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毛兰素通过下调CyclinB1蛋白表达抑制活化T细胞增殖
1
作者
敬林
张婷
+2 位作者
罗兴燕
刘阳
赖翼
《陆军军医大学学报》
北大核心
2025年第19期2365-2373,共9页
目的毛兰素抑制活化T细胞增殖及其作用机制探究。方法利用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),采用人T细胞MACS磁珠阴性分选试剂盒纯化T细胞,抗人CD3/CD28抗体刺激活化T细胞。采用羧基荧光...
目的毛兰素抑制活化T细胞增殖及其作用机制探究。方法利用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),采用人T细胞MACS磁珠阴性分选试剂盒纯化T细胞,抗人CD3/CD28抗体刺激活化T细胞。采用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein succinimidyl ester,CFSE)标记活化T细胞,通过流式细胞术检测毛兰素对活化T细胞增殖、凋亡、活化标志物CD25表达、细胞周期分布以及静息T细胞存活率的影响。采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)定量分析毛兰素处理后的活化T细胞培养上清中IL-2和IL-17的分泌水平。Western blot分析毛兰素对细胞分裂周期蛋白2(cell division cycle protein 2,CDC2)、P-CDC2、以及CyclinB1蛋白表达的影响。观察并分析毛兰素处理组(0.05~0.20μmol/L)与阳性对照组(纯化后仅用抗人CD3/CD28抗体刺激的T细胞)的显著性差异结果。结果CFSE增殖结果表明毛兰素处理组(0.05~0.20μmol/L)的活化T细胞增殖率呈浓度依赖性下降(P<0.0001),其半数抑制浓度(IC_(50))为(0.09±0.10)μmol/L。细胞凋亡和细胞存活率结果表明活化T细胞和静息T细胞经毛兰素处理后,毛兰素处理组与阳性对照组的凋亡率和存活率无显著差异。通过对活化T细胞标志物分析发现,毛兰素不影响CD25的表达和IL-2的分泌。ELISA检测显示毛兰素显著抑制IL-17炎性因子的分泌(P<0.0001)。细胞周期实验表明毛兰素阻滞活化T细胞周期于G2/M期(P<0.05),进一步机制研究发现,毛兰素不影响P-CDC2、CDC2的表达,但显著抑制CyclinB1蛋白的表达(P<0.01)。结论毛兰素具有显著免疫抑制活性且通过下调CyclinB1蛋白表达抑制活化T细胞增殖。
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关键词
毛兰素
免疫抑制剂
CyclinB1蛋白
活化T细胞
增殖
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职称材料
题名
毛兰素通过下调CyclinB1蛋白表达抑制活化T细胞增殖
1
作者
敬林
张婷
罗兴燕
刘阳
赖翼
机构
广西大学生物医学院
成都
医学院
科研实验中心
成都
医学院
检验
医学院
出处
《陆军军医大学学报》
北大核心
2025年第19期2365-2373,共9页
基金
四川省科技计划项目(2023NSFSC0624)。
文摘
目的毛兰素抑制活化T细胞增殖及其作用机制探究。方法利用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),采用人T细胞MACS磁珠阴性分选试剂盒纯化T细胞,抗人CD3/CD28抗体刺激活化T细胞。采用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein succinimidyl ester,CFSE)标记活化T细胞,通过流式细胞术检测毛兰素对活化T细胞增殖、凋亡、活化标志物CD25表达、细胞周期分布以及静息T细胞存活率的影响。采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)定量分析毛兰素处理后的活化T细胞培养上清中IL-2和IL-17的分泌水平。Western blot分析毛兰素对细胞分裂周期蛋白2(cell division cycle protein 2,CDC2)、P-CDC2、以及CyclinB1蛋白表达的影响。观察并分析毛兰素处理组(0.05~0.20μmol/L)与阳性对照组(纯化后仅用抗人CD3/CD28抗体刺激的T细胞)的显著性差异结果。结果CFSE增殖结果表明毛兰素处理组(0.05~0.20μmol/L)的活化T细胞增殖率呈浓度依赖性下降(P<0.0001),其半数抑制浓度(IC_(50))为(0.09±0.10)μmol/L。细胞凋亡和细胞存活率结果表明活化T细胞和静息T细胞经毛兰素处理后,毛兰素处理组与阳性对照组的凋亡率和存活率无显著差异。通过对活化T细胞标志物分析发现,毛兰素不影响CD25的表达和IL-2的分泌。ELISA检测显示毛兰素显著抑制IL-17炎性因子的分泌(P<0.0001)。细胞周期实验表明毛兰素阻滞活化T细胞周期于G2/M期(P<0.05),进一步机制研究发现,毛兰素不影响P-CDC2、CDC2的表达,但显著抑制CyclinB1蛋白的表达(P<0.01)。结论毛兰素具有显著免疫抑制活性且通过下调CyclinB1蛋白表达抑制活化T细胞增殖。
关键词
毛兰素
免疫抑制剂
CyclinB1蛋白
活化T细胞
增殖
Keywords
erianin
immunosuppressant
Cyclin B1
activated T cells
proliferation
分类号
R285.5 [医药卫生—中药学]
R331.144 [医药卫生—人体生理学]
R329.28 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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1
毛兰素通过下调CyclinB1蛋白表达抑制活化T细胞增殖
敬林
张婷
罗兴燕
刘阳
赖翼
《陆军军医大学学报》
北大核心
2025
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