利用MALDI-TOF质谱比较水牛卵泡液多肽变化的研究 被引量：2

1

作者 付强 刘振方 +2 位作者 杨丽 张明 卢克焕 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第1期132-136,共5页

为检测卵泡内小肽的表达,采用基质辅助激光解离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)建立了成熟卵泡液的多肽表达模型,比较小卵泡(直径<4mm)、中等卵泡(直径4～8mm)和成熟卵泡(直径>8mm)的多肽表达变化。结果表明,3种形态的卵泡液... 为检测卵泡内小肽的表达,采用基质辅助激光解离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)建立了成熟卵泡液的多肽表达模型,比较小卵泡(直径<4mm)、中等卵泡(直径4～8mm)和成熟卵泡(直径>8mm)的多肽表达变化。结果表明,3种形态的卵泡液存在12个显著差异多肽,其中在成熟卵泡内上调6个,下调有5个;在中等卵泡内上调4个,下调5个。其中分子质量约为1746u的多肽在成熟卵泡中特异性表达,可作为卵泡成熟的潜在生物标志物之一。 展开更多

关键词 水牛 卵泡液 MALDI-TOF 多肽 特异性表达

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使用流式细胞仪分离精子进行仔猪性别控制的研究 被引量：13

2

作者 曾有权 陆阳清 +3 位作者 杨小淦 卢晟盛 张明 卢克焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1163-1169,共7页

本研究旨在探索流式细胞仪分离精子在猪性别控制中的应用。使用流式细胞仪分离猪XY精子,而后通过母猪输卵管授精生产"预知"性别的仔猪,并使用吖啶橙染色法检测粗分离对精子核酸含量的影响。结果,成功利用分离获得的猪X和Y精... 本研究旨在探索流式细胞仪分离精子在猪性别控制中的应用。使用流式细胞仪分离猪XY精子,而后通过母猪输卵管授精生产"预知"性别的仔猪,并使用吖啶橙染色法检测粗分离对精子核酸含量的影响。结果,成功利用分离获得的猪X和Y精子对母猪进行输卵管授精,母猪怀孕率、产仔率均为100%;输Y精子母猪产仔雄性率100%(♂6/6),对照母猪产仔雄性率57.14%(♂8/14);3头输X精子母猪产母仔率91.67%(♀11/12),对照母猪产雌性仔猪40%(♀2/5);使用性别分离精子不影响母猪的怀孕率、产仔率,但窝产仔数较低;吖啶橙染色法检测结果表明,流式细胞仪粗分离对猪精子核酸含量没有显著影响(P>0.05)。本研究结果提示,使用流式细胞仪分离精子授精可以有效改变仔猪的性别比例。本研究结果为猪分离精子性别控制技术的推广应用奠定了基础。 展开更多

关键词 流式细胞仪 分离精子 性别控制 仔猪 核酸

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猪卵母细胞化学辅助手工去核及手工核移植胚胎发育能力因素的研究 被引量：6

3

作者 任子利 赵彦玲 +3 位作者 杨小淦 陆阳清 卢晟盛 卢克焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期921-931,共11页

本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较... 本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系。观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较了化学辅助手工去核法和荧光染色去核法、不同类型的供体细胞(颗粒细胞、新生巴马肌肉成纤维细胞和胎儿成纤维细胞)和供体细胞的不同处理方法(70%～80%汇合、血清饥饿法和100%接触抑制法)对重构胚发育能力的影响。结果表明:(1)利用DC诱导去核,对体外成熟培养44h的卵母细胞以浓度0.4μg.mL-1作用0.5～1h为宜。(2)用DC化学辅助手工去核与用荧光染色去核的重构胚囊胚发育率差异不显著(13.11%vs 9.25%,P>0.05)。(3)以胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞为供体构建的重构胚的融合率、卵裂率及囊胚率均差异不显著(P>0.05)。(4)用70%～80%汇合(对照组)组、接触抑制组和血清饥饿组的细胞作供体构建的重构胚,在融合率上,接触抑制组显著高于对照组(P<0.05);在分裂率与囊胚率上,各组之间均无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,化学辅助手工去核法在实际生产中可以替代荧光染色去核法,能省去去核过程中荧光染色及紫外光照射去核等步骤,从而简化了猪手工体细胞核移植程序,提高了猪手工体细胞核移植效率,能为高效的猪手工体细胞核移植技术体系的建立提供参考。 展开更多

关键词 猪 化学辅助去核 脱羰秋水酰碱 手工体细胞核移植

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两个地理群体香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)杂交子代早期生长发育的杂种优势研究 被引量：5

4

作者 官俊良 张跃环 +4 位作者 苏家齐 肖述 张明 李琼珍 喻子牛 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期182-187,共6页

为探讨不同地理群体香港牡蛎的杂种优势,于2014年5月开展了广东珠海(Z,生长快)和广西茅尾海(M,抗逆性强)群体间的2×2双列杂交,比较了各实验组早期生长、存活优势,并计算了各阶段的杂种优势,实验由2个杂交组MZ(M♀×Z♂)、ZM(Z... 为探讨不同地理群体香港牡蛎的杂种优势,于2014年5月开展了广东珠海(Z,生长快)和广西茅尾海(M,抗逆性强)群体间的2×2双列杂交,比较了各实验组早期生长、存活优势,并计算了各阶段的杂种优势,实验由2个杂交组MZ(M♀×Z♂)、ZM(Z♀×M♂)和2个自交组MM(M♀×M♂)、ZZ(Z♀×Z♂)组成。结果表明:浮游期间,正交组(MZ)幼虫在9日龄前未表现出生长优势,但表现出一定的存活优势,幼虫大小存在显著的母本效应;12日龄时正交杂种优势5.34。反交组(ZM)幼虫生长和存活都表现出了正杂种优势,但生长优势值逐渐减小,到了12日龄时壳高与自繁组(ZZ)幼虫间差异不显著(P>0.05)。室内苗种培育阶段,杂交稚贝表现出明显的生长、存活优势,正交组(MZ)和反交组(ZM)子代的生长优势分别为7.86±3.12、17.47±13.14;存活优势分别为8.33±1.41、2.86±1.08。以上结果说明两个群体香港牡蛎杂交可以产生杂种优势,可为牡蛎杂种优势开发利用提供参考。 展开更多

关键词 香港牡蛎 双列杂交 表型性状 杂种优势

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利用TMT标记结合2D LC-MS/MS技术分析不同时期水牛睾丸曲精细管差异蛋白质组 被引量：3

5

作者 黄愉淋 付强 +4 位作者 黄德伦 潘宏 黄凤玲 梁贤威 张明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1265-1273,共9页

旨在采用TMT标记结合二维高效液相色谱/串联质谱联用的技术对不同时期水牛睾丸曲精细管的差异蛋白质组进行分析。分别提取不同时期(幼年期、老年期)水牛睾丸曲精细管总蛋白,TMT试剂标记后进行强阳离子交换柱分离多肽、nano LC分离,同时... 旨在采用TMT标记结合二维高效液相色谱/串联质谱联用的技术对不同时期水牛睾丸曲精细管的差异蛋白质组进行分析。分别提取不同时期(幼年期、老年期)水牛睾丸曲精细管总蛋白,TMT试剂标记后进行强阳离子交换柱分离多肽、nano LC分离,同时在线连接电喷雾串联(rbitrap质谱进行分析,通过SEQUEST软件搜库并对鉴定的差异蛋白数据进行生物信息学分析。结果表明:共筛选出定量差异倍数≥2倍的差异蛋白89个,以幼年期水牛睾丸曲精细管作为对照,上调蛋白质51个,下调蛋白质38个。生物信息学分析表明,TMT标记技术结合二维液相色谱串联质谱可以对不同发育时期水牛睾丸曲精细管蛋白进行有效地分离和鉴定。本研究结果为探索精子发生过程中蛋白质表达的变化规律提供了试验依据,找出可能与精子发生相关的标志性蛋白:谷胱甘肽S转移酶P(GSTP1)、过氧化氢酶(CAT)、热休克蛋白(HSP90AA1和HSPA)。 展开更多

关键词 水牛睾丸曲精细管 蛋白质组 TMT标记 Orbitrap质谱

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调控miR-99a表达对猪颗粒细胞增殖和凋亡的影响

6

作者 陈圆 侯晗琦 +3 位作者 任宣 薛青松 徐泰然 李湘萍 《西南大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第6期57-67,共11页

miR-99a是一种在卵巢组织中表达较高的miRNA,与颗粒细胞在卵泡闭锁过程中的凋亡有关。为了解miR-99a对猪颗粒细胞增殖和凋亡的作用,首先检测了miR-99a在不同程度闭锁的猪卵泡中的表达水平,随后通过正负调控miR-99a表达的方法探究其对猪... miR-99a是一种在卵巢组织中表达较高的miRNA,与颗粒细胞在卵泡闭锁过程中的凋亡有关。为了解miR-99a对猪颗粒细胞增殖和凋亡的作用,首先检测了miR-99a在不同程度闭锁的猪卵泡中的表达水平,随后通过正负调控miR-99a表达的方法探究其对猪颗粒细胞增殖和凋亡的影响。结果显示,与健康卵泡(HF)组相比,miR-99a的表达在早期闭锁卵泡(EF)组中显著升高(p<0.01),在晚期闭锁卵泡(PF)组无显著变化(p>0.05)。相较于对照组,miR-99a过表达组的细胞增殖水平下降,细胞凋亡水平上升,细胞周期在S期停滞,细胞周期相关基因CDK1与CDK4及促凋亡基因BAD的表达显著增加(p>0.05)。自噬相关基因ATG13的表达也显著上调(p<0.05),但凋亡相关基因BCL-2与TP53的表达变化差异并不显著(p>0.05)。与对照组相比,抑制miR-99a表达对细胞周期和凋亡无显著影响,CDK1、CDK4、BAD、ATG13、BCL-2、TP53的表达无显著变化(p>0.05)。以上结果表明,miR-99a能够有效抑制猪颗粒细胞的增殖并促进其凋亡。 展开更多

关键词 miR-99a 颗粒细胞 闭锁卵泡 增殖 凋亡

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利用双向电泳构建并优化超数排卵犊牛卵泡液蛋白质图谱 被引量：1

7

作者 赵海峰 张飒 +5 位作者 陈集成 柯浩 陈东峰 陈宝剑 陆凤花 韦英明 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第14期123-125,共3页

以2～5月龄超数排卵犊牛卵泡液为研究对象,比较不同pH值的IPG胶条和4种上样量(150、250、350、450μg)对卵泡液蛋白图谱构建的影响。结果表明,在pH 4～7的IPG胶条、上样量为350μg时,获得较好质量的卵泡液蛋白图谱,并获得约319个蛋白点... 以2～5月龄超数排卵犊牛卵泡液为研究对象,比较不同pH值的IPG胶条和4种上样量(150、250、350、450μg)对卵泡液蛋白图谱构建的影响。结果表明,在pH 4～7的IPG胶条、上样量为350μg时,获得较好质量的卵泡液蛋白图谱,并获得约319个蛋白点。成功构建的卵泡液蛋白双向电泳技术,为进一步研究犊牛与成年牛卵泡液中差异蛋白质组学分析奠定基础。 展开更多

关键词 双向电泳 蛋白质组学 犊牛 卵泡液

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牛卵母细胞及着床前胚胎发育的蛋白质组学研究进展

8

作者 濮黎萍 陈富美 +5 位作者 赵秀玲 王焕景 候振 徐壮壮 张鹏飞 张明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期54-59,共6页

蛋白质组学作为一种能够全景式展示特定生物学过程的蛋白质表达谱的高通量研究手段,正被应用到越来越多的研究领域。牛的卵子发生以及着床前胚胎的生长发育都离不开蛋白质的一系列变化,通过蛋白质组学的研究手段可对牛卵母细胞成熟以及... 蛋白质组学作为一种能够全景式展示特定生物学过程的蛋白质表达谱的高通量研究手段,正被应用到越来越多的研究领域。牛的卵子发生以及着床前胚胎的生长发育都离不开蛋白质的一系列变化,通过蛋白质组学的研究手段可对牛卵母细胞成熟以及胚胎发育分子机制进行研究。前人通过构建成熟前后的卵母细胞或不同时期的着床前胚胎等的蛋白质组表达谱,来获得与卵母细胞成熟相关的标志蛋白,并对这些标志物进行验证和分析,将有利于理解牛卵母细胞成熟、体外受精及着床前胚胎发育的分子机制,为提高牛卵母细胞的成熟率以及胚胎的发育率及提高牛繁殖率等奠定基础。主要从双向聚丙烯酰胺凝胶电泳、色谱技术以及质谱技术等蛋白质组学研究手段为切入点,对蛋白质组学在牛卵母细胞和着床前胚胎发育过程中的研究进展进行综述,为进一步研究牛卵母细胞及附植前胚胎提供参考。 展开更多

关键词 蛋白质组 卵母细胞 着床前胚胎

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去除高丰度蛋白质后水牛卵泡液的双向电泳差异分析 被引量：4

9

作者 黄愉淋 付强 +5 位作者 黄德伦 陈富美 黄凤玲 梁贤威 张明 卢克焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1113-1119,共7页

以广西沼泽型水牛卵泡液为研究对象,用试剂盒免疫去除成熟及未成熟水牛卵泡液高丰度蛋白质后,采用已建立并优化的双向电泳体系对卵泡液蛋白质样品进行分离。软件分析发现,21个差异表达蛋白质与成熟卵泡液相比,10个蛋白质点表达上调,7个... 以广西沼泽型水牛卵泡液为研究对象,用试剂盒免疫去除成熟及未成熟水牛卵泡液高丰度蛋白质后,采用已建立并优化的双向电泳体系对卵泡液蛋白质样品进行分离。软件分析发现,21个差异表达蛋白质与成熟卵泡液相比,10个蛋白质点表达上调,7个蛋白质点表达下调,3个蛋白质点缺失,1个蛋白质点在水牛未成熟卵泡液中特异性表达。经质谱分析,最终鉴定出3个蛋白质点:硫酸化糖蛋白、转铁蛋白和触珠蛋白。该研究成功分离并鉴定的水牛卵泡液差异蛋白质,为揭示水牛卵母细胞发育的微环境及其成熟机制提供试验依据。其中转铁蛋白对于水牛卵泡液的发育成熟具有十分重要的促进作用,而其它2个蛋白质对水牛卵泡液的成熟相关机制还尚未清楚,有待于进一步的试验研究。 展开更多

关键词 水牛卵泡液 高丰度蛋白质去除 差异蛋白质组 双向电泳 质谱鉴定

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尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)生长相关分析及生长模型构建 被引量：11

10

作者 肖俊 凌正宝 +6 位作者 唐瞻杨 罗永巨 郭忠宝 郭恩彦 严欣 张明 甘西 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1272-1278,共7页

运用Pearson相关分析对尼罗罗非鱼可量性状进行分析,并采用Logistic、Gompertz、Bertallanffy三种非线性模型对尼罗罗非鱼生长相关参数进行生长模型构建,以研究尼罗罗非鱼的生长发育规律。结果表明:尼罗罗非鱼各形态性状与体重之间的相... 运用Pearson相关分析对尼罗罗非鱼可量性状进行分析,并采用Logistic、Gompertz、Bertallanffy三种非线性模型对尼罗罗非鱼生长相关参数进行生长模型构建,以研究尼罗罗非鱼的生长发育规律。结果表明:尼罗罗非鱼各形态性状与体重之间的相关系数均达到极显著水平(P<0.01),体重与全长、体长、体高的相关性相对显著,与尾柄长的相关性不明显。生长模型研究结果表明:三种模型均能很好地模拟尼罗罗非鱼生长曲线,拟合度(R2)均高于0.983,其中以Logistic模型的拟合度最高(R2=0.991),运用这3种模型对尼罗罗非鱼进行生长曲线的拟合和比较分析较为可行。 展开更多

关键词 尼罗罗非鱼 相关分析 生长模型

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瘦素对水牛卵母细胞体外成熟和体外受精胚胎发育的影响 被引量：2

11

作者 陆阳清 罗茜 +4 位作者 江明生 叶丹娜 杨小淦 许慧艳 卢克焕 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期697-700,共4页

【目的】探讨瘦素在水牛体外胚胎生产体系中的作用机理,提高体外胚胎生产效率,为利用分离精子加速水牛品种改良及良种群的扩繁奠定基础。【方法】分别在水牛卵母细胞成熟培养液和胚胎培养液中添加瘦素,研究其对水牛卵母细胞体外成熟率... 【目的】探讨瘦素在水牛体外胚胎生产体系中的作用机理,提高体外胚胎生产效率,为利用分离精子加速水牛品种改良及良种群的扩繁奠定基础。【方法】分别在水牛卵母细胞成熟培养液和胚胎培养液中添加瘦素,研究其对水牛卵母细胞体外成熟率和体外受精胚胎发育率的影响。【结果】在水牛卵母细胞体外成熟液阶段,添加瘦素不仅能促成熟,还能提高其胚胎发育潜能;在体外受精后的胚胎培养阶段,添加瘦素也能显著提高囊胚发育率,二者的最佳瘦素浓度均为10ng/mL。在最佳瘦素浓度(10ng/mL)下,常规精子体外受精后的囊胚发育率从19.7%(空白对照组)提高到27.0%,分离精子体外受精后的囊胚发育率从12.3%(空白对照组)提高到17.4%。【结论】瘦素能促进水牛卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育,并以添加10ng/mL瘦素的促进效果最明显。 展开更多

关键词 水牛 瘦素 卵母细胞 体外受精 胚胎发育

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犊牛卵泡液多肽信息分析 被引量：1

12

作者 赵海峰 柯浩 +8 位作者 张飒 陈东峰 陈集成 陈宝剑 沈创 韦英将 蒋钦杨 陆凤花 韦英明 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1909-1913,共5页

【目的】了解成年牛和犊牛卵泡液中多肽的信息表达差异,为完善犊牛卵泡液基础研究及犊牛卵母细胞体外培养体系奠定基础。【方法】采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)对超排成年牛和超排犊牛卵泡液中的肽段进行分... 【目的】了解成年牛和犊牛卵泡液中多肽的信息表达差异,为完善犊牛卵泡液基础研究及犊牛卵母细胞体外培养体系奠定基础。【方法】采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)对超排成年牛和超排犊牛卵泡液中的肽段进行分析,根据多肽的信号峰信息,通过MASCOT数据库进行蛋白检索。【结果】从成功构建的成年牛与犊牛卵泡液质谱多肽信号峰模型图谱可知,超排犊牛卵泡液多肽表达图谱中有60～80个信号峰,而超排成年牛的有30～40个信号峰;其中成年牛卵泡液有两个特有信号峰,质荷比为1218.58和1509.77 m/z,犊牛有1个特有信号峰,质荷比为953.54 m/z。利用MASCOT数据库对获得的卵泡液多肽信息进行蛋白检索,发现成年牛卵泡液中有18种蛋白,犊牛卵泡液中有11种蛋白。【结论】犊牛卵泡液中蛋白多肽信息峰数量多于成年牛,但卵泡液中总蛋白数量少于成年牛,这种差异可能是导致犊牛卵母细胞发育能力低于成年牛的重要原因之一。 展开更多

关键词 犊牛 卵泡液 超数排卵 多肽 基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)

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水牛卵泡液液相色谱分离及差异蛋白质分析 被引量：1

13

作者 付强 杨丽 +2 位作者 刘振方 张明 卢克焕 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期64-67,共4页

本研究采用液相色谱-质谱分离鉴定技术,比较不同直径卵泡液(直径<2mm、直径2～4mm、直径>4mm)的蛋白质组分差异,收集显著差异的馏分,还原烷基化处理后酶解成肽段,再经反相色谱二次分离后质谱鉴定。结果表明,在优势卵泡中(直径>... 本研究采用液相色谱-质谱分离鉴定技术,比较不同直径卵泡液(直径<2mm、直径2～4mm、直径>4mm)的蛋白质组分差异,收集显著差异的馏分,还原烷基化处理后酶解成肽段,再经反相色谱二次分离后质谱鉴定。结果表明,在优势卵泡中(直径>4mm)存在显著高表达的蛋白质峰,质谱鉴定结果为转铁蛋白(transferrin,TRF)。转铁蛋白的功能和表达的变化提示,该蛋白质的高表达可作为潜在排卵的标志物之一。同时,本研究采用的LC-MS技术将为卵泡液大规模蛋白质组分离和表达谱构建提供参考。 展开更多

关键词 水牛 卵泡液 蛋白质 液相色谱分离 转铁蛋白

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水牛精子蛋白质组双向电泳体系的建立和优化 被引量：5

14

作者 薛雯 杨丽 +3 位作者 付强 刘振方 张明 卢克焕 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期151-155,共5页

建立和优化一种适合水牛精子蛋白质组学研究的双向电泳技术。以水牛精子为研究对象,比较两种不同配方的裂解液,以及不同上样量对其2-DE图谱质量的影响。结果显示,以7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4%CHAPS、1%DTT、0.5%Cocktail of protease... 建立和优化一种适合水牛精子蛋白质组学研究的双向电泳技术。以水牛精子为研究对象,比较两种不同配方的裂解液,以及不同上样量对其2-DE图谱质量的影响。结果显示,以7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4%CHAPS、1%DTT、0.5%Cocktail of protease inhibitors为裂解液,24 cm胶条上样量200μg时,可获得较好的精子总蛋白质2-DE图谱。运用ImageMaster 2-Dplatinum分析软件检测出约500个蛋白质点,蛋白质大部分分布在等电点5-7之间,分子量范围约40-90 kD。 展开更多

关键词 水牛 精子 双向电泳 蛋白质组学 裂解液

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EGCG对水牛卵母细胞体外成熟的影响 被引量：2

15

作者 李敏玲 陈富美 +5 位作者 廖碧云 潘宏 黄德伦 黄凤玲 陆阳清 张明 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期478-482,共5页

【目的】探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对水牛卵母细胞体外成熟质量与早期胚胎发育能力的影响,为优化水牛体外胚胎生产体系及提高其体外胚胎生产效率提供参考。【方法】在水牛卵母细胞体外成熟液中添加不同浓度的EGCG,以排出第... 【目的】探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对水牛卵母细胞体外成熟质量与早期胚胎发育能力的影响,为优化水牛体外胚胎生产体系及提高其体外胚胎生产效率提供参考。【方法】在水牛卵母细胞体外成熟液中添加不同浓度的EGCG,以排出第一极体为细胞核成熟标志,观察卵母细胞核成熟情况,检测MII期卵母细胞内活性氧（ROS）和谷胱甘肽（GSH）含量,并统计经孤雌激活及体外受精后早期胚胎的发育情况。【结果】在体外成熟液中添加10~20μmol/L EGCG有利于水牛卵母细胞体外成熟过程中卵丘扩展,卵丘扩展指数（CEI）分别为2.49%和2.42%,卵母细胞成熟率（59.31%和50.98%）显著高于未添加EGCG的CK组（P〈0.05,下同）,MII期卵母细胞的GSH含量（3.21和3.25 pmol/枚）也显著高于CK组;添加20~30μmol/L EGCG可显著降低水牛MII期卵母细胞的ROS水平。以体外成熟培养获得的水牛MII期卵母细胞分别进行孤雌激活及体外受精,结果发现以在体外成熟液中添加10μmol/L EGCG的效果最佳,其对应的卵裂率和囊胚发育率均显著高于CK组。【结论】EGCG可用于优化水牛卵母细胞体外成熟体系,能有效提高卵母细胞的成熟率和体外发育潜力,且以水牛体外成熟液中添加10μmol/L EGCG的效果最佳。 展开更多

关键词 水牛 表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG) 卵母细胞 体外成熟 胚胎发育

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水牛热休克蛋白70基因克隆及其表达分析 被引量：3

16

作者 汤玉燕 姚顺 +4 位作者 濮黎萍 赵秀玲 陈东荣 张鹏飞 张明 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期2599-2607,共9页

【目的】克隆水牛热休克蛋白70基因(HSP70)并进行生物信息学分析,同时明确HSP70基因在水牛成熟卵母细胞(MII期)和2-细胞期胚胎中的表达情况,为研究HSP70在水牛卵母细胞成熟及着床前早期胚胎发育中的作用机理提供理论依据。【方法】根据N... 【目的】克隆水牛热休克蛋白70基因(HSP70)并进行生物信息学分析,同时明确HSP70基因在水牛成熟卵母细胞(MII期)和2-细胞期胚胎中的表达情况,为研究HSP70在水牛卵母细胞成熟及着床前早期胚胎发育中的作用机理提供理论依据。【方法】根据NCBI已公布的水牛HSP70基因mRNA预测序列(MH814759.1)设计引物,通过RT-PCR克隆水牛HSP70基因,运用DNAStar、MEGA 7.0、TMHMM 2.0及SignalP 4.1 Server等在线软件进行生物信息学分析;同时采用细胞免疫荧光分析HSP70在水牛成熟卵母细胞及2-细胞期胚胎中的表达情况。【结果】水牛HSP70基因编码区(CDS)长度为1926 bp,共编码641个氨基酸残基。克隆获得的水牛HSP70基因序列与NCBI已公布水牛HSP70基因mRNA预测序列(MH814759.1)的相似性高达97.7%;与牛、家犬、山羊、小鼠、绵羊和大鼠的HSP70基因序列具有较高的相似性,其中与牛的相似性高达99.1%。基于HSP70基因核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示,水牛与牛的亲缘关系最近。水牛HSP70分子量为70.27 kD,分子式为C3088H4967N8670972S15,理论等电点(pI)为5.67,不稳定系数为32.84,属于稳定蛋白;不存在跨膜结构及信号肽,主要定位于细胞质(60.9%)、细胞核(30.4%)及线粒体(8.7%),其亲水性较强;水牛HSP70蛋白结构以α-螺旋和β-折叠为主。HSP70在水牛成熟卵母细胞及2-细胞期胚胎中均有表达,且主要集中在细胞质。【结论】水牛HSP70基因在进化过程中具有高度的保守性,在水牛成熟卵母细胞和着床前早期胚胎中均有表达,且主要集中在细胞质,属于结构型HSP70。 展开更多

关键词 水牛 热休克蛋白70(HSP70) 基因克隆 表达分析 细胞质

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血管内皮生长因子对水牛卵母细胞体外受精的影响 被引量：1

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作者 蒋丽 潘洪丽 +4 位作者 李敏玲 廖碧云 付强 张明 卢克焕 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1919-1922,共4页

【目的】探讨血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)对水牛卵母细胞体外受精的影响,为优化水牛卵母细胞体外培养体系及提高水牛体外胚胎生产效率奠定基础。【方法】以带有3层以上卵丘细胞的卵丘—卵母细胞复合体(C... 【目的】探讨血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)对水牛卵母细胞体外受精的影响,为优化水牛卵母细胞体外培养体系及提高水牛体外胚胎生产效率奠定基础。【方法】以带有3层以上卵丘细胞的卵丘—卵母细胞复合体(COCs)为材料,分别在水牛卵母细胞体外成熟液和受精液中添加重组人VEGF165,研究VEGF对水牛卵母细胞体外成熟、体外受精和早期胚胎发育的影响。【结果】在成熟液中添加10 ng/mL VEGF,水牛卵母细胞的第一极体排出率由57.3%提高到72.3%,差异显著(P<0.05,下同);体外受精后的受精卵分裂率由41.0%显著提高到53.3%。在受精液中添加10 ng/mL VEGF,水牛体外受精的受精卵分裂率由41.9%提高到63.0%,差异极显著(P<0.01,下同),囊胚形成率由17.0%显著提高到32.6%。在成熟液和受精液中同时添加10 ng/mL VEGF,水牛体外受精的受精卵分裂率和囊胚形成率由43.4%和19.0%极显著提高到64.3%和27.2%,囊胚细胞数由89.5显著提高到106.8。【结论】VEGF能促进水牛卵母细胞体外成熟、体外受精及早期胚胎的发育,因此可将VEGF用于水牛卵母细胞体外受精体系的优化,提高水牛体外胚胎生产效率。 展开更多

关键词 水牛 血管内皮生长因子(VEGF) 卵母细胞 体外受精 卵裂率 囊胚形成率

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水牛波形蛋白基因克隆及其表达分析 被引量：1

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作者 濮黎萍 候振 +4 位作者 徐壮壮 陈富美 王焕景 黄凤玲 张明 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2266-2272,共7页

【目的】克隆水牛波形蛋白(VIM)基因,并明确VIM基因在水牛成熟卵母细胞(MII期)和早期胚胎(2-细胞阶段)中的表达情况,为研究VIM在卵母细胞成熟及附植前胚胎发育中的作用机理打下基础。【方法】根据GenBank上已公布的水牛VIM基因mRNA序列... 【目的】克隆水牛波形蛋白(VIM)基因,并明确VIM基因在水牛成熟卵母细胞(MII期)和早期胚胎(2-细胞阶段)中的表达情况,为研究VIM在卵母细胞成熟及附植前胚胎发育中的作用机理打下基础。【方法】根据GenBank上已公布的水牛VIM基因mRNA序列设计引物,采用RT-PCR克隆水牛VIM基因,利用在线软件程序对克隆获得的水牛VIM基因进行生物信息学分析,同时以细胞免疫荧光试验检测VIM在水牛成熟卵母细胞(MII期)及早期胚胎(2-细胞阶段)中的表达情况。【结果】水牛VIM基因长度为1469 bp,其编码区长度1401 bp,编码466个氨基酸。水牛VIM基因序列与人类、黑猩猩、食蟹猴、家犬、马和牛的VIM基因序列具有高度的同源性,分别为93%、93%、93%、94%、94%和99%;基于VIM基因序列构建的系统发育进化树也显示水牛与牛的亲缘关系最近。水牛VIM的分子量为53.73 k D,理论等电点(p I)5.05,主要在线粒体中表达,稳定性差(不稳定系数53.65),具有较强的亲水性,无跨膜结构,不属于分泌型蛋白,其蛋白结构以α-螺旋为主。VIM在水牛成熟卵母细胞(MII期)及早期胚胎(2-细胞阶段)中均有表达,且在成熟卵母细胞中的表达量明显高于早期胚胎。【结论】水牛VIM基因编码序列具有较高的保守性,且在水牛成熟卵母细胞(MII期)中的表达量明显高于早期胚胎(2-细胞阶段)。 展开更多

关键词 水牛 波形蛋白(VIM) 基因克隆 生物信息学分析 表达分析

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水牛附睾不同部位精子超微结构及荧光标记差异分析 被引量：1

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作者 何翁潭 张鹏飞 +4 位作者 黄愉淋 肖凯 黄良凤 陆阳清 张明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期3449-3460,共12页

哺乳动物精子经过附睾成熟后才能获得运动及受精的能力,为解释水牛精子在附睾中的成熟过程,本研究选用性成熟期的沼泽型水牛附睾,利用乙烯吡咯烷酮包裹的硅胶微小颗粒(Percoll)梯度离心纯化分别提取附睾头、体和尾部精子,应用计算机辅... 哺乳动物精子经过附睾成熟后才能获得运动及受精的能力,为解释水牛精子在附睾中的成熟过程,本研究选用性成熟期的沼泽型水牛附睾,利用乙烯吡咯烷酮包裹的硅胶微小颗粒(Percoll)梯度离心纯化分别提取附睾头、体和尾部精子,应用计算机辅助精子分析系统(CASA)检测精子活力,透射电镜观察附睾不同部位精子的超微结构,对精子进行荧光标记后,利用流式细胞仪和荧光显微镜观察检测不同部位精子质膜完整率、线粒体鞘膜电位和顶体差异。结果表明,Percoll分离得到附睾头、体和尾3部位精子的纯度达95%,不同部位精子活力分别为8.35%、20.21%和65.60%;附睾不同部位精子都存在着结构完整的精子以及相同的畸形类型,附睾尾部精子线粒体鞘高膜电位比率最高,精子质膜完整率从附睾头部到尾部逐渐升高,精子顶体完整率从附睾头部到尾部逐渐升高。本研究直观地展示了水牛附睾不同部位精子特征以及差异,为研究水牛精子成熟机理提供理论依据。 展开更多

关键词 附睾 精子 超微结构观察 荧光分子探针 顶体

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