水牛黑色素皮质素1受体基因克隆、生物信息学分析及表达模式研究 被引量：5

1

作者 林宇纾 蒋恒洁 +3 位作者 杨丰硕 崔奎青 石德顺 刘庆友 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第10期2529-2537,共9页

本试验旨在对水牛黑色素皮质素1受体(MC1R)基因进行克隆、生物信息学分析及表达模式研究。参考牛MC1R基因(GenBank登录号:JN123363.1)序列设计引物,以本地沼泽水牛、白沼泽水牛、摩拉水牛和黄牛基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增克隆MC1... 本试验旨在对水牛黑色素皮质素1受体(MC1R)基因进行克隆、生物信息学分析及表达模式研究。参考牛MC1R基因(GenBank登录号:JN123363.1)序列设计引物,以本地沼泽水牛、白沼泽水牛、摩拉水牛和黄牛基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增克隆MC1R基因片段并进行测序分析。运用QRT-PCR方法检测摩拉水牛、沼泽水牛、白沼泽水牛和黄牛皮肤组织中MC1R基因的表达模式,并通过Western blotting方法检测沼泽水牛和白沼泽水牛MC1R基因的蛋白表达差异。结果表明,应用PCR方法成功克隆了水牛MC1R基因,其编码区全长954bp,共编码317个氨基酸。测序分析后发现沼泽水牛、白沼泽水牛、摩拉水牛和黄牛MC1R基因的核苷酸序列和氨基酸序列相似性很高。沼泽水牛与白沼泽水牛在476、618、881、930和931bp位点上分别发生T→C、G→C、G→A、G→A和A→G突变,导致了沼泽水牛和白沼泽水牛第159位氨基酸由丝氨酸变成苯丙氨酸,第310位氨基酸由谷氨酸变成丙氨酸,第294位氨基酸由天冬氨酸变成丙氨酸,发生了非同义突变。QRT-PCR结果发现,MC1R基因在摩拉水牛、沼泽水牛和黄牛皮肤组织中的相对表达量均显著高于白沼泽水牛(P<0.05);Western blotting分析结果显示,沼泽水牛皮肤组织中MC1R蛋白的表达量高于白沼泽水牛。综上所述,白沼泽水牛MC1R基因的编码区发生氨基酸位点突变,且相对表达量和蛋白表达量均低于沼泽水牛,推测此为白沼泽水牛体内合成的黑色素缺失而导致毛色白化的主因。 展开更多

关键词 水牛 MC1R基因 毛色 克隆 表达模式

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广西巴马小型猪MyoD1基因克隆及其真核表达载体的构建 被引量：5

2

作者 奉玲丽 张瑞门 +4 位作者 黄叶 夏攀洁 张名媛 梁晶 兰干球 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第4期977-985,共9页

本研究旨在对广西巴马小型猪成肌细胞决定基因1(myoblast-determining 1,MyoD1)进行克隆分析,并构建MyoD1基因真核表达载体pEGFP-N1-MyoD1,为进一步研究该基因在广西巴马小型猪骨骼肌发育中的调控作用奠定基础。以广西巴马小型猪的肝脏... 本研究旨在对广西巴马小型猪成肌细胞决定基因1(myoblast-determining 1,MyoD1)进行克隆分析,并构建MyoD1基因真核表达载体pEGFP-N1-MyoD1,为进一步研究该基因在广西巴马小型猪骨骼肌发育中的调控作用奠定基础。以广西巴马小型猪的肝脏组织为材料,应用RT-PCR技术克隆得到广西巴马小型猪MyoD1基因编码序列,对其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,并构建该基因的真核表达载体,经过PCR和双酶切验证,通过脂质体转染,将重组质粒转染C2C12细胞,在细胞水平验证了该载体的正确性。结果显示,广西巴马小型猪MyoD1基因编码区序列长960 bp,编码319个氨基酸,核苷酸序列与猪、牛、水牛、绵羊、马、人、小家鼠、褐家鼠、家犬的同源性依次为99.7%、92.8%、92.9%、92.6%、91.5%、82.9%、82.9%、82.0%和90.9%;系统进化树分析表明,广西巴马小型猪MyoD1基因在不同物种及进化过程中具有高度保守性;蛋白质结构分析表明,MyoD1蛋白为膜外蛋白,在第4-116位氨基酸处存在1个MyoD家族标志性的MyoD结构域,对广西巴马小型猪、猪和人的MyoD1蛋白高级结构比较发现其具有极高的相似性。本研究构建的广西巴马小型猪MyoD1基因表达载体pEGFP-N1-MyoD1,转染C2C12细胞后产生绿色荧光信号,表明MyoD1基因在C2C12细胞中成功表达。 展开更多

关键词 广西巴马小型猪 MyoD1基因 肌细胞 真核表达载体

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沼泽型水牛CYP19A1基因克隆、序列分析及组织表达研究 被引量：13

3

作者 苏节 刘庆友 +3 位作者 朱鹏 沈开元 石德顺 崔奎青 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期514-521,共8页

旨在对沼泽型水牛CYP19A1基因进行克隆、生物信息学分析及对其在水牛组织的表达规律进行系统的探索。根据GenBank已公布的牛CYP19A1基因序列,设计特异性引物应用RT-PCR方法扩增克隆获得目的基因片段;应用生物信息学方法,分析和预测了水... 旨在对沼泽型水牛CYP19A1基因进行克隆、生物信息学分析及对其在水牛组织的表达规律进行系统的探索。根据GenBank已公布的牛CYP19A1基因序列,设计特异性引物应用RT-PCR方法扩增克隆获得目的基因片段;应用生物信息学方法,分析和预测了水牛CYP19A1的理化性质、蛋白质二级及三级结构;应用QRT-PCR技术对CYP19A1在水牛组织的表达进行了差异分析。测序结果表明:水牛CYP19A1基因的编码区全长1 512bp,共编码503个氨基酸。多重序列比较分析显示水牛CYP19A1核苷酸序列与牛、绵羊、猪、人、马相应序列相似性分别为99%、98%、91%、86%和84%,结合系统进化树分析结果推测,CYP19A1基因在不同物种以及进化的过程中具有高度保守性。定量分析结果显示:水牛CYP19A1在水牛垂体、大脑、肝脏、骨骼、卵巢、肌肉和心脏组织具有不同程度的表达,其中垂体和大脑表达量最高,骨骼和卵巢次之,肌肉表达最低。本研究成功地克隆了沼泽型水牛CYP19A1基因并研究了其在不同水牛组织中的表达规律,为阐明其在水牛性腺中参与的激素合成转化规律等研究奠定了理论基础。 展开更多

关键词 水牛 CYP19A1 克隆分析 表达模式

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沼泽型水牛NANOG基因5′调控序列克隆与功能分析 被引量：6

4

作者 崔奎青 张会娜 +4 位作者 刘帅 刘晓华 杨素芳 刘庆友 石德顺 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期387-394,共8页

为探讨沼泽型水牛NANOG基因的表达调控模式,本研究扩增克隆了广西本地沼泽型水牛NANOG基因的5′调控序列片段,设计了-1 213、-745、-425和-312bp 4个缺失体片段,分别构建成EGFP报告载体。应用显微注射报告载体生产转基因水牛和猪胚胎,... 为探讨沼泽型水牛NANOG基因的表达调控模式,本研究扩增克隆了广西本地沼泽型水牛NANOG基因的5′调控序列片段,设计了-1 213、-745、-425和-312bp 4个缺失体片段,分别构建成EGFP报告载体。应用显微注射报告载体生产转基因水牛和猪胚胎,并转染水牛胎儿成纤维细胞。结果发现,EGFP的表达仅限于水牛囊胚内细胞团。各缺失体在猪4.5d胚胎中均能启动下游EGFP的表达,转录活性两两之间差异均极显著,按活性从大到小依次为-745、-425、-1 213和-312bp。各缺失体报告载体转染水牛成纤维细胞48h后均可见少数细胞发光,其中-425bp活性极显著高于其他缺失体,-1 213与-745bp之间无显著差异,二者均极显著高于-312bp。以上结果说明,水牛NANOG基因翻译起始位点上游-1 213bp在水牛囊胚中可以调控NANOG在内细胞团中的特异性表达;-1 213～-745bp含有多能细胞特异性的抑制子元件;-745～-425bp含有多能性细胞特异性的增强子元件;-425～-312bp含有非多能细胞特异性的增强子元件。 展开更多

关键词 沼泽型水牛 NANOG 调控序列 克隆

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线粒体移植对水牛卵母细胞发育潜能的影响 被引量：4

5

作者 高亚可 陆凤花 +4 位作者 吴柱连 马帆 刘晓华 杜姗姗 石德顺 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期583-591,共9页

本研究以水牛卵泡颗粒细胞作为线粒体的来源细胞,初步探讨水牛卵母细胞进行线粒体移植(MIT)后对其发育潜能的影响。试验比较了不同级别水牛卵母细胞mtDNA的拷贝数,并研究了水牛卵母细胞进行MIT后,其后续早期胚胎发育及胚胎线粒体膜电位... 本研究以水牛卵泡颗粒细胞作为线粒体的来源细胞,初步探讨水牛卵母细胞进行线粒体移植(MIT)后对其发育潜能的影响。试验比较了不同级别水牛卵母细胞mtDNA的拷贝数,并研究了水牛卵母细胞进行MIT后,其后续早期胚胎发育及胚胎线粒体膜电位(ΔΨm)的变化情况。结果显示:一级卵母细胞组的平均mtDNA拷贝数极显著高于二、三级卵母细胞组((202 101±74 432)vs(118 483±17 028),(39 177±7 938),P<0.01),二级卵母细胞组的平均mtDNA拷贝数极显著高于三级卵母细胞组((118 483±17 028)vs(39 177±7 938),P<0.01);孤雌激活处理后发现:一级卵母细胞组的卵裂率和囊胚率也都极显著高于二、三级卵母细胞组(P<0.01),而二级卵母细胞组激活后胚胎的卵裂率和囊胚率亦极显著高于三级卵母细胞组(P<0.01)。用Mito-Tracker探针标记的外源线粒体经移植后,会随着胚胎的发育而发生移动,分布到各个卵裂球中;且发现二级卵母细胞MIT组孤雌激活后的囊胚率显著高于对照组和空注组(27.3%vs 17.4%,7.84%,P<0.05),而三级卵母细胞MIT组激活后的囊胚率与对照组和空注组差异不显著(P>0.05);对胚胎ΔΨm检测发现,水牛植入前各时期胚胎ΔΨm总体呈上升趋势,线粒体移植后胚胎各时期的ΔΨm均显著高于对照组(P<0.05)。综上表明:不同质量的水牛卵母细胞其mtDNA拷贝数存在显著差异,且mtDNA拷贝数与卵母细胞质量和发育能力成正相关;通过移植外源线粒体可以提高二级水牛卵母细胞的发育潜能。 展开更多

关键词 线粒体移植 mtDNA拷贝数 线粒体膜电位 水牛 卵泡颗粒细胞

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水牛卵巢颗粒细胞的分离培养及凋亡测定 被引量：4

6

作者 高亚可 陆凤花 +3 位作者 马帆 乔树叶 陈施蓓 石德顺 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期140-144,共5页

研究主要是通过比较水牛卵巢颗粒细胞在不同培养基中的生长状态,并对细胞的增殖、核型及凋亡情况进行检测,以了解水牛卵巢颗粒细胞体外生长特性,建立水牛卵巢颗粒细胞的体外培养体系。结果发现,分离获得的水牛卵巢颗粒细胞存活率约为60%... 研究主要是通过比较水牛卵巢颗粒细胞在不同培养基中的生长状态,并对细胞的增殖、核型及凋亡情况进行检测,以了解水牛卵巢颗粒细胞体外生长特性,建立水牛卵巢颗粒细胞的体外培养体系。结果发现,分离获得的水牛卵巢颗粒细胞存活率约为60%;采用DMEM培养基,颗粒细胞的生长速度和生长状态优于TCM-199和DMEM/F12培养基;细胞培养24h后开始零星增殖,3～5d增殖速度达到高峰;第1、3、5、7代颗粒细胞正常核型比率差异不显著,均在85%以上;第1代颗粒细胞的凋亡率与第5代差异显著(P<0.05),与第7代差异极显著(P<0.01)。结果表明,DMEM培养基更适宜用于水牛颗粒细胞的体外培养;水牛颗粒细胞能稳定地进行传代培养,染色体的数目不会发生明显改变,但细胞凋亡率会随着培养代数的增加而明显升高。 展开更多

关键词 水牛 卵巢颗粒细胞 原代培养 培养基 增殖 凋亡

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铁蛋白Ferritin原核表达和纯化及纳米颗粒胞外自组装 被引量：4

7

作者 李志鹏 刘福航 +2 位作者 崔奎青 石德顺 刘庆友 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期75-82,共8页

旨在使用原核表达系统表达幽门螺杆菌铁蛋白Ferritin,获得具有天然纳米结构的铁蛋白纳米颗粒,从而通过表面修饰等方法应用于疾病治疗和抗原呈递等研究。将铁蛋白氨基酸序列按照大肠杆菌常用密码子进行优化,合成重组铁蛋白基因并克隆至... 旨在使用原核表达系统表达幽门螺杆菌铁蛋白Ferritin,获得具有天然纳米结构的铁蛋白纳米颗粒,从而通过表面修饰等方法应用于疾病治疗和抗原呈递等研究。将铁蛋白氨基酸序列按照大肠杆菌常用密码子进行优化,合成重组铁蛋白基因并克隆至原核表达载体。使用镍柱进行亲和层析纯化重组蛋白,并在透析复性后利用透射电子显微镜对体外自组装纳米颗粒进行鉴定。结果显示,本研究成功构建了pET-32a-Ferritin原核表达载体,并使用IPTG进行诱导表达获得His-Ferritin重组铁蛋白,且主要以包涵体形式存在。通过镍柱进行亲和层析纯化获得纯度为96%的重组蛋白,使用脱盐柱将重组蛋白梯度透析至2mol·L-1尿素缓冲液中进行复性后,使用电子显微镜观察胞外自组装重组蛋白为粒径在12~20nm的均一的纳米结构,与天然铁蛋白纳米粒子类似。本研究成功建立了Ferritin蛋白原核表达体系,通过诱导表达、亲和层析纯化及复性获得了具有天然纳米结构的铁蛋白纳米颗粒,为其在生物医药领域的应用奠定基础。 展开更多

关键词 铁蛋白 原核表达 亲和层析 胞外自组装

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沼泽型水牛ALK3基因克隆分析与表达模式研究 被引量：4

8

作者 朱鹏 粟小平 +3 位作者 苏节 刘金凤 刘庆友 石德顺 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第3期516-524,共9页

试验旨在对沼泽型水牛ALK3基因进行克隆、生物信息学分析,并对其在水牛组织中的表达规律进行系统研究。根据GenBank中已公布的牛ALK3基因序列设计特异性引物,应用RT-PCR方法扩增、克隆获得目的基因片段;应用生物信息学方法分析和预测了... 试验旨在对沼泽型水牛ALK3基因进行克隆、生物信息学分析,并对其在水牛组织中的表达规律进行系统研究。根据GenBank中已公布的牛ALK3基因序列设计特异性引物,应用RT-PCR方法扩增、克隆获得目的基因片段;应用生物信息学方法分析和预测了水牛ALK3的遗传进化及蛋白质的理化性质、二级和三级结构;并应用QRT-PCR技术对ALK3基因在水牛组织中的表达进行了差异分析。结果表明,水牛ALK3基因编码区全长1 599bp,共编码532个氨基酸。多重序列比较分析显示,水牛ALK3核苷酸序列与牛、绵羊、猪、马、人和小鼠相应序列的同源性分别为98%、96%、95%、93%、94%和91%。系统进化树分析显示,ALK3基因在不同物种以及进化的过程中具有高度保守性。对ALK3蛋白质的分析表明该蛋白呈弱碱性,有信号肽,细胞亚定位于胞膜上,存在丝氨酸/苏氨酸激酶和GS等结构。定量分析结果显示,ALK3在水牛生殖脊、心脏、肝脏、颗粒细胞、肺脏、卵丘细胞、肾脏、下丘脑、垂体、大脑等15种组织或细胞中有不同程度的表达,其中卵巢中表达量最高,垂体、肺脏和睾丸次之,卵丘细胞表达量最低。本研究成功克隆了沼泽型水牛ALK3基因,并研究了其在不同水牛组织细胞中的表达规律,为阐明其在水牛繁殖过程中的功能及转基因载体构建中的应用研究奠定了理论基础。 展开更多

关键词 水牛 ALK3 克隆分析 表达模式

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水牛转录抑制因子CTCF基因克隆分析及不同组织中的表达研究 被引量：2

9

作者 苏节 朱鹏 +3 位作者 刘庆友 雷小灿 石德顺 崔奎青 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第3期1-7,共7页

本研究克隆了水牛转录抑制因子CTCF基因序列,并运用生物信息学方法对其核苷酸序列的保守性和氨基酸的理化性质、蛋白质结构进行了系统分析,此外还对CTCF基因在水牛不同组织中的表达差异进行了检测。结果表明,应用RT-PCR技术克隆获得了长... 本研究克隆了水牛转录抑制因子CTCF基因序列,并运用生物信息学方法对其核苷酸序列的保守性和氨基酸的理化性质、蛋白质结构进行了系统分析,此外还对CTCF基因在水牛不同组织中的表达差异进行了检测。结果表明,应用RT-PCR技术克隆获得了长2239bp水牛CTCF基因序列,其中编码区全长2184bp,编码727个氨基酸,理论蛋白质分子质量82.7ku,等电点为6.57。多重序列比较分析显示,水牛CTCF核苷酸序列与牛、猪、马、人和小鼠相应序列的相似性分别为99%、96%、96%、94%和92%,结合系统进化树分析结果推测,CTCF基因在不同物种及进化的过程中具有高度的保守性。对水牛CTCF蛋白的二级和三级结构分析结果发现,其存在连续11个锌指C2H2结构,预测其为重要的DNA结合蛋白。定量表达分析结果显示,CTCF在水牛肝脏组织中相对表达量最高,大脑、肌肉和肾脏次之,卵巢和皮肤表达量较低。 展开更多

关键词 水牛 CTCF基因 克隆 表达

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小鼠精子透明质酸酶SPAM1在受精过程中的功能研究 被引量：2

10

作者 周崇 黄莉 +2 位作者 石德顺 蒋建荣 马场忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期652-659,共8页

旨在研究小鼠精子透明质酸酶SPAM1(Sperm adhesion molecule 1)对受精过程中精子/卵丘互作的影响,并初步探讨其可能的作用机制。本研究抽提小鼠尾尖基因组,利用PCR法检测小鼠Spam基因型;筛选的野生型(WT)和Spam1敲除(KO)小鼠,提取附睾... 旨在研究小鼠精子透明质酸酶SPAM1(Sperm adhesion molecule 1)对受精过程中精子/卵丘互作的影响,并初步探讨其可能的作用机制。本研究抽提小鼠尾尖基因组,利用PCR法检测小鼠Spam基因型;筛选的野生型(WT)和Spam1敲除(KO)小鼠,提取附睾尾部精子蛋白进行Western blot和酶活性检测;经TYH培养液2h获能后,分别对精子的运动性、穿透和分散卵丘细胞能力及体外受精(IVF)进行统计分析。结果表明,KO小鼠精子中未检测到SPAM1蛋白,透明质酸酶活性也极显著低于WT小鼠(P<0.01);而获能后精子运动性,在KO和WT小鼠之间差异不显著(P>0.05);与WT相比,KO小鼠精子缺失Spam1后,极显著地影响卵丘细胞层基质中精子顶体反应的发生比率(P<0.01),导致精子穿透卵丘细胞层的能力极显著降低(P<0.01),仅有少数精子能够到达卵子透明带表面,大量精子极易黏附于卵丘细胞层表面或外部边缘(P<0.01);此外,KO小鼠精子IVF 2h的卵丘细胞分散和受精率均呈现显著延迟(P<0.05)。综上表明,小鼠精子透明质酸酶SPAM1与顶体反应相关联并影响精子/卵丘互作。揭示SPAM1在穿卵过程中除了具有降解透明质酸的作用外,还存在其他的非酶活性功能。 展开更多

关键词 SPAM1 精子/卵丘互作 顶体反应 精子 小鼠

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水牛受精卵胞质内注射转基因的初步研究 被引量：3

11

作者 陈自洪 崔奎青 +4 位作者 孟凡丽 刘玉兵 王丹 陆凤花 石德顺 《安徽农业科学》 CAS 2012年第19期10166-10169,共4页

[目的]旨在探讨通过向水牛受精卵胞质内注射外源DNA实现转基因的可行性。[方法]水牛卵母细胞体外成熟20～22 h后随机分为2组:①在体外受精7～10 h或18～20 h后向卵胞质内注入约7.5 pl 50μg/ml含线性EGFP片段的DNA溶液;②分别注入单个... [目的]旨在探讨通过向水牛受精卵胞质内注射外源DNA实现转基因的可行性。[方法]水牛卵母细胞体外成熟20～22 h后随机分为2组:①在体外受精7～10 h或18～20 h后向卵胞质内注入约7.5 pl 50μg/ml含线性EGFP片段的DNA溶液;②分别注入单个精子与约7.5 pl 50μg/ml含线性EGFP片段的DNA混合物,观察外源基因在胚胎发育过程中的表达情况。[结果]受精卵胞质内注射的早期胚胎基因表达率、囊胚基因表达率与ICSI-Tr差异不显著(P>0.05),且IVF 7～10 h时注射的分裂率、早期胚胎基因表达率均显著高于18～20 h(P<0.05)。[结论]水牛IVF受精卵胞质内注射外源基因能获得转基因胚胎,且IVF后7～10 h注射的效果优于IVF后18～20 h注射。 展开更多

关键词 水牛 受精卵 胞质内注射 转基因

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水牛泌乳期与非泌乳期乳腺组织差异miRNAs的表达模式鉴定及分析 被引量：1

12

作者 蔡小艳 王鹏程 +6 位作者 邓凯 王萍 冯万有 张晓溪 任艳萍 刘庆友 石德顺 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第11期3220-3228,共9页

为了探求水牛泌乳和非泌乳期关键调控差异表达miRNAs及其表达模式,试验结合Solexa高通量测序和生物信息学分析结果筛选出18个水牛乳腺组织在泌乳期和非泌乳期差异表达的miRNAs,设计、筛选可行的miRNAs反转录及实时荧光定量PCR引物,进行... 为了探求水牛泌乳和非泌乳期关键调控差异表达miRNAs及其表达模式,试验结合Solexa高通量测序和生物信息学分析结果筛选出18个水牛乳腺组织在泌乳期和非泌乳期差异表达的miRNAs,设计、筛选可行的miRNAs反转录及实时荧光定量PCR引物,进行实时荧光定量PCR验证差异表达miRNAs的表达模式。结果发现,miRNA的差异表达模式与测序结果基本一致。泌乳期miRNA-103、miRNA-125a、miRNA-30a-5p和miRNA-148a的表达量均显著高于非泌乳期(P<0.05);miRNA-29a在非泌乳期表达量显著高于泌乳期(P<0.05);miRNA-141、miRNA-125b和miRNA-497在泌乳期表达量均高于非泌乳期,但差异不显著(P>0.05);低丰度的miRNA-490和miRNA-592在泌乳期表达量均显著高于非泌乳期(P<0.05)。Novel-123b在泌乳期和非泌乳期差异不显著(P>0.05),Novel-57在泌乳期比非泌乳期高29.79倍(P<0.01)。本试验结果为后续水牛乳腺研究提供了16个miRNA的可用特异性反转录引物和实时荧光定量PCR引物,miRNA-103、miRNA-125a、miRNA-30a-5p、miRNA-148a、miRNA-29a和Novel-57 6个水牛差异表达miRNAs值得进一步研究。 展开更多

关键词 水牛 泌乳期 非泌乳期 乳腺组织 MIRNA 鉴定 实时荧光定量PCR

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水牛Sohlh2基因的克隆分析及其表达

13

作者 朱鹏 陈集成 +5 位作者 陈凤 苏节 李海洋 韦英明 杨素芳 石德顺 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第2期399-407,共9页

为阐明广西沼泽型水牛Sohlh2基因在水牛不同组织中的表达规律,根据Gen Bank已公布的牛Sohlh2基因序列,设计其编码区(CDS)扩增引物,应用RT-PCR方法扩增克隆获得目的基因片段;应用生物信息学方法,系统分析了水牛Sohlh2的遗传进化以及蛋白... 为阐明广西沼泽型水牛Sohlh2基因在水牛不同组织中的表达规律,根据Gen Bank已公布的牛Sohlh2基因序列,设计其编码区(CDS)扩增引物,应用RT-PCR方法扩增克隆获得目的基因片段;应用生物信息学方法,系统分析了水牛Sohlh2的遗传进化以及蛋白质的理化性质、二级和三级结构;并应用RT-QPCR技术对Sohlh2基因在水牛组织(器官)的表达进行了分析。结果表明:水牛Sohlh2基因编码区全长1 281 bp,共编码426个氨基酸。多重序列比较分析结果显示水牛Sohlh2核苷酸序列与牛、绵羊、山羊、猪、马、人和小鼠相应序列的相似性分别为98%、96%、96%、85%、86%、81%和72%,系统进化树显示Sohlh2基因在不同物种以及进化的过程中具有高度保守性。Sohlh2蛋白质呈弱碱性,无信号肽,在细胞中亚定位于细胞核中,存在b HLH结构。水牛Sohlh2基因在水牛垂体、大脑、肝脏、骨骼、卵巢和睾丸等11个组织(器官)细胞中具有不同程度的表达,其中睾丸细胞中表达量最高,垂体和生殖脊细胞中表达量次之,卵丘细胞中表达量低,心脏、肺脏、肌肉细胞和颗粒细胞中不表达。 展开更多

关键词 水牛 Sohlh2基因 克隆分析 表达

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丙戊酸处理对猪手工克隆重构胚体外发育潜能的影响

14

作者 谢炳坤 吕玲燕 +5 位作者 陆杏蓉 崔奎青 孙俊铭 覃兆鲜 石德顺 刘庆友 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第5期180-186,共7页

为探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸(valproic acid,VPA)对猪手工克隆(HMC)胚胎发育潜能的影响,本研究比较了不同浓度(0、25、50、75和100nmol/L)VPA处理猪HMC重构胚对后期胚胎发育率、内细胞团数和组蛋白乙酰化程度的影响。结果表明,5... 为探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸(valproic acid,VPA)对猪手工克隆(HMC)胚胎发育潜能的影响,本研究比较了不同浓度(0、25、50、75和100nmol/L)VPA处理猪HMC重构胚对后期胚胎发育率、内细胞团数和组蛋白乙酰化程度的影响。结果表明,50、75nmol/L VPA处理组HMC重构胚的卵裂率和囊胚发育率均显著高于0、25和100nmol/L VPA处理组(P<0.05);与0、25、75和100nmol/L相比,50nmol/L VPA处理组能显著提高囊胚内细胞团细胞数(P<0.05),囊胚阶段VPA处理组的组蛋白H3K14乙酰化(AcH3K14)水平高于空白组和孤雌激活囊胚。因此,应用VPA处理可提高猪HMC重构胚胎分裂率、囊胚率及增加内细胞团细胞数,提高了猪HMC胚胎的体外发育潜能。 展开更多

关键词 猪 手工克隆 丙戊酸 发育潜能

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有机肥和铁肥对水稻土上桑叶失绿病的效应研究

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作者 黄渝岚 兰柳燕 +4 位作者 胡盛沪 张超兰 冯健玲 唐健 黎晓峰 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第11期1984-1989,共6页

为了探寻克服水稻土上桑叶失绿病的途径,采用田间试验方法研究了喷施铁肥及土施硫黄、有机肥、木质素铁肥对防治桑树（桂桑优62）失绿病的效应。结果表明,叶面喷施硫酸亚铁、硫酸亚铁加尿素和柠檬酸铁14 d后,桑叶单叶重、叶绿素、活性... 为了探寻克服水稻土上桑叶失绿病的途径,采用田间试验方法研究了喷施铁肥及土施硫黄、有机肥、木质素铁肥对防治桑树（桂桑优62）失绿病的效应。结果表明,叶面喷施硫酸亚铁、硫酸亚铁加尿素和柠檬酸铁14 d后,桑叶单叶重、叶绿素、活性铁含量均显著增加。施用硫黄、有机肥后土壤p H值显著降低,而土壤有效铁、叶片叶绿素和铁含量及桑叶重量显著增加,其中施用有机肥后桑叶增产率达43.0%～47.1%;施用后46 d及8个月后,对桑树铁素营养的效应及施用后54,305 d对夏桑及秋桑产量的效应均显著。施用木质素铁肥后土壤有效铁、桑叶铁含量和叶片重均有不同程度的增加。虽然木质素铁肥对土壤p H值的影响不显著,但有机肥与木质素铁肥混施后,土壤p H显著降低,而土壤有效铁含量和桑叶铁含量显著提高。施用木质素铁及混施木质素铁和有机肥73,236 d后,对桑树铁素营养及桑叶生长有显著正效应,对土壤p H值及有效铁含量的影响可维持至施用后13个月。由此可见,叶面喷施铁肥是快速矫正桑叶失绿病的有效措施,而土壤施用硫黄、有机肥、木质素铁肥及混合施用木质素铁和有机肥是防治水稻土上桑叶失绿病的长效措施。 展开更多

关键词 桑叶 失绿 铁肥 有机肥

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水牛SOX2基因5′调控序列的克隆与功能分析

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作者 张会娜 刘庆友 +5 位作者 刘帅 路新梅 邓彦飞 罗婵 石德顺 崔奎青 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第1期1-8,共8页

为探讨水牛SOX2基因的转录调控机制,本试验克隆获得其长2555bp的5′调控序列片段,结合生物信息分析设计了-2263、-1816、-1275、-660和-407bp 5个缺失体,并分别构建其EGFP表达报告载体,通过生产转基因早期胚胎和转染水牛胎儿成纤维细胞... 为探讨水牛SOX2基因的转录调控机制,本试验克隆获得其长2555bp的5′调控序列片段,结合生物信息分析设计了-2263、-1816、-1275、-660和-407bp 5个缺失体,并分别构建其EGFP表达报告载体,通过生产转基因早期胚胎和转染水牛胎儿成纤维细胞分析各缺失体片段的转录活性。结果发现,除-407bp以外的各缺失体在猪4.5d早期胚胎细胞中均能成功启动下游EGFP的表达,且随着片段缩短,其转录活性呈极显著递减趋势(P<0.01);而转染水牛成纤维细胞48h后,除p-407-EGFP以外的各缺失体报告载体转染组均观察到少数细胞发光,转录活性两两之间差异均极显著(P<0.01),转录活性从高到底排布分别为-2263、-660、-1275和-1816bp。p-407-EGFP载体在胚胎水平和细胞水平均未观察到荧光。以上结果表明,-660～-407bp是构成水牛SOX2基因表达不可缺失的部分,-2263～-1816bp中有非多能细胞特异性的增强子元件存在,而-1816～-1275bp和-1275～-660bp均含有多能性细胞特异性的增强子元件。 展开更多

关键词 水牛 SOX2基因 克隆 调控序列

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米非司酮对小鼠精子穿透卵丘细胞层的影响

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作者 周崇 黄莉 +1 位作者 石德顺 蒋建荣 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第5期1275-1280,共6页

本研究旨在探讨米非司酮(mifepristone,RU486)对小鼠精子穿透卵丘细胞层的影响。分别添加20μg/mL RU486到精子获能液或穿卵培养液,检测小鼠精子顶体反应发生比率和穿透卵丘细胞层能力。结果显示,添加RU486能够极显著抑制孕酮(P4,5μg/... 本研究旨在探讨米非司酮(mifepristone,RU486)对小鼠精子穿透卵丘细胞层的影响。分别添加20μg/mL RU486到精子获能液或穿卵培养液,检测小鼠精子顶体反应发生比率和穿透卵丘细胞层能力。结果显示,添加RU486能够极显著抑制孕酮(P4,5μg/mL)诱导的精子顶体反应(P<0.01);并极显著减少穿透卵丘细胞层到达卵子透明带的精子数量及在卵子-卵丘细胞复合体(OCC)中精子发生顶体反应的比率(P<0.01);同时添加P4和RU486情况下,相比单独添加RU486,虽然P4能够极显著地促进精子穿透卵丘细胞层到达透明带,但对OCC中的精子顶体反应没有明显作用。综上表明,RU486能够抑制P4诱导的顶体反应并影响小鼠精子穿透卵丘细胞层过程,揭示P4/孕酮受体(PGR)通路在小鼠精子穿卵过程中具有重要作用。 展开更多

关键词 米非司酮 孕酮 精子-卵丘互作 顶体反应 精子

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关中奶山羊PIS区域序列多态性分析 被引量：5

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作者 侯策 粟小平 +3 位作者 王起恬 崔奎青 石德顺 刘庆友 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第12期3554-3562,共9页

山羊无角性状是畜牧业生产中重要的经济性状,报道显示山羊无角间性综合征(polled intersex syndrome,PIS)控制着山羊的无角和间性性状。山羊PIS序列定位于1号染色体约11.7kb的序列上,试验旨在研究这段序列对关中奶山羊(3只有角山羊、3... 山羊无角性状是畜牧业生产中重要的经济性状,报道显示山羊无角间性综合征(polled intersex syndrome,PIS)控制着山羊的无角和间性性状。山羊PIS序列定位于1号染色体约11.7kb的序列上,试验旨在研究这段序列对关中奶山羊(3只有角山羊、3只无角山羊)无角性状的影响。选用4对引物(PIS1-1、PIS1-2、PIS2、PIS3)扩增关中奶山羊的PIS序列,第5对引物(PIS whole)用于检测PIS序列的完全缺失,对测序结果进行拼接、多态性分析,并对序列进行基因注释。结果发现,试验成功扩增出山羊PIS的全长序列(12.814kb),BLAST比对结果正确。PIS whole引物没有扩增出任何条带,说明关中奶山羊中不存在11.7kb的完全缺失。经SeqMan软件分析拼接序列发现30个多态性位点,这些多态性位点可能与关中奶山羊有角/无角性状相关。对拼接序列进行基因注释,发现存在1个tRNA编码位点、2个微卫星、3个microRNA编码位点及L1-EN、RT-nLTR-like样保守结构域,并发现1个CpG岛、1对反向重复序列和2段串联重复序列。本试验结果对关中奶山羊无角性状的分子机理研究具有重要的参考价值。 展开更多

关键词 关中奶山羊 无角性状 无角间性综合征(PIS) 多态性 序列注释

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基于水稻染色体片段代换系的苗期耐低氮QTL分析 被引量：7

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作者 贾佩陇 李彪 +3 位作者 黎明辉 刘剑镔 李容柏 罗继景 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期16-24,共9页

[目的]通过定位与水稻Oryza sativa耐低氮相关的数量性状位点(QTL),为今后相关基因的精细定位、克隆以及功能研究奠定基础,也为耐低氮水稻品种的培育提供理论参考。[方法]以Koshihikari(受体)和Nona Bokra(供体)为亲本构建的全基因组单... [目的]通过定位与水稻Oryza sativa耐低氮相关的数量性状位点(QTL),为今后相关基因的精细定位、克隆以及功能研究奠定基础,也为耐低氮水稻品种的培育提供理论参考。[方法]以Koshihikari(受体)和Nona Bokra(供体)为亲本构建的全基因组单片段代换系作为研究材料,在水稻苗期进行低氮胁迫处理,对水稻株高、根长、根鲜质量、根干质量、茎叶鲜质量、茎叶干质量、总鲜质量、总干质量共8个表型进行相对损失比分析和QTL定位。[结果]定位到2个与水稻低氮胁迫耐受相关的位点,分别是qRL1-1和qRFW2-1,这2个QTL位点分别在低氮胁迫下控制水稻根长和根鲜质量。其中,qRL1-1定位于1号染色体M1-29标记附近,LOD值为2.89,可解释的表型变异为11.23%;qRFW2-1定位于2号染色体M2-225标记附近,LOD值为2.53,可解释的表型变异为9.90%。其他6个表型未检测到相关位点。[结论]初步定位了与低氮胁迫下控制水稻根长、根鲜质量相关基因,为进一步的基因精细定位奠定基础。 展开更多

关键词 水稻 单片段代换系 苗期 耐低氮 QTL定位

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DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR对多能基因及甲基化相关基因在徒手克隆胚胎中表达模式的影响 被引量：2

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作者 陆杏蓉 李志鹏 +5 位作者 孙俊铭 吕玲燕 许钟峯 刘庆友 石德顺 崔奎青 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2240-2248,共9页

本试验通过实时荧光定量PCR方法对多能基因Oct4和Nanog及DNA甲基化相关基因Dnmt1和Tets在徒手克隆(handmade cloning,HMC)胚胎中的表达模式进行初步研究,并探讨5-Aza-CdR处理重构胚对这些基因表达模式的影响。结果显示,Oct4、Nanog和Tet... 本试验通过实时荧光定量PCR方法对多能基因Oct4和Nanog及DNA甲基化相关基因Dnmt1和Tets在徒手克隆(handmade cloning,HMC)胚胎中的表达模式进行初步研究,并探讨5-Aza-CdR处理重构胚对这些基因表达模式的影响。结果显示,Oct4、Nanog和Tet3的表达在2细胞时期达到顶峰,Dnmt1和Tet2基因的表达随HMC胚胎发育而下降,而Tet1基因随HMC胚胎发育表达上升。使用5-Aza-CdR处理重构胚没有改变Oct4、Tet1和Tet3基因的表达模式,使Nanog基因在胚胎发育初期表达增加,Dnmt1和Tet2基因在胚胎发育初期表达降低。研究初步确立了Oct4、Nanog、Dnmt1和Tets基因在HMC胚胎的表达模式,5-Aza-CdR对重构胚的处理可对HMC胚胎的甲基化模式产生影响。 展开更多

关键词 徒手克隆 5-AZA-CDR 基因 表达模式

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