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利用MALDI-TOF质谱比较水牛卵泡液多肽变化的研究 被引量：2
1
作者 付强 刘振方 +2 位作者 杨丽 张明 卢克焕 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第1期132-136,共5页
为检测卵泡内小肽的表达,采用基质辅助激光解离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)建立了成熟卵泡液的多肽表达模型,比较小卵泡(直径<4mm)、中等卵泡(直径4～8mm)和成熟卵泡(直径>8mm)的多肽表达变化。结果表明,3种形态的卵泡液... 为检测卵泡内小肽的表达,采用基质辅助激光解离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)建立了成熟卵泡液的多肽表达模型,比较小卵泡(直径<4mm)、中等卵泡(直径4～8mm)和成熟卵泡(直径>8mm)的多肽表达变化。结果表明,3种形态的卵泡液存在12个显著差异多肽,其中在成熟卵泡内上调6个,下调有5个;在中等卵泡内上调4个,下调5个。其中分子质量约为1746u的多肽在成熟卵泡中特异性表达,可作为卵泡成熟的潜在生物标志物之一。 展开更多
关键词 水牛 卵泡液 MALDI-TOF 多肽 特异性表达
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使用流式细胞仪分离精子进行仔猪性别控制的研究 被引量：12
2
作者 曾有权 陆阳清 +3 位作者 杨小淦 卢晟盛 张明 卢克焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1163-1169,共7页
本研究旨在探索流式细胞仪分离精子在猪性别控制中的应用。使用流式细胞仪分离猪XY精子,而后通过母猪输卵管授精生产"预知"性别的仔猪,并使用吖啶橙染色法检测粗分离对精子核酸含量的影响。结果,成功利用分离获得的猪X和Y精... 本研究旨在探索流式细胞仪分离精子在猪性别控制中的应用。使用流式细胞仪分离猪XY精子,而后通过母猪输卵管授精生产"预知"性别的仔猪,并使用吖啶橙染色法检测粗分离对精子核酸含量的影响。结果,成功利用分离获得的猪X和Y精子对母猪进行输卵管授精,母猪怀孕率、产仔率均为100%;输Y精子母猪产仔雄性率100%(♂6/6),对照母猪产仔雄性率57.14%(♂8/14);3头输X精子母猪产母仔率91.67%(♀11/12),对照母猪产雌性仔猪40%(♀2/5);使用性别分离精子不影响母猪的怀孕率、产仔率,但窝产仔数较低;吖啶橙染色法检测结果表明,流式细胞仪粗分离对猪精子核酸含量没有显著影响(P>0.05)。本研究结果提示,使用流式细胞仪分离精子授精可以有效改变仔猪的性别比例。本研究结果为猪分离精子性别控制技术的推广应用奠定了基础。 展开更多
关键词 流式细胞仪 分离精子 性别控制 仔猪 核酸
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猪卵母细胞化学辅助手工去核及手工核移植胚胎发育能力因素的研究 被引量：6
3
作者 任子利 赵彦玲 +3 位作者 杨小淦 陆阳清 卢晟盛 卢克焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期921-931,共11页
本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较... 本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较了化学辅助手工去核法和荧光染色去核法、不同类型的供体细胞(颗粒细胞、新生巴马肌肉成纤维细胞和胎儿成纤维细胞)和供体细胞的不同处理方法(70%～80%汇合、血清饥饿法和100%接触抑制法)对重构胚发育能力的影响。结果表明:(1)利用DC诱导去核,对体外成熟培养44h的卵母细胞以浓度0.4μg.mL-1作用0.5～1h为宜。(2)用DC化学辅助手工去核与用荧光染色去核的重构胚囊胚发育率差异不显著(13.11%vs 9.25%,P>0.05)。(3)以胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞为供体构建的重构胚的融合率、卵裂率及囊胚率均差异不显著(P>0.05)。(4)用70%～80%汇合(对照组)组、接触抑制组和血清饥饿组的细胞作供体构建的重构胚,在融合率上,接触抑制组显著高于对照组(P<0.05);在分裂率与囊胚率上,各组之间均无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,化学辅助手工去核法在实际生产中可以替代荧光染色去核法,能省去去核过程中荧光染色及紫外光照射去核等步骤,从而简化了猪手工体细胞核移植程序,提高了猪手工体细胞核移植效率,能为高效的猪手工体细胞核移植技术体系的建立提供参考。 展开更多
关键词 猪 化学辅助去核 脱羰秋水酰碱 手工体细胞核移植
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利用TMT标记结合2D LC-MS/MS技术分析不同时期水牛睾丸曲精细管差异蛋白质组 被引量：3
4
作者 黄愉淋 付强 +4 位作者 黄德伦 潘宏 黄凤玲 梁贤威 张明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1265-1273,共9页
旨在采用TMT标记结合二维高效液相色谱/串联质谱联用的技术对不同时期水牛睾丸曲精细管的差异蛋白质组进行分析。分别提取不同时期(幼年期、老年期)水牛睾丸曲精细管总蛋白,TMT试剂标记后进行强阳离子交换柱分离多肽、nano LC分离,同时... 旨在采用TMT标记结合二维高效液相色谱/串联质谱联用的技术对不同时期水牛睾丸曲精细管的差异蛋白质组进行分析。分别提取不同时期(幼年期、老年期)水牛睾丸曲精细管总蛋白,TMT试剂标记后进行强阳离子交换柱分离多肽、nano LC分离,同时在线连接电喷雾串联(rbitrap质谱进行分析,通过SEQUEST软件搜库并对鉴定的差异蛋白数据进行生物信息学分析。结果表明:共筛选出定量差异倍数≥2倍的差异蛋白89个,以幼年期水牛睾丸曲精细管作为对照,上调蛋白质51个,下调蛋白质38个。生物信息学分析表明,TMT标记技术结合二维液相色谱串联质谱可以对不同发育时期水牛睾丸曲精细管蛋白进行有效地分离和鉴定。本研究结果为探索精子发生过程中蛋白质表达的变化规律提供了试验依据,找出可能与精子发生相关的标志性蛋白:谷胱甘肽S转移酶P(GSTP1)、过氧化氢酶(CAT)、热休克蛋白(HSP90AA1和HSPA)。 展开更多
关键词 水牛睾丸曲精细管 蛋白质组 TMT标记 Orbitrap质谱
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利用双向电泳构建并优化超数排卵犊牛卵泡液蛋白质图谱 被引量：1
5
作者 赵海峰 张飒 +5 位作者 陈集成 柯浩 陈东峰 陈宝剑 陆凤花 韦英明 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第14期123-125,共3页
以2～5月龄超数排卵犊牛卵泡液为研究对象,比较不同pH值的IPG胶条和4种上样量(150、250、350、450μg)对卵泡液蛋白图谱构建的影响。结果表明,在pH 4～7的IPG胶条、上样量为350μg时,获得较好质量的卵泡液蛋白图谱,并获得约319个蛋白点... 以2～5月龄超数排卵犊牛卵泡液为研究对象,比较不同pH值的IPG胶条和4种上样量(150、250、350、450μg)对卵泡液蛋白图谱构建的影响。结果表明,在pH 4～7的IPG胶条、上样量为350μg时,获得较好质量的卵泡液蛋白图谱,并获得约319个蛋白点。成功构建的卵泡液蛋白双向电泳技术,为进一步研究犊牛与成年牛卵泡液中差异蛋白质组学分析奠定基础。 展开更多
关键词 双向电泳 蛋白质组学 犊牛 卵泡液
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去除高丰度蛋白质后水牛卵泡液的双向电泳差异分析 被引量：4
6
作者 黄愉淋 付强 +5 位作者 黄德伦 陈富美 黄凤玲 梁贤威 张明 卢克焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1113-1119,共7页
以广西沼泽型水牛卵泡液为研究对象,用试剂盒免疫去除成熟及未成熟水牛卵泡液高丰度蛋白质后,采用已建立并优化的双向电泳体系对卵泡液蛋白质样品进行分离。软件分析发现,21个差异表达蛋白质与成熟卵泡液相比,10个蛋白质点表达上调,7个... 以广西沼泽型水牛卵泡液为研究对象,用试剂盒免疫去除成熟及未成熟水牛卵泡液高丰度蛋白质后,采用已建立并优化的双向电泳体系对卵泡液蛋白质样品进行分离。软件分析发现,21个差异表达蛋白质与成熟卵泡液相比,10个蛋白质点表达上调,7个蛋白质点表达下调,3个蛋白质点缺失,1个蛋白质点在水牛未成熟卵泡液中特异性表达。经质谱分析,最终鉴定出3个蛋白质点:硫酸化糖蛋白、转铁蛋白和触珠蛋白。该研究成功分离并鉴定的水牛卵泡液差异蛋白质,为揭示水牛卵母细胞发育的微环境及其成熟机制提供试验依据。其中转铁蛋白对于水牛卵泡液的发育成熟具有十分重要的促进作用,而其它2个蛋白质对水牛卵泡液的成熟相关机制还尚未清楚,有待于进一步的试验研究。 展开更多
关键词 水牛卵泡液 高丰度蛋白质去除 差异蛋白质组 双向电泳 质谱鉴定
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水牛卵泡液液相色谱分离及差异蛋白质分析 被引量：1
7
作者 付强 杨丽 +2 位作者 刘振方 张明 卢克焕 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期64-67,共4页
本研究采用液相色谱-质谱分离鉴定技术,比较不同直径卵泡液(直径<2mm、直径2～4mm、直径>4mm)的蛋白质组分差异,收集显著差异的馏分,还原烷基化处理后酶解成肽段,再经反相色谱二次分离后质谱鉴定。结果表明,在优势卵泡中(直径>... 本研究采用液相色谱-质谱分离鉴定技术,比较不同直径卵泡液(直径<2mm、直径2～4mm、直径>4mm)的蛋白质组分差异,收集显著差异的馏分,还原烷基化处理后酶解成肽段,再经反相色谱二次分离后质谱鉴定。结果表明,在优势卵泡中(直径>4mm)存在显著高表达的蛋白质峰,质谱鉴定结果为转铁蛋白(transferrin,TRF)。转铁蛋白的功能和表达的变化提示,该蛋白质的高表达可作为潜在排卵的标志物之一。同时,本研究采用的LC-MS技术将为卵泡液大规模蛋白质组分离和表达谱构建提供参考。 展开更多
关键词 水牛 卵泡液 蛋白质 液相色谱分离 转铁蛋白
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水牛附睾不同部位精子超微结构及荧光标记差异分析 被引量：1
8
作者 何翁潭 张鹏飞 +4 位作者 黄愉淋 肖凯 黄良凤 陆阳清 张明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期3449-3460,共12页
哺乳动物精子经过附睾成熟后才能获得运动及受精的能力,为解释水牛精子在附睾中的成熟过程,本研究选用性成熟期的沼泽型水牛附睾,利用乙烯吡咯烷酮包裹的硅胶微小颗粒(Percoll)梯度离心纯化分别提取附睾头、体和尾部精子,应用计算机辅... 哺乳动物精子经过附睾成熟后才能获得运动及受精的能力,为解释水牛精子在附睾中的成熟过程,本研究选用性成熟期的沼泽型水牛附睾,利用乙烯吡咯烷酮包裹的硅胶微小颗粒(Percoll)梯度离心纯化分别提取附睾头、体和尾部精子,应用计算机辅助精子分析系统(CASA)检测精子活力,透射电镜观察附睾不同部位精子的超微结构,对精子进行荧光标记后,利用流式细胞仪和荧光显微镜观察检测不同部位精子质膜完整率、线粒体鞘膜电位和顶体差异。结果表明,Percoll分离得到附睾头、体和尾3部位精子的纯度达95%,不同部位精子活力分别为8.35%、20.21%和65.60%;附睾不同部位精子都存在着结构完整的精子以及相同的畸形类型,附睾尾部精子线粒体鞘高膜电位比率最高,精子质膜完整率从附睾头部到尾部逐渐升高,精子顶体完整率从附睾头部到尾部逐渐升高。本研究直观地展示了水牛附睾不同部位精子特征以及差异,为研究水牛精子成熟机理提供理论依据。 展开更多
关键词 附睾 精子 超微结构观察 荧光分子探针 顶体
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