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转人干扰素α-2b细胞株建立及其外源基因表达分析
被引量：
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作者
罗婵
屈春凤
+5 位作者
李辉
雷钏
周宇
刘庆友
蒋建荣
石德顺
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期882-887,共6页
【目的】从细胞水平探讨应用水牛乳腺生物反应器生产人干扰素α-2b(IFNα-2b)的可行性,为水牛乳腺生物反应器的制备提供参考依据。【方法】建立并优化核转染人乳腺癌细胞Bcap-37的方法,再利用该方法将水牛乳腺特异性表达人IFNα-2b载体...
【目的】从细胞水平探讨应用水牛乳腺生物反应器生产人干扰素α-2b(IFNα-2b)的可行性,为水牛乳腺生物反应器的制备提供参考依据。【方法】建立并优化核转染人乳腺癌细胞Bcap-37的方法,再利用该方法将水牛乳腺特异性表达人IFNα-2b载体导入Bcap-37细胞,建立转基因细胞株,然后分别从RNA水平和蛋白质水平对其能否正常表达人IFNα-2b进行分析。【结果】电压是影响Bcap-37细胞核转染效率的关键因素,对其进行优化(电压275 V、电击时间10 ms)后的核转染效率可达81.1%。使用优化后的核转染方法可将水牛乳腺特异性表达载体p BCN-IFN-CMVEGFP-neo和p BCN-IFN-CMV-EGFP-IRES-neo成功转入Bcap-37细胞而获得转人IFNα-2b细胞株,经IFNα-2b基因的m RNA表达丰度及IFNα-2b蛋白的Western blotting检测,证实在两株转基因细胞系中均能顺利进行IFNα-2b基因的转录与翻译。【结论】建立的核转染法能高效转染Bcap-37细胞,可应用该方法在细胞水平上对携带人IFNα-2b基因水牛乳腺特异性表达载体的表达能力进行分析,并证实乳腺特异性表达载体(p BCN-IFN-CMV-EGFP-neo和p BCN-IFN-CMVEGFP-IRES-neo)均能用于水牛乳腺生物反应器的制备。
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关键词
水牛
人干扰素
核转染
细胞株
表达分析
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职称材料
题名
转人干扰素α-2b细胞株建立及其外源基因表达分析
被引量：
1
1
作者
罗婵
屈春凤
李辉
雷钏
周宇
刘庆友
蒋建荣
石德顺
机构
广西大学动物科学与技术学院/亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室
出处
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期882-887,共6页
基金
国家"863"计划项目(2011AA100607)
文摘
【目的】从细胞水平探讨应用水牛乳腺生物反应器生产人干扰素α-2b(IFNα-2b)的可行性,为水牛乳腺生物反应器的制备提供参考依据。【方法】建立并优化核转染人乳腺癌细胞Bcap-37的方法,再利用该方法将水牛乳腺特异性表达人IFNα-2b载体导入Bcap-37细胞,建立转基因细胞株,然后分别从RNA水平和蛋白质水平对其能否正常表达人IFNα-2b进行分析。【结果】电压是影响Bcap-37细胞核转染效率的关键因素,对其进行优化(电压275 V、电击时间10 ms)后的核转染效率可达81.1%。使用优化后的核转染方法可将水牛乳腺特异性表达载体p BCN-IFN-CMVEGFP-neo和p BCN-IFN-CMV-EGFP-IRES-neo成功转入Bcap-37细胞而获得转人IFNα-2b细胞株,经IFNα-2b基因的m RNA表达丰度及IFNα-2b蛋白的Western blotting检测,证实在两株转基因细胞系中均能顺利进行IFNα-2b基因的转录与翻译。【结论】建立的核转染法能高效转染Bcap-37细胞,可应用该方法在细胞水平上对携带人IFNα-2b基因水牛乳腺特异性表达载体的表达能力进行分析,并证实乳腺特异性表达载体(p BCN-IFN-CMV-EGFP-neo和p BCN-IFN-CMVEGFP-IRES-neo)均能用于水牛乳腺生物反应器的制备。
关键词
水牛
人干扰素
核转染
细胞株
表达分析
Keywords
buffalo
human interferon
nucleofection
cell strains
expression analysis
分类号
S823.83 [农业科学—畜牧学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
转人干扰素α-2b细胞株建立及其外源基因表达分析
罗婵
屈春凤
李辉
雷钏
周宇
刘庆友
蒋建荣
石德顺
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
1
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