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大孔树脂纯化牛蒡子木脂素工艺优化及其解热镇痛作用研究 被引量：1
1
作者 颜国庆 曾雪颜 +5 位作者 银慧慧 黄运福 姜源明 兰天艳 何深宏 刘伟 《饲料研究》 北大核心 2025年第8期98-104,共7页
试验旨在研究牛蒡子木脂素的大孔树脂纯化工艺及其解热镇痛作用。试验建立牛蒡苷和牛蒡苷元超高效液相色谱(UPLC)测定方法,优化大孔树脂纯化牛蒡苷和牛蒡苷元的工艺,并建立干酵母致热小鼠模型和醋酸致痛小鼠模型探讨牛蒡子木脂素解热镇... 试验旨在研究牛蒡子木脂素的大孔树脂纯化工艺及其解热镇痛作用。试验建立牛蒡苷和牛蒡苷元超高效液相色谱(UPLC)测定方法,优化大孔树脂纯化牛蒡苷和牛蒡苷元的工艺,并建立干酵母致热小鼠模型和醋酸致痛小鼠模型探讨牛蒡子木脂素解热镇痛作用。结果显示:最佳纯化工艺为优选树脂型号为AB-8,上样量1 BV,上样流速2 BV/h,以纯水洗脱4 BV,再以50%乙醇洗脱5 BV,收集50%洗脱液。经纯化后牛蒡苷和牛蒡苷元纯度为68.52%和8.07%,转移率为81.07%和73.47%。解热试验结果显示,与模型组相比,给药6、7 h时纯化物高剂量组及给药7 h时纯化物中剂量组体温变化显著降低(P<0.05),给药6 h时纯化物中剂量组、低剂量组体温变化极显著降低(P<0.01)。与模型组相比,各给药组小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及下丘脑中前列腺素E_(2)(PGE_(2))的含量极显著降低(P<0.01),纯化物低剂量组、中剂量组小鼠下丘脑环磷酸腺苷(cAMP)含量极显著降低(P<0.01),纯化物高剂量组小鼠下丘脑cAMP含量显著降低(P<0.05)。镇痛试验结果显示,粗提物组疼痛抑制率为36.59%,纯化物低、中、高剂量组疼痛抑制率为57.01%、50.65%、62.56%。研究表明,牛蒡子木脂素纯化物具有解热镇痛作用,其解热机制与致热因子和下丘脑体温调节中枢介质有关。 展开更多
关键词 牛蒡子 木脂素 大孔树脂 解热 镇痛
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广西猪繁殖与呼吸综合征病毒感染情况调查及其欧洲型毒株ORF5基因变异分析 被引量：2
2
作者 赵硕 段群棚 +12 位作者 何颖 卢冰霞 许心婷 秦毅斌 李斌 全琛宇 梁家幸 周英宁 蒋冬福 陈婷婷 卢敬专 陈忠伟 赵武 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第5期135-144,共10页
为了解广西近期猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染情况及其欧洲型PRRSVORF5的遗传变异特点,2020年6月至2021年5月,采集广西14个设区市疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪病料、血清共782份,进行PRRSV的qRT-PCR分型检测及ORF5基因扩增... 为了解广西近期猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染情况及其欧洲型PRRSVORF5的遗传变异特点,2020年6月至2021年5月,采集广西14个设区市疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪病料、血清共782份,进行PRRSV的qRT-PCR分型检测及ORF5基因扩增,并运用SPSS23.0、DNAStar、MEGA X等生物学软件对检测结果及获得的PRRSVORF5基因序列进行分析。结果显示:样品检测总阳性率为29.54%,其中欧洲型(PRRSV-1)PRRSV阳性率为6.78%,美洲型(PRRSV-2)PRRSV阳性率为22.76%,表明受检猪群普遍存在PRRSV感染;在不同设区市中,贵港、崇左感染率最高(50.00%);在不同季度中,冬季感染率最高(41.00%);在不同年龄阶段猪群中,保育猪感染率最高(53.42%);感染主要以PRRSV-2为主,新发PRRSV-1感染;广西新发PRRSV-1在ORF5基因上存在相同独特的核苷酸及氨基酸变异特点,与中国香港分离欧洲株HKEU16亲缘关系较近,可能是在引种等贸易过程中所引进,并在饲养环境、免疫压力等多种因素的作用下发生了一定的变异;广西近期受检猪群普遍存在PRRSV-2感染,新出现PRRSV-1的感染,猪场应重视并及时调整、实施针对性的PRRS防控计划。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 感染情况 欧洲型 ORF5基因 遗传变异分析
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猪德尔塔冠状病毒N蛋白单克隆抗体2D7的制备与生物学特性鉴定 被引量：1
3
作者 张宁 赵平 +12 位作者 刘思雨 赵硕 陈忠伟 何颖 欧阳康 卢冰霞 蒋家霞 郭旋 林昌华 赵武 黄伟坚 秦毅斌 赵凌 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期115-125,共11页
为获得猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并鉴定其生物学特性,本研究利用RT-PCR方法扩增PDCoV-N基因,构建表达质粒,转化BL21感受态细胞获得重组大肠杆菌,诱导表达后... 为获得猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并鉴定其生物学特性,本研究利用RT-PCR方法扩增PDCoV-N基因,构建表达质粒,转化BL21感受态细胞获得重组大肠杆菌,诱导表达后获得PDCoV-N重组蛋白,将其进行纯化后再免疫小鼠,制备针对PDCoV-N蛋白的mAb,并进行了抗体的效价测定、免疫荧光(IFA)、Western blot、亚类的鉴定、mAb特异性的鉴定。结果,成功构建pColdⅡ-PDCoV-N重组原核表达质粒,SDS-PAGE显示重组N蛋白成功表达,分子质量约为38 kDa;经小鼠免疫、细胞融合、亚克隆筛选获得1株分泌PDCoV-N蛋白抗体的阳性杂交瘤细胞株;制备的腹水经间接ELISA方法测定抗体的效价为2.048×10^(6)。IFA、Western blot试验表明该mAb可以与PDCoV-N蛋白及全病毒特异性结合,亚类鉴定其亚型为IgG1,轻链为κ链。该mAb只与PDCoV反应,而与其他猪肠道病毒无交叉反应,表明本研究制备的mAb具有良好的特异性。本研究成功制备了PDCoV-N蛋白的mAb,为进一步研究PDCoV的生物学特性和诊断试剂的开发提供技术支持。 展开更多
关键词 猪德尔塔冠状病毒 N蛋白 单克隆抗体
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H1亚型禽流感病毒RT-RPA-LFD快速检测方法的建立及应用 被引量：2
4
作者 曾婷婷 李孟 +9 位作者 谢芝勋 李丹 谢丽基 罗思思 张民秀 王盛 谢志勤 范晴 阮志华 粟永春 《江西农业学报》 CAS 2024年第3期61-66,共6页
以H1亚型AIV的HA基因为研究对象,采用重组聚合酶核酸等温扩增技术(RPA),通过RT-PCR方法优选出1套引物,进而优化体系的反应温度、最佳探针及引物浓度,使用优化后的最佳反应体系进行敏感性及特异性试验,并探索该方法能达到的最短反应时间... 以H1亚型AIV的HA基因为研究对象,采用重组聚合酶核酸等温扩增技术(RPA),通过RT-PCR方法优选出1套引物,进而优化体系的反应温度、最佳探针及引物浓度,使用优化后的最佳反应体系进行敏感性及特异性试验,并探索该方法能达到的最短反应时间,利用侧向流动免疫(LFD)试纸条观测反应后的结果,最终建立检测H1亚型AIV的RT-RPA-LFD快速检测方法。结果表明:建立的RT-RPA-LFD快速检测方法在探针工作浓度为0.14 mmol/L,37℃条件下反应20 min,可最低检测到1.5×10^(2)copies/反应的H1亚型AIV RNA,其他常见家禽病原体未见阳性反应。该方法与RT-PCR及鸡胚分离鉴定测序结果完全一致,可满足H1亚型AIV临床快速鉴别诊断的需求,为基层兽医现场快速检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 H1亚型AIV 等温扩增技术 快速检测 RT-RPA-LFD
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阿卡斑病毒抗体双抗原夹心化学发光酶免疫分析法的建立
5
作者 陈赫威 杨清 +8 位作者 曹佳媛 韦珊珊 陆晨阳 林俊 覃绍敏 陈凤莲 吴健敏 陈樱 马玲 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期89-96,共8页
阿卡斑病毒(AKAV)是一种主要感染牛羊的虫媒病毒,近年来在我国流行日趋复杂。为了建立一种更加灵敏、可以同时检测多种动物AKAV抗体的方法,本研究以重组AKAV N蛋白和HRP标记的重组AKAV N蛋白分别为捕获抗原和检测抗原,通过优化反应条件... 阿卡斑病毒(AKAV)是一种主要感染牛羊的虫媒病毒,近年来在我国流行日趋复杂。为了建立一种更加灵敏、可以同时检测多种动物AKAV抗体的方法,本研究以重组AKAV N蛋白和HRP标记的重组AKAV N蛋白分别为捕获抗原和检测抗原,通过优化反应条件,首次成功建立检测AKAV抗体的双抗原夹心化学发光酶免疫分析法。该方法与蓝舌病毒、鹿流行性出血热病毒、牛肠道病毒和猪伪狂犬病毒阳性血清均无交叉反应;批内、批间重复性试验变异系数均小于8%,重复性好;与AKAV阻断ELISA试剂盒相比,敏感性高32倍,检测时间缩短42 min,检测结果κ系数为0.826,符合率极高;通过中和试验验证其准确性高。本研究建立的AKAV抗体检测化学发光酶免疫分析法特异性强、敏感性高、重复性好、简便、快速、准确,为AKAV大规模样品监测、血清学调查、疫病防控提供有效的技术手段。 展开更多
关键词 阿卡斑病毒 N蛋白 双抗原夹心CLEIA
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3株芽孢杆菌的鉴定及其安全性和益生特性分析
6
作者 韦珏 许力士 +9 位作者 吴健敏 秦树英 杨丽华 覃绍敏 朱鹏 陈凤莲 韦珊珊 林俊 杨磊 刘金凤 《中国酿造》 北大核心 2025年第2期177-184,共8页
为研究3株分离筛选芽孢杆菌(编号分别为V1、V2、V5)的安全性及其益生特性,通过菌株形态学观察及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,采用K-B药敏纸片扩散法和聚合酶链式反应(PCR)法对其进行药物敏感性和耐药基因检测,并对3株芽孢杆菌进行... 为研究3株分离筛选芽孢杆菌(编号分别为V1、V2、V5)的安全性及其益生特性,通过菌株形态学观察及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,采用K-B药敏纸片扩散法和聚合酶链式反应(PCR)法对其进行药物敏感性和耐药基因检测,并对3株芽孢杆菌进行耐热性、抑菌及产酶活性分析。结果表明,菌株V1、V2被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),菌株V5被鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。3株菌对多种抗生素药物敏感,除菌株V5检测到femA、tetA耐药基因外,菌株V1、V2未检出耐药基因。3株菌均可耐受温度60℃。3株芽孢杆菌对猪霍乱沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O139和大肠杆菌K88均有抑菌作用。3株芽孢杆菌均可产纤维素酶及蛋白酶,菌株V1、V2在96 h、菌株V5在60 h获得最大纤维素酶活,分别为101 U/mL、92.29 U/mL、82.87 U/mL。3株菌分别在48 h、36 h、72 h蛋白酶活最大,分别为75.37 U/mL、78.83 U/mL和15.38 U/mL。研究表明3株芽孢杆菌相对安全,具有较强的耐热、抑菌及产酶等特性。 展开更多
关键词 芽孢杆菌 鉴定 安全性 益生特性
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基于网络药理学和分子对接探究黄连解毒散治疗猪传染性胃肠炎的作用机制 被引量：19
7
作者 银慧慧 颜国庆 +2 位作者 赵武 曾雪颜 刘伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期147-158,共12页
为探究黄连解毒散(HLJDS)治疗猪传染性胃肠炎(TGE)的作用靶点及作用机制,本研究通过中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)检索HLJDS中的所有化学成分,以口服生物利用度(OB≥30%)、类药性(DL≥0.18)为条件筛选HLJDS的活性化合物及HLJD... 为探究黄连解毒散(HLJDS)治疗猪传染性胃肠炎(TGE)的作用靶点及作用机制,本研究通过中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)检索HLJDS中的所有化学成分,以口服生物利用度(OB≥30%)、类药性(DL≥0.18)为条件筛选HLJDS的活性化合物及HLJDS活性化合物潜在靶点的数量和名称。利用Gene cards数据库和CTD数据库检索与筛选TGE的相关靶点和HLJDS作用于TGE的相关靶点。采用微生信在线Venn图制作工具分析HLJDS活性化合物和TGE的共同靶点。将上述数据采用Cytoscape 3.9.1软件构建中药-活性化合物-靶点的网络,其中度值>32的化合物可能是关键的化合物或者作用靶点。将HLJDS作用于TGE的相关靶点上传至STRING数据库,获得HLJDS作用于TGE的PPI网络。利用Cytoscape软件中的相关工具分析靶点的网络拓扑学参数,并通过这些参数筛选HLJDS作用于TGE的关键靶点。结果显示,从HLJDS共筛选到77个活性成分和825个药物作用靶点,并筛选到950个TGE相关靶点,其中HLJDS的活性成分与TGE交集的靶点有202个。中药-活性化合物-靶点的网络图结果显示,HLJDS通过77个有效活性化合物作用于202个HLJDS与TGE交集的靶点。PPI网络分析结果显示,肿瘤坏死因子(TNF)、表皮生长因子受体(EGFR)、一氧化氮合酶3 (NOS3)、Toll样受体4 (TLR4)与信号转导和转录活化因子3(STAT3)等31个靶点可能是HLJDS治疗TGE的关键靶点。通过DAVID数据库对HLJDS作用于TGE的相关靶点进行GO功能分析和KEGG信号通路富集分析。采用Auto Dock Vina 1.1.2将HLJDS度值前6的主要活性化合物PPI网络中前6的关键靶点进行分子对接并获得结合能。将度值前15的HLJDS活性化合物和关键靶点TLR4、TNF-α进行分子对接,通过结合能预测HLJDS活性化合物及对照化合物(姜黄素和维A酸)与TLR4、TNF-α的分子对接效果。GO功能和KEGG信号通路分析结果显示,HLJDS作用于TGE的相关靶点涉及生物过程333个、细胞组分51个、分子功能88个主要功能;涉及AGE-RAGE信号通路、PI3K-Akt信号通路和沙门氏菌感染等与TGE相关的信号通路。分子对接结果显示,HLJDS 6个主要活性化合物与6个关键核心靶点均能够自发结合。且相较于对照化合物姜黄素和维A酸,HLJDS中的黄藤素、黄连素、黄芩素和槲皮素等14个活性化合物与TLR4、TNF-α的结合能更低,结合效果更好。上述结果表明,HLJDS可通过多成分、多靶点、多信号通路作用于TGE的相关靶点,发挥治疗TGE的作用。本研究为HLJDS的进一步开发与应用提供研究基础与方向。 展开更多
关键词 黄连解毒散 猪传染性胃肠炎 网络药理学 作用机制 分子对接
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鸽Ⅰ型副黏病毒、圆环病毒和疱疹病毒混合感染的诊断 被引量：4
8
作者 黄运福 颜国庆 +5 位作者 梁海皇 银慧慧 赵武 曾雪颜 兰天艳 刘伟 《现代畜牧兽医》 2024年第3期59-63,共5页
研究旨在确诊广西某肉鸽场中出现神经症状的病鸽并为该场提供相应的防治方案,通过临床诊断、病理解剖、分子生物学检测、细菌分离、病毒分离等方法对广西某肉鸽场病鸽进行诊断。结果显示,剖检可见病鸽肝脾肿大、坏死,花斑肾;分子生物学... 研究旨在确诊广西某肉鸽场中出现神经症状的病鸽并为该场提供相应的防治方案,通过临床诊断、病理解剖、分子生物学检测、细菌分离、病毒分离等方法对广西某肉鸽场病鸽进行诊断。结果显示,剖检可见病鸽肝脾肿大、坏死,花斑肾;分子生物学检测结果显示,鸽Ⅰ型副黏病毒(pigeon paramyxovirus type 1,PPMV-1)、圆环病毒(pigeon circovirus,PiCV)和疱疹病毒(pigeon herpesvirus,PiHV)为阳性;对病样进行细菌培养,结果未分离到细菌;将病样接种SPF鸡胚进行病毒分离,结果显示,尿囊液血凝效价稳定在8 log2,其血凝性可被新城疫病毒(NDV)阳性血清抑制,但不能被禽流感病毒(AIV)阳性血清抑制。研究表明,最终诊断结果为PPMV-1、PiCV和PiHV混合感染。 展开更多
关键词 鸽Ⅰ型副黏病毒 鸽圆环病毒 鸽疱疹病毒
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鸡细小病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及应用 被引量：2
9
作者 张艳芳 谢芝勋 +7 位作者 谢志勤 张民秀 曾婷婷 邓显文 谢丽基 罗思思 黄娇玲 李孟 《动物医学进展》 北大核心 2023年第4期25-30,共6页
旨在建立一种可定量检测鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)新型检测方法。引物设计参考了GenBank中ChPV的NS基因保守序列,筛选了特异性探针引物组,采用不同探针引物浓度组合和退火温度... 旨在建立一种可定量检测鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)新型检测方法。引物设计参考了GenBank中ChPV的NS基因保守序列,筛选了特异性探针引物组,采用不同探针引物浓度组合和退火温度梯度对反应条件进行优化,并通过使用该方法与荧光定量PCR(qPCR)和普通PCR方法进行灵敏度比较,同时对其他常见禽病病原体进行检测,以及对40份临床样品进行检测,评估了该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示,该方法最佳引物浓度均为900 nmol/L,最佳探针浓度为600 nmol/L;最佳退火温度为54.0℃;灵敏度比qPCR和普通PCR分别高10倍和1000倍,最低检测限为4.5 copies/μL;对其他常见禽病病原体进行ChPV微滴式数字PCR检测,结果均为阴性;批内和批间重复性较好,变异系数小。结果表明,所建立的ddPCR方法具有更高的敏感性和准确性,可成功用于快速定量检测ChPV感染。 展开更多
关键词 鸡细小病毒 微滴式数字PCR 敏感性 特异性
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