIRES2-EGFP-Nsp9,并转染到Marc-145细胞中,接毒之后分别通过实时荧光定量PCR和Western blotting方法测定PRRSV N蛋白在mRNA和蛋白水平的表达。结果显示,转染Nsp9基因的Marc-145细胞上PRRSV的N蛋白在mRNA水平上显著高于未转染Nsp9基因的对照组(P<0.05),是对照组的1.5倍,同时转染Nsp9基因后的Marc-145上PRRSV N蛋白水平也明显高于对照组。随着剂量的增加,N蛋白的表达量在mRNA和蛋白水平都有所增加。由以上结果初步可知,Nsp9基因可以在Marc-145细胞上促进PRRSV的复制,Nsp9基因与其复制密切相关。; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP 9 基因 MARC-145 细胞复制; Keywords PRRSV Nsp 9 gene Marc-145 cell replication; 分类号 Q785 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Nsp9基因实时荧光定量PCR检测方法的建立及其在感染细胞过程中表达量的变化被引量：3: 4; 作者赵孟孟冯松林王文佳邢星冯嘉萍张桂红; 机构华南农业大学兽医学院河南农业大学牧医工程学院河南牧业经济学院制药工程学院广西钦州保税港区出入境检验检疫局; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第10期2534-2540,共7页; 基金国家自然科学基金猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp9功能研究项目(31272564) 公益性行业(农业)科研专项经费(201203039) +1 种基金国家重点研发计划课题(2016YFD0500707); 文摘试验旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）Nsp9基因的实时荧光定量PCR检测方法,并探究其在感染细胞过程中表达量的变化。根据PPRSV Nsp9基因序列设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的实时荧光定量PCR。结果显示,PRRSV Nsp9基因在1×104~1×108拷贝/μL范围内有很好的线性关系,扩增产物的熔解曲线只有1个单特异峰,无引物二聚体。该方法与猪戊肝病毒（HEV）、猪流感病毒（SIV）、伪狂犬病病毒（PRV）基因组均无交叉反应,可重复性好,组内变异系数小,可用于临床PRRSV检测。在病毒感染细胞过程中,Nsp9基因表达量逐步升高,36h达到最高。本研究为探究病毒复制规律与临床疫苗生产奠定了理论基础。; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR Nsp9基因; Keywords PRRSV SYBR Green I quantitative Real-time PCR Nsp9 gene; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白的亚细胞定位与功能预测被引量：2: 5; 作者赵孟孟冯丽丽张二芹马红芳冯松林崔甜甜杨春辉王文佳邢星张雅冯嘉萍张桂红; 机构河南农业大学牧医工程学院华南农业大学兽医学院/国家生猪种业工程技术研究中心/广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室河南省农业科学院农业经济与信息研究所河南省舞阳县畜牧局河南牧业经济学院制药工程学院广西钦州保税港区出入境检验检疫局; 出处《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2016年第12期138-142,共5页; 基金国家自然科学基金项目(31272564) 公益性行业(农业)科研专项(201203039) +1 种基金国家重点研发计划课题(2016YFD0500707); 文摘为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白9(NSP9)的亚细胞定位,并探索NSP9蛋白在PRRSV复制过程中的定位变化,首先预测NSP9蛋白的生物信息学功能,之后将含有NSP9基因的质粒转染Marc-145细胞,并接种PRRSV,通过间接免疫荧光方法检测NSP9蛋白的表达与定位情况。功能预测结果表明,NSP9蛋白内部存在双向核定位序列、酰胺化位点、N-糖基化位点、酪蛋白激酶磷酸化位点、N-豆蔻酰化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、细胞结合位点、酪氨酸激酶磷酸化位点、伸展蛋白重复区域、RNA聚合酶结合区域。间接免疫荧光检测结果显示,PRRSV感染之初,NSP9蛋白定位在Marc-145细胞质中,围绕在细胞核附近,随PRRSV感染时间延长,其逐步往细胞核内转移,转移的面积也逐步增多。可见,PRRSV感染会引起NSP9蛋白向核内转移。; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP9蛋白真核表达亚细胞定位; Keywords PRRSV NSP9 protein eukaryotic expression subcellular localization; 分类号 S855.3 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪繁殖与呼吸综合征病毒强、弱毒株Nsp9基因的反向遗传学替换改造被引量：2: 6; 作者赵孟孟钱娟娟崔甜甜冯松林王文佳邢星冯嘉萍张桂红; 机构河南农业大学牧医工程学院华南农业大学兽医学院中国科学院动物研究所膜生物学国家重点实验室河南牧业经济学院制药工程学院广西钦州保税港区出入境检验检疫局; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第11期2852-2858,共7页; 基金国家自然科学基金:猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp9功能研究项目(31272564) 公益性行业(农业)科研专项经费(201203039) +1 种基金国家重点研发计划课题(2016YFD0500707); 文摘猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)Nsp9基因编码RNA依赖的RNA聚合酶,在病毒复制中发挥重要作用。为了探索Nsp9基因与病毒的毒力、复制能力及细胞嗜性的相关性,本研究利用反向遗传学技术将PRRSV弱毒疫苗毒CH-1R的Nsp9基因进行克隆,酶切后连接到强毒株XH-GD的感染性克隆上,进行病毒的拯救。结果表明,成功构建替换了CH-1RNsp9基因的重组病毒。对重组病毒的生物学特性研究发现,拯救病毒的生长速度和病毒滴度明显高于亲本毒株rXH-GD,但是低于疫苗毒CH-1R,重组毒株的噬斑大小与CH-1R相似,初步推测疫苗株CH-1R的聚合酶有助于提高病毒的滴度。本试验为进一步研究Nsp9基因对病毒毒力的影响奠定基础。; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp9基因反向遗传学病毒拯救; Keywords PRRSV Nsp9gene reverse genetics virus salvation; 分类号 Q785 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名PRRSV强、弱毒株Nsp9基因对PRRSV复制的影响被引量：1: 7; 作者赵孟孟冯丽丽冯松林马红芳张二芹王文佳邢星张雅冯嘉萍张桂红; 机构华南农业大学兽医学院河南农业大学牧医工程学院河南省农业科学院农业经济与信息研究所河南牧业经济学院制药工程学院广西钦州保税港区出入境检验检疫局; 出处《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期15-20,共6页; 基金国家自然科学基金项目(31272564) 公益性行业(农业)科研专项(201203039) 国家生猪现代农业产业技术体系项目(CARS-36); 文摘为了探索猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)强、弱毒株的Nsp9基因对PRRSV复制的影响,构建含有PRRSV XH-GD强毒株、CH-1R弱毒株Nsp9全长基因的质粒p IRes2-EGFP-Nsp9-XH-GD、p IRes2-EGFP-Nsp9-CH-1R,并将重组质粒分别转染到Marc-145细胞中,以MOI=1的剂量接种PRRSV XH-GD毒株,通过TCID50试验测定病毒的滴度,采用荧光定量PCR和Western Blot方法来测定病毒的N蛋白表达情况。结果表明,转染弱毒株CH-1R Nsp9基因的Marc-145细胞中,PRRSV的N蛋白在mRNA水平、蛋白质水平上的表达量均高于转染强毒株XH-GD组,且病毒的滴度也显著高于转染强毒株XH-GD组。综上,在Marc-145细胞中,弱毒株CH-1R Nsp9基因对PRRSV复制的促进作用优于强毒株XH-GD。; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp9基因复制病毒滴度; Keywords PRRSV Nsp9 Replication Viraltiter; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白单克隆抗体制备与鉴定	赵孟孟张二芹冯松林郭依嘉阮海宇王文佳邢星张桂红	《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2016	3	在线阅读下载PDF 职称材料
2	猪繁殖与呼吸综合征病毒FS株Nsp9基因的克隆与序列分析	赵孟孟宋中宝冯松林王文佳邢星冯嘉萍张桂红	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2016	4	在线阅读下载PDF 职称材料
3	Nsp9基因在Marc-145细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响	赵孟孟冯松林王文佳邢星冯嘉萍张桂红	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2016	3	在线阅读下载PDF 职称材料
4	Nsp9基因实时荧光定量PCR检测方法的建立及其在感染细胞过程中表达量的变化	赵孟孟冯松林王文佳邢星冯嘉萍张桂红	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2016	3	在线阅读下载PDF 职称材料
5	猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白的亚细胞定位与功能预测	赵孟孟冯丽丽张二芹马红芳冯松林崔甜甜杨春辉王文佳邢星张雅冯嘉萍张桂红	《河南农业科学》 CSCD 北大核心	2016	2	在线阅读下载PDF 职称材料
6	猪繁殖与呼吸综合征病毒强、弱毒株Nsp9基因的反向遗传学替换改造	赵孟孟钱娟娟崔甜甜冯松林王文佳邢星冯嘉萍张桂红	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2016	2	在线阅读下载PDF 职称材料
7	PRRSV强、弱毒株Nsp9基因对PRRSV复制的影响	赵孟孟冯丽丽冯松林马红芳张二芹王文佳邢星张雅冯嘉萍张桂红	《华北农学报》 CSCD 北大核心	2017	1	在线阅读下载PDF 职称材料