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一株产纤维素酶蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及酶学性质初步研究 被引量:10
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作者 禤金彩 廖龙 +1 位作者 龙寒 何秀苗 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期984-988,共5页
【目的】筛选高效分泌纤维素酶的细菌,为纤维素资源利用提供理论依据。【方法】以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为唯一碳源,对通过筛选培养基从森林湿泥样品中分离筛选出的细菌,采用刚果红染色、革兰氏染色和生化特性及16SrDNA进行鉴定,并对... 【目的】筛选高效分泌纤维素酶的细菌,为纤维素资源利用提供理论依据。【方法】以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为唯一碳源,对通过筛选培养基从森林湿泥样品中分离筛选出的细菌,采用刚果红染色、革兰氏染色和生化特性及16SrDNA进行鉴定,并对菌株产酶性质进行初步研究。【结果】获得一株纤维素酶产生菌L-30,该菌株在pH4.8、50℃条件下的酶活力为4.25 U/mL,经鉴定L-30为蜡样芽孢杆菌。酶学性质研究表明,L-30菌株所产纤维素酶最适反应pH为6.0,最适温度为50℃,该条件下酶活力最高,达4.95 U/mL,该酶对CMC-Na具有较强的分解能力;L-30菌株在最佳生长条件下,于接种后48 h即可达到产酶高峰,L-30菌株的产纤维素酶能力能稳定遗传。【结论】分离到的L-30为一株高产纤维素酶蜡样芽孢杆菌,其酶学性质好,具有进一步开发利用的价值。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌 纤维素酶 分离 鉴定 酶学性质
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鸡传染性法氏囊病病毒流行株VP1部分序列及VP2高变区序列分析 被引量:7
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作者 熊忠贤 何秀苗 +3 位作者 杨霖 戴书剑 韦平 刘红全 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期419-422,共4页
为了对鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的13个地方分离株与3个商品疫苗株的VP1-b基因(756 bp~1 522 bp)进行同源性和遗传进化分析,本研究对其进行RT-PCR扩增和序列测定。结果表明,获得的VP1-b基因长度均为767 bp;13个分离株VP1-b节段核苷... 为了对鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的13个地方分离株与3个商品疫苗株的VP1-b基因(756 bp~1 522 bp)进行同源性和遗传进化分析,本研究对其进行RT-PCR扩增和序列测定。结果表明,获得的VP1-b基因长度均为767 bp;13个分离株VP1-b节段核苷酸和氨基酸同源性分别为90.7%~100%和72.9%~100%,其中10株超强毒分离株与经典株、弱毒株、疫苗株的同源性较高,核苷酸和氨基酸同源性分别为95.7%~100%和94.5%~100%,所有12个超强毒分离株与超强毒参考病毒株的同源性均较低,核苷酸同源性仅为68.2%~79.2%;在遗传进化分析中,所有病毒株被分为3个分支,与相应病毒株的基于IBDV-VP2高变区(vVP2)序列的遗传进化树比较并结合同源性分析结果表明,除了弱毒株HUN0804之外,其它12个分离株可能均为重组病毒。据此推测,基因重组可能是目前IBDV流行的新趋势。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 VP1 序列分析 遗传进化分析
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IBDV荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其应用 被引量:9
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作者 何秀苗 甘珊珊 +3 位作者 熊忠贤 禤金彩 廖艳娟 韦平 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期798-802,共5页
研究根据传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因序列设计了两条引物,通过RT-PCR技术对IBDV的VP2进行扩增,构建IBDV-VP2的标准品质粒,建立基于IBDV-VP2基因的荧光定量RT-PCR检测(QRT-PCR)技术和标准曲线,并检测该QRT-PCR体系的特异性、灵敏度... 研究根据传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因序列设计了两条引物,通过RT-PCR技术对IBDV的VP2进行扩增,构建IBDV-VP2的标准品质粒,建立基于IBDV-VP2基因的荧光定量RT-PCR检测(QRT-PCR)技术和标准曲线,并检测该QRT-PCR体系的特异性、灵敏度和重复性,最后将该QRT-PCR体系应用于鸡外周血淋巴细胞(PBLs)中IBDV超强毒株(vvIBDV)复制规律以及临床样品的检测。结果表明,建立的QRT-PCR体系特异性好,不能与NDV、IBV及FAV1等发生反应,敏感度为1.51×101拷贝数/μl,扩增效率达1.018,重复性试验组内变异系数和组间变异系数均小于0.5%;在vvIBDV感染后6 h收获的细胞含病毒基因组拷贝数最高,对IBD疑似病例的检测敏感度高于套式RT-PCR技术。表明建立的反应体系特异、灵敏度高,并具有很好的稳定性,可应用于病毒复制水平的检测和临床样品的检测。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病 荧光定量RT-PCR 鸡外周血淋巴细胞
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传染性法氏囊病病毒的分离及其VP2高变区序列的比较 被引量:2
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作者 张华智 杨霖 +2 位作者 熊忠贤 何秀苗 韦平 《安徽农业科学》 CAS 2013年第5期1961-1963,共3页
[目的]从病鸡中分离传染性法氏囊病病毒(IBDV),并对其VP2基因高变区序列进行比较。[方法]采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)接种SPF鸡胚的方法分离到2株IBDV。对分离株(vVP2)进行扩增和序列测定,分析分离株的关键氨基酸位点特征,并与参考毒株相... [目的]从病鸡中分离传染性法氏囊病病毒(IBDV),并对其VP2基因高变区序列进行比较。[方法]采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)接种SPF鸡胚的方法分离到2株IBDV。对分离株(vVP2)进行扩增和序列测定,分析分离株的关键氨基酸位点特征,并与参考毒株相应序列进行同源性比较。[结果]2株分离株特征性位点的氨基酸为222A、249Q、254G、256I、279D、284A、294I和299S,属于wIB-DV的特征,与wIBDV参考株具有较高的同源性,其核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~97.0%和98.7%~99.4%。从遗传进化树来看,2个分离株与参考的vvIBDV也在一个分支。此外,2个分离株表现出与该鸡场常用的疫苗株MB有较高的同源性,其核苷酸和氨基酸同源性分别为96.8%和98.1%,并在遗传进化树中同属于一个大分支,但其特征性位点的氨基酸明显不同。在其他氨基酸位点上,2个分离株均发生了D212N的特有变化。[结论]该鸡群感染的IBDV具有vvIBDV的分子特征,并发生了与疫苗株和参考株不同的分子变化。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 超强毒株 vVP2 分子特征 RT-PCR
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