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腐败梭菌α毒素突变体可溶性表达及其对小鼠的免疫评价
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作者 雷伊诺 赵慧玉 +8 位作者 幸倩如 许国顺 张广智 张珊 蒋卉 沈青春 丁家波 韦英益 范学政 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第10期5148-5158,共11页
本研究旨在获得可溶性、免疫原性好的腐败梭菌α毒素突变体。通过MPEPE预测工具对α毒素蛋白进行点突变预测,构建表达载体在大肠杆菌中表达验证,比较rCsa各突变体的可溶性、毒性和小鼠免疫原性。结果表明,rCsa突变体在大肠杆菌中正确表... 本研究旨在获得可溶性、免疫原性好的腐败梭菌α毒素突变体。通过MPEPE预测工具对α毒素蛋白进行点突变预测,构建表达载体在大肠杆菌中表达验证,比较rCsa各突变体的可溶性、毒性和小鼠免疫原性。结果表明,rCsa突变体在大肠杆菌中正确表达,条带大小均为约47 ku。rCsaS398D、rCsaK405M、rCsaN397D在大肠杆菌细胞裂解上清中分别占表达总蛋白的9.5%、9.4%、10.5%,在裂解上清与沉淀中的表达量之比分别为2.5、2.6、2.9,rCsaN397D可溶性表达量最高;小鼠毒性试验结果显示3个rCsa突变体毒性均未丢失;Vero细胞毒性试验显示,0.0016μg·mL^(-1)的各rCsa突变体即可引起明显的CPE;ELISA检测rCsa突变体二免21 d后小鼠血清IgG抗体水平,rCsaN397D组血清的S/N值极显著高于rCsaS398D组和rCsaK405M组(P<0.01);用Vero细胞测定rCsa突变体二免21 d鼠血清的中和效价,发现rCsaN397D二免21 d鼠血清的中和效价为6400 MLD·mL^(-1),极显著高于rCsaS398D和rCsaK405M组免疫血清的中和效价(P<0.0001),且高于前期试验中未突变rCsa二免21 d鼠血清的中和效价。综上,rCsaN397D在可溶性、免疫原性方面均优于未突变rCsa、rCsaS398D和rCsaK405M,可作为腐败梭菌病基因工程亚单位疫苗的候选抗原。 展开更多
关键词 腐败梭菌α毒素 MPEPE 毒力 可溶性 免疫原性
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