广西猪流产胎儿溶血葡萄球菌的分离鉴定及其16S rDNA基因系统进化分析 被引量：1

1

作者 卢冰霞 周英宁 +8 位作者 段群棚 何颖 陈忠伟 梁家幸 秦毅斌 许心婷 全琛宇 赵硕 赵武 《养猪》 2021年第1期91-94,共4页

为了查清引起母猪流产的原因,从送检流产胎儿的内脏组织中分离培养细菌,对分离菌株进行革兰氏染色镜检、药敏试验、生化试验、16S rDNA基因序列测定、同源性分析及系统进化树构建。结果表明,分离菌株为革兰氏阳性球菌,其生长特性、菌落... 为了查清引起母猪流产的原因,从送检流产胎儿的内脏组织中分离培养细菌,对分离菌株进行革兰氏染色镜检、药敏试验、生化试验、16S rDNA基因序列测定、同源性分析及系统进化树构建。结果表明,分离菌株为革兰氏阳性球菌,其生长特性、菌落特征、生化试验鉴定结果基本符合《常见细菌系统鉴定手册》中溶血葡萄球菌的生化特性;但在血琼脂培养基上并未出现溶血现象。药敏试验结果表明,分离菌株仅对新生霉素、利福平和米诺环素敏感,对青霉素类、头孢类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等药物严重耐药。分离菌株16S rDNA基因与12株不同来源的溶血葡萄球菌同源性在99.8%~99.9%之间,与溶血葡萄球菌MER TA39菌株(KT719446.1)遗传进化距离最相近。小鼠致病性试验表明,分离菌株能导致小鼠出现行动迟缓、扎堆和被毛燥乱等临床症状,并能从小鼠体内分离出相同形态特征和菌体特征的菌株。表明从猪流产胎儿体内分离到的菌株是存在多重耐药性的γ-溶血葡萄球菌。 展开更多

关键词 溶血葡萄球菌 分离鉴定 16S rDNA 同源性分析

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H9亚型禽流感病毒M1蛋白原核表达及免疫效果初步研究

2

作者 李小凤 谢芝勋 +11 位作者 阮志华 李孟 李丹 张民秀 谢志勤 罗思思 韦悠 谢丽基 曾婷婷 张艳芳 黄娇玲 王盛 《动物医学进展》 北大核心 2024年第6期1-6,共6页

旨在原核表达H9亚型禽流感病毒(AIV)M1蛋白,初步探究其免疫效果,为研制AIV疫苗奠定基础。通过构建重组质粒pET-32a-M1,诱导表达,Western blot验证蛋白表达情况,将重组蛋白免疫接种小鼠,通过测定血清中IgG抗体效价,脾细胞培养上清多细胞... 旨在原核表达H9亚型禽流感病毒(AIV)M1蛋白,初步探究其免疫效果,为研制AIV疫苗奠定基础。通过构建重组质粒pET-32a-M1,诱导表达,Western blot验证蛋白表达情况,将重组蛋白免疫接种小鼠,通过测定血清中IgG抗体效价,脾细胞培养上清多细胞因子分泌情况评价其免疫效果。结果显示,M1重组蛋白主要以可溶性蛋白存在,Western blot结果可见特异性条带。免疫接种小鼠后,血清产生IgG抗体,抗体效价为1∶30000。小鼠脾细胞上清液IL-2、IL-4、IL-6与对照组相比较,含量显著增加(P<0.01),而抑制IL-1β、IL-5、IL-13、IL-12p70、IL-18、GM-CMF、IFN-γ、TNF-α分泌。结果表明,M1重组蛋白免疫原性良好,刺激机体产生体液免疫和细胞免疫,为禽流感疫苗深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感 M1蛋白 原核表达 免疫效果

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嗜水气单胞菌Hcp蛋白的原核表达·多克隆抗体制备及生物信息学分析

3

作者 许艺兰 许佳乐 +8 位作者 卢冰霞 陈婷婷 秦毅斌 刘思雨 全琛宇 许心婷 赵硕 陈忠伟 何颖 《安徽农业科学》 CAS 2024年第23期79-84,共6页

[目的]获得嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,AH)Hcp蛋白的多克隆抗体(Polyclonal Antibody)及基本生物学特性。[方法]利用RT-PCR方法扩增Hcp基因,构建重组表达质粒后转化BL21感受态细胞,经IPTG(异丙基硫代半乳糖苷,Isopropylβ-D-Thi... [目的]获得嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,AH)Hcp蛋白的多克隆抗体(Polyclonal Antibody)及基本生物学特性。[方法]利用RT-PCR方法扩增Hcp基因,构建重组表达质粒后转化BL21感受态细胞,经IPTG(异丙基硫代半乳糖苷,Isopropylβ-D-Thiogalactoside)诱导表达获得Hcp重组蛋白,纯化后免疫家兔,制备针对该蛋白的多克隆抗体,进行抗体的效价测定、Western blotting鉴定,利用生物信息学在线工具对其基本理化性质、保守结构域、磷酸化位点、二级与三级结构进行预测。[结果]该蛋白在IPTG终浓度为0.6 mmol/L、37℃下诱导表达6 h可获得最高表达量,蛋白主要以可溶性蛋白的形式存在;Western blotting结果显示,AH的培养物上清与沉淀均能够与制备的兔抗发生特异性结合,具有良好的反应原性,制备的多克隆抗体效价达1.024×10^(6)。生物信息学分析表明,嗜水气单胞菌Hcp蛋白的分子式为C_(846)H_(1304)N_(224)O_(259)S_(8),共编码172个氨基酸,相对分子质量为19013.49 u,等电点(PL)为5.24,属于稳定蛋白;二级结构中无规则卷曲占比为51.74%,延伸链占比为25.00%,α-螺旋占比为19.19%,β-转角占比为4.07%。[结论]成功制备了Hcp蛋白的多克隆抗体,为进一步研究AH的VI型分泌系统(Type VI secretion system,T6SS)提供技术支持。 展开更多

关键词 嗜水气单胞菌 Hcp基因 原核表达 多克隆抗体制备 生物信息学

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饲料添加中药药渣对肉鸽生长性能的影响

4

作者 蓝庆同 刘金花 +3 位作者 李晓霞 傅静 马家宝 谢志勤 《中南农业科技》 2025年第1期265-267,共3页

选取同日孵化、体重相近的14日龄健康肉鸽120只,在基础日粮中分别添加0、0.5%、1.0%、2.0%的中药(芪麦口服液)药渣,试验期14 d,探讨不同水平的中药药渣添加剂对肉鸽生长性能的影响,并评价中药药渣添加剂的效果和最佳添加量。结果表明,... 选取同日孵化、体重相近的14日龄健康肉鸽120只,在基础日粮中分别添加0、0.5%、1.0%、2.0%的中药(芪麦口服液)药渣,试验期14 d,探讨不同水平的中药药渣添加剂对肉鸽生长性能的影响,并评价中药药渣添加剂的效果和最佳添加量。结果表明,与对照相比,添加0.5%、1.0%、2.0%中药药渣处理的肉鸽平均日增重差异均不显著,但平均日采食量均显著减少,各处理间差异不显著;添加1.0%中药药渣的料重比显著降低,各处理间差异不显著;添加0.5%、1.0%、2.0%中药药渣处理的肉鸽翅羽长均显著伸长,添加1.0%中药药渣的翅羽宽增宽显著;添加0.5%、1.0%、2.0%中药药渣处理的肉鸽粗蛋白消化率均显著增强,添加2.0%中药药渣的肉鸽粗脂肪消化率显著增强,添加0.5%、1.0%中药药渣的肉鸽粗灰分消化率均显著增强。说明在基础日粮中添加1.0%中药药渣可提高肉鸽的生长性能及对营养物质的消化率,降低料重比,实现资源可持续利用、低成本健康生态养殖。 展开更多

关键词 肉鸽 饲料 中药药渣 生长性能

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鸽源大肠杆菌的分离鉴定·耐药性及致病性分析

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作者 黄运福 颜国庆 +8 位作者 唐作顺 兰天艳 曾雪颜 银慧慧 赵武 姜源明 俸祥仁 刘伟 彭婷 《安徽农业科学》 2025年第8期70-75,共6页

[目的]为肉鸽养殖中大肠杆菌病的防控和临床用药提供参考。[方法]通过细菌分离鉴定、药敏试验、动物致病性试验以及耐药基因和毒力基因检测对分离菌株进行分析。[结果]分别从病死鸽肝脏组织、腹泻鸽肛拭子和死胚鸽蛋中各分离到1株大肠杆... [目的]为肉鸽养殖中大肠杆菌病的防控和临床用药提供参考。[方法]通过细菌分离鉴定、药敏试验、动物致病性试验以及耐药基因和毒力基因检测对分离菌株进行分析。[结果]分别从病死鸽肝脏组织、腹泻鸽肛拭子和死胚鸽蛋中各分离到1株大肠杆菌,分别命名为E.coli-SW、E.coli-FX、E.coli-SP;3株大肠杆菌对头孢他啶、头孢曲松、阿米卡星敏感,对其他15种药物耐药,能检测到TEM、aacC2、aacC4、qnrA、sul1、sul2、floR和tetA耐药基因;3株大肠杆菌均能致死小鼠,E.coli-SW和E.coli-FX检测到fyuA和irp2毒力基因,而E.coli-SP未检测到毒力基因。[结论]分离的3株大肠杆菌具有多重耐药性和一定的致病性,可为当地鸽源大肠杆菌病的防治和研究提供参考。 展开更多

关键词 鸽 大肠杆菌 分离鉴定 耐药性 致病性

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一株鸡源植物乳杆菌的分离鉴定及体外抑菌特性研究 被引量：3

6

作者 尹杨燕 廖玉英 +8 位作者 李军 钟舒红 李小宁 李常挺 王乐平 彭红艳 石艳 韦天超 彭昊 《广西畜牧兽医》 2021年第5期202-204,共3页

抗生素耐药性严重威胁着人类和动物的健康,为在畜禽中寻找更经济、可持续、安全的非抗生素饲料添加剂。本试验以健康雏鸡粪便为试验材料,对粪便中的细菌进行分离鉴定并以特定致病菌(大肠杆菌、沙门氏菌)为指示菌,研究其体外抑菌特性。... 抗生素耐药性严重威胁着人类和动物的健康,为在畜禽中寻找更经济、可持续、安全的非抗生素饲料添加剂。本试验以健康雏鸡粪便为试验材料,对粪便中的细菌进行分离鉴定并以特定致病菌(大肠杆菌、沙门氏菌)为指示菌,研究其体外抑菌特性。结果表明,试验从健康雏鸡粪便中分离鉴定出一株植物乳杆菌,编号为GX 20200417-1。分离获得的菌株再通过早期定植试验发现该菌作为先接种培养菌或与致病菌(大肠杆菌和沙门氏菌)同时接种培养时,均对致病菌都有明显的抑制作用,具有用于研制益生菌制剂的潜力。 展开更多

关键词 植物乳秆菌 分离鉴定 体外抑菌试验 益生菌

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一株仔猪源枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其益生特性研究 被引量：10

7

作者 卢冰霞 周英宁 +9 位作者 梁家幸 秦毅斌 陈忠伟 何颖 赵硕 蒋冬福 李斌 段群棚 刘磊 赵武 《养猪》 2020年第3期9-13,共5页

为了筛选优质猪源益生菌菌种资源,为畜禽微生态制剂的研究与开发提供优质候选菌株,试验以健康仔猪新鲜粪便为分离材料,通过高温处理分离芽孢杆菌,并对其进行形态特征、生化及分子生物学鉴定与益生特性研究。结果表明:从健康仔猪新鲜粪... 为了筛选优质猪源益生菌菌种资源,为畜禽微生态制剂的研究与开发提供优质候选菌株,试验以健康仔猪新鲜粪便为分离材料,通过高温处理分离芽孢杆菌,并对其进行形态特征、生化及分子生物学鉴定与益生特性研究。结果表明:从健康仔猪新鲜粪便中分离获得多株细菌,选取其中1株生长快速、形态特征典型的菌株进行鉴定,确定该分离菌为枯草芽孢杆菌。益生特性研究表明,该分离菌菌株具有较强的耐热、耐酸、耐胆盐等益生特性,同时具有一定的拮抗致病菌作用,对大部分抗生素敏感,对小鼠无毒副作用,可作为畜禽微生态制剂菌种的候选菌株。 展开更多

关键词 仔猪 益生菌 枯草芽孢杆菌 分离 鉴定

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不同植物来源单宁和没食子酸对常见致病菌的体外抑菌效果研究 被引量：6

8

作者 刘青 彭红艳 +14 位作者 马春霞 钟舒红 李军 李常挺 白慧丽 石艳 尹杨燕 王乐平 李凤生 刘朝干 任浪涛 郭青海 董胜美 彭昊 廖玉英 《中国畜禽种业》 2022年第9期37-42,共6页

为了解不同植物来源单宁对危害水产畜牧业的主要致病菌(大肠杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌)的抑菌效果。采用体外共培养的方法,通过分析不同来源植物单宁和没食子酸对4种常见致病菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,来探... 为了解不同植物来源单宁对危害水产畜牧业的主要致病菌(大肠杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌)的抑菌效果。采用体外共培养的方法,通过分析不同来源植物单宁和没食子酸对4种常见致病菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,来探讨单宁和没食子酸对致病菌的体外抑菌作用的影响。结果显示,与水解单宁(塔拉、栗木、五倍子、橡椀)和缩合单宁(白坚木、荆树皮)相比,没食子酸对大肠杆菌、沙门氏菌和产气荚膜梭菌具有极强的抑菌作用,但是对于金黄色葡萄球菌没有抑菌作用。其余不同植物来源的单宁对4株致病菌均有抑菌效果,对大肠杆菌抑菌效果最好,对产气荚膜梭菌抑菌效果较弱,并且抑菌效果随着单宁浓度升高而增加。塔拉单宁对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌抑菌效果最好,最小抑菌浓度为16mg/mL,对产气荚膜梭菌最小抑菌浓度为64mg/mL。白坚木单宁对致病菌抑菌效果最差,对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度为64mg/mL,对产气荚膜梭菌最小抑菌浓度达到128mg/mL。说明不同植物来源的单宁抑菌效果存在明显差异,塔拉单宁对常见致病菌均有较好的抑菌效果,在水产畜牧业上拥有非常大的潜力和市场前景。 展开更多

关键词 单宁 塔拉 常见致病菌 体外共培养 抑菌效果

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猪肺炎支原体和猪鼻支原体TaqMan双重荧光PCR检测方法的建立及应用 被引量：1

9

作者 周颖 赵硕 +10 位作者 覃国喜 梁龙华 肖婷 陈忠伟 卢冰霞 秦毅斌 林昌华 张胜斌 段群棚 胡庭俊 何颖 《动物医学进展》 北大核心 2024年第2期11-16,共6页

为建立一种可快捷鉴别检测猪肺炎支原体(Mhp)和猪鼻支原体(Mhr)的方法,针对Mhp的183基因和Mhr的p37基因保守片段,分别设计合成引物及TaqMan探针,优化反应条件,建立一种可同时检测Mhp和Mhr的TaqMan双重荧光PCR方法,并评价其特异性、敏感... 为建立一种可快捷鉴别检测猪肺炎支原体(Mhp)和猪鼻支原体(Mhr)的方法,针对Mhp的183基因和Mhr的p37基因保守片段,分别设计合成引物及TaqMan探针,优化反应条件,建立一种可同时检测Mhp和Mhr的TaqMan双重荧光PCR方法,并评价其特异性、敏感性和重复性。结果表明,该方法特异性强,检测其他常见猪呼吸系统病原不发生交叉反应;对标准品pMD18-T-Mhp-183、pMD18-T-Mhr-P37的最低检测限分别达45.2 copies/μL和29.7 copies/μL,比普通PCR检测灵敏度提高10^(3)~10^(4)倍;该方法检测结果的批内与批间变异系数均小于2%。用该方法检测145份广西自治区内临床样品,从中检出82份Mhp和9份Mhr阳性样品。该方法可用于临床样品快速检测及实验室Mhp和Mhr的鉴定,可为Mhp和Mhr在猪群中的早期监测提供技术支持。 展开更多

关键词 猪肺炎支原体 猪鼻支原体 TaqMan荧光定量PCR

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H9N2亚型禽流感病毒M2e蛋白在原核系统中的表达 被引量：1

10

作者 张民秀 谢芝勋 +6 位作者 黄莉 谢志勤 刘加波 谢丽基 邓显文 罗思思 黄娇玲 《动物医学进展》 北大核心 2017年第4期7-12,共6页

以含有全长H9N2亚型AIV M2基因的质粒为模板,经PCR扩增得到M2e基因;利用BglⅡ和BamHⅠ之间互为同尾酶关系,构建顺次连接的多拷贝体M2e,并连接入原核表达载体pGEX-6p-1,构成2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重组... 以含有全长H9N2亚型AIV M2基因的质粒为模板,经PCR扩增得到M2e基因;利用BglⅡ和BamHⅠ之间互为同尾酶关系,构建顺次连接的多拷贝体M2e,并连接入原核表达载体pGEX-6p-1,构成2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重组质粒,并转化至表达宿主菌中;将测序正确的菌液经不同浓度IPTG进行诱导,SDS-PAGE电泳鉴定重组蛋白大小,对蛋白进行可溶性分析;利用Western blot分析5种重组蛋白的反应原性。结果显示,在37℃下,2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重组蛋白分别经终浓度为0.25、0.25、0.5、0.25、0.75mmol/L的IPTG诱导4h时,表达量最高;2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重组蛋白大小分别为31.7、37.2、42.7、48.2、53.9ku;对重组蛋白进行可溶性分析显示,5种重组蛋白均以包涵体形式存在;Western blot分析显示,2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2epGEX重组蛋白与鼠抗GST标签的单克隆抗体具有良好的特异性反应,为后期进一步获得高免疫原性蛋白和筛选具有通用免疫原性的重组蛋白奠定基础。 展开更多

关键词 H9N2亚型禽流感病毒 M2蛋白胞外区(M2e)蛋白 重组蛋白

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H5亚型和N6亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测方法的建立 被引量：2

11

作者 何莹 谢芝勋 +8 位作者 罗思思 李孟 谢志勤 谢丽基 黄莉 邓显文 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 《动物医学进展》 北大核心 2017年第3期1-4,共4页

为了建立一种快速、简便的H5亚型、N6亚型禽流感病毒(AIV)的检测方法,根据GenBank中H5亚型、N6亚型AIV的HA和NA基因保守序列,分别设计了2对特异性引物,通过优化条件,建立了H5亚型和N6亚型AIV二重RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,该... 为了建立一种快速、简便的H5亚型、N6亚型禽流感病毒(AIV)的检测方法,根据GenBank中H5亚型、N6亚型AIV的HA和NA基因保守序列,分别设计了2对特异性引物,通过优化条件,建立了H5亚型和N6亚型AIV二重RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方法对H5N6亚型AIV特异性扩增出418bp和251bp目的片段,对H5Ny(y≠6)亚型AIV扩增出418bp目的片段,对HxN6(x≠5)亚型AIV扩增出251bp目的片段,对其他亚型和常见的禽病病原体均未扩增出目的片段;敏感性结果显示,该方法对H5亚型和N6亚型最低检测限为1.59×10-5ng/μL。本研究建立的H5亚型和N6亚型AIV检测方法,具有特异性强,灵敏度高的特点,为H5亚型和N6亚型AIV临床检测以及防控提供了有效方法。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H5亚型 N6亚型 二重逆转录-聚合酶链反应

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禽呼肠病毒在鸡胚成纤维细胞系中的增殖规律 被引量：3

12

作者 沈文康 谢芝勋 +10 位作者 王盛 黄莉 谢丽基 黄娇玲 曾婷婷 张艳芳 张民秀 罗思思 范晴 谢志勤 邓显文 《动物医学进展》 北大核心 2018年第1期30-33,共4页

为研究禽呼肠病毒(ARV)在鸡胚成纤维细胞(DF1)上的增殖规律,将ARV S1133株接种至DF1细胞,连续传代3次后观察细胞病变(CPE),RT-PCR检测病毒核酸。结果显示,ARV S1133株对DF1细胞有很好的亲嗜性,并出现典型的CPE。按照Reed-Meunch方法测量... 为研究禽呼肠病毒(ARV)在鸡胚成纤维细胞(DF1)上的增殖规律,将ARV S1133株接种至DF1细胞,连续传代3次后观察细胞病变(CPE),RT-PCR检测病毒核酸。结果显示,ARV S1133株对DF1细胞有很好的亲嗜性,并出现典型的CPE。按照Reed-Meunch方法测量7个时间点的TCID50,并绘制生长曲线。结果显示,ARV感染DF1细胞后的0h^12h为静止期,12h^48h为快速增长期,并在48h达到最大的病毒效价,TCID_(50)为10^(-8.9)/0.1mL,为进一步研究ARV的致病机理,以及在DF1上研制禽呼肠病毒细胞灭活苗提供参考。 展开更多

关键词 禽呼肠病毒 鸡胚成纤维细胞 病毒效价 一步生长曲线

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鸡滑液囊支原体和禽呼肠病毒的实时荧光定量PCR快速检测 被引量：12

13

作者 黄莉 谢芝勋 +6 位作者 王盛 邓显文 谢志勤 谢丽基 曾婷婷 黄娇玲 张艳芳 《动物医学进展》 北大核心 2018年第2期1-6,共6页

根据禽呼肠病毒σC和鸡滑液囊支原体vlhA基因的保守序列,分别设计了特异性引物和不同荧光基团标记的TaqMan探针,优化反应条件,建立能同时鉴别诊断鸡滑液囊支原体和禽呼肠病毒(ARV)的检测方法。结果表明,该方法能够特异地鉴别检测ARV和MS... 根据禽呼肠病毒σC和鸡滑液囊支原体vlhA基因的保守序列,分别设计了特异性引物和不同荧光基团标记的TaqMan探针,优化反应条件,建立能同时鉴别诊断鸡滑液囊支原体和禽呼肠病毒(ARV)的检测方法。结果表明,该方法能够特异地鉴别检测ARV和MS,与其他病原体无交叉反应,检测敏感性均可达到2×10拷贝数。此外,该方法抗干扰能力强,具有良好而稳定的准确性,临床样品检出率与传统检测方法相符。因此,该基于TaqMan探针建立的荧光定量PCR具有特异、灵敏、准确、实时、重复性好等优点,不仅可用于鸡群中这两种病原体的鉴别检测和疫病监测,也有利于这两种病原体感染的有效防控。 展开更多

关键词 荧光定量PCR TAQMAN 鸡滑液囊支原体 禽呼肠病毒

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牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：9

14

作者 谢志勤 谢芝勋 +10 位作者 范晴 张民秀 罗思思 张艳芳 曾婷婷 黄娇玲 王盛 谢丽基 邓显文 刘加波 庞耀珊 《动物医学进展》 北大核心 2019年第3期20-25,共6页

为建立基于TaqMan探针的双重荧光PCR技术检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,根据IBRV gB基因序列和BVDV 5′端非编码区序列的保守区域,分别设计1对IBRV的特异性引物和1条FAM标记的TaqMan探针,1对BVDV的特... 为建立基于TaqMan探针的双重荧光PCR技术检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,根据IBRV gB基因序列和BVDV 5′端非编码区序列的保守区域,分别设计1对IBRV的特异性引物和1条FAM标记的TaqMan探针,1对BVDV的特异性引物和1条ROX标记的TaqMan探针,建立双重荧光定量PCR检测IBRV和BVDV的方法。对建立的检测方法进行特异性和敏感性测定,并用临床样品进行检测验证。特异性试验结果显示,该方法检测参试的IBRV毒株,在波长530μm(FAM)时收集到特异性荧光信号曲线,检测参试的BVDV毒株,在610μm(ROX)时收集到特异性荧光信号曲线,无交叉信号出现,对照的毒株无论是在530μm(FAM),还是610μm(ROX)处,均无荧光信号曲线出现,方法的特异性好;敏感性试验结果显示,该双重荧光定量PCR可检测到100个拷贝的IBRV和BVDV质粒DNA模板;临床样品检测结果表明,对保存在-70℃的127份牛病料样品核酸进行检测,IBRV阳性12份,BVDV阳性26份,IBRV和BVDV同为阳性2份,为混合感染,检测的拷贝数分别为6.24×105和6.32×104拷贝/μL。阳性样品经序列比对分析,分别与IBRV和BVDV的序列100%同源。建立的双重实时荧光定量PCR方法检测IBRV和BVDV具有特异、敏感等优点,可用于临床样品的鉴别检测。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 牛病毒性腹泻病毒 双重荧光定量PCR TAQMAN探针 检测

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猪瘟病毒和猪圆环病毒2型二重荧光LAMP检测方法的建立 被引量：6

15

作者 谢志勤 张民秀 +11 位作者 谢芝勋 范晴 罗思思 谢丽基 黄娇玲 王盛 曾婷婷 张艳芳 李孟 李丹 邓显文 刘加波 《动物医学进展》 北大核心 2021年第3期1-6,共6页

建立二重荧光LAMP方法,检测猪瘟病毒(CSFV)和猪圆环病毒2型(PCV2)。根据CSFV E2基因和PCV2 ORF2基因序列保守区域,分别设计并合成了2组针对CSFV和PCV2序列的特异性引物和2条标记不同的荧光基团探针,在CSFV探针序列5′端标记FAM荧光基团,... 建立二重荧光LAMP方法,检测猪瘟病毒(CSFV)和猪圆环病毒2型(PCV2)。根据CSFV E2基因和PCV2 ORF2基因序列保守区域,分别设计并合成了2组针对CSFV和PCV2序列的特异性引物和2条标记不同的荧光基团探针,在CSFV探针序列5′端标记FAM荧光基团,3′端标记BHQ1淬灭基团,PCV2探针序列5′端标记CY5.5荧光基团,3′端标记BHQ2淬灭基团。以设计合成的引物、探针以及LAMP反应试剂建立二重荧光LAMP检测方法区分CSFV和PCV2,对该方法中的反应体系进行优化,并进行特异性、敏感性和干扰性测试以及临床样品验证测试。结果表明,建立的方法可鉴别CSFV和PCV2,特异性试验显示,该方法只检测出CSFV或PCV2,且与参试的对照病毒无交叉反应,特异性好。该方法最低检测CSFV或PCV2为100拷贝/μL,敏感性好。临床样品的检测结果与荧光定量PCR检测结果一致。建立的CSFV和PCV2二重荧光LAMP检测方法具有良好的特异性和敏感性,可适用于CSFV和PCV2的鉴别检测。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 二重荧光LAMP 检测

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鸡细小病毒和鸡新城疫病毒双重PCR检测方法的建立 被引量：1

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作者 奉彬 谢芝勋 +9 位作者 邓显文 张艳芳 谢丽基 谢志勤 范晴 曾婷婷 罗思思 黄娇玲 王盛 刘加波 《动物医学进展》 北大核心 2019年第10期1-5,共5页

旨在建立鸡细小病毒(ChPV)与鸡新城疫病毒(NDV)双重PCR检测方法,参考ChPV NS1基因和NDV F基因的保守区域,设计筛选、合成验证两对ChPV和NDV特异性引物,通过优化其反应体系,以及双重PCR的特异性、敏感性试验来评估建立的ChPV与NDV双重PC... 旨在建立鸡细小病毒(ChPV)与鸡新城疫病毒(NDV)双重PCR检测方法,参考ChPV NS1基因和NDV F基因的保守区域,设计筛选、合成验证两对ChPV和NDV特异性引物,通过优化其反应体系,以及双重PCR的特异性、敏感性试验来评估建立的ChPV与NDV双重PCR检测方法。结果表明,建立的双重PCR同时扩增出687 bp ChPV和453 bp NDV片段,对ChPV与NDV的敏感性分别达到64 fg和25 fg,但对其他对照组病原体均无扩增,对ChPV与NDV混合感染的临床病料的检测结果与各病毒单项PCR检测结果相符。说明建立的ChPV与NDV双重PCR检测方法可用于临床上两种病毒混合感染的快速诊断。 展开更多

关键词 鸡细小病毒 鸡新城疫病毒 双重PCR 特异性 敏感性

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一例牛魏氏梭菌病的临床诊断与防控 被引量：3

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作者 秦桢富 尹杨燕 +6 位作者 谭文宝 李常挺 班雪花 石艳 彭红艳 王乐平 彭昊 《广西畜牧兽医》 2023年第5期219-220,共2页

魏氏梭菌(Clostridium welchii),又称产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens),菌体呈直杆状,革兰氏染色阳性,不具运动性。芽胞大而圆,位于菌体中央或近端,大部分菌株能产生荚膜。广泛存在于自然界,同时也是入侵肠道的常见菌,在一定条件... 魏氏梭菌(Clostridium welchii),又称产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens),菌体呈直杆状,革兰氏染色阳性,不具运动性。芽胞大而圆,位于菌体中央或近端,大部分菌株能产生荚膜。广泛存在于自然界,同时也是入侵肠道的常见菌,在一定条件下具有致病性^([1])。牛魏氏梭菌病是由魏氏梭菌引起的一种急性传染病,是由A型产气荚膜梭菌引起的急性、致死率极高的动物疾病。多个年龄段均可发病,其中高产、怀孕牛易发,春、秋季节多发,死亡率可达70%~100%。 展开更多

关键词 魏氏梭菌病 A型产气荚膜梭菌 季节多发 动物疾病 急性传染病 革兰氏染色 致死率 常见菌

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南宁奶水牛乳房炎病原鉴定及分析

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作者 李凤生 吴翠兰 +11 位作者 李逸楠 李军 李常挺 李小宁 白慧丽 马春霞 钟舒红 陶立 兰美益 胡帅 禤雄标 彭昊 《广西畜牧兽医》 2023年第1期20-23,共4页

为了解南宁地区的奶水牛乳房炎致病菌感染情况和耐药情况,本研究通过采用细菌分离的方法和PCR的方法对15份奶样进行了肺炎克雷伯氏菌、沙门氏菌、多杀巴氏杆菌、牛支原体、溶血曼氏杆菌、化脓性隐秘杆菌和大肠杆菌的病原检测,并对菌株... 为了解南宁地区的奶水牛乳房炎致病菌感染情况和耐药情况,本研究通过采用细菌分离的方法和PCR的方法对15份奶样进行了肺炎克雷伯氏菌、沙门氏菌、多杀巴氏杆菌、牛支原体、溶血曼氏杆菌、化脓性隐秘杆菌和大肠杆菌的病原检测,并对菌株进行药物敏感性试验。结果显示,从15份样品中分离/扩增出15株肺炎克雷伯氏菌和1株大肠杆菌。药敏试验结果显示肺炎克雷伯氏菌对红霉素、链霉素、卡那霉素、庆大霉素、阿米卡星等5种药物低敏,对其余19种药物耐药。大肠杆菌对环丙沙星、左氟沙星等8种药物高敏,对大观霉素、诺氟沙星等7种药物中敏,对青霉素G等7种药物低敏,对万古霉素和四环素2种药物耐药。结果表明,采用细菌分离方法和PCR扩增法鉴定奶水牛乳房炎主要致病菌,两者的符合率为100%,这7种水牛乳房炎主要病原菌的PCR扩增法可作为快速诊断奶水牛乳房炎的手段。该场发生乳房炎的主要致病性病原是肺炎克雷伯氏菌,同时,分离株存在严重的耐药性,需规范、合理用药,减少抗生素的使用,并结合奶牛场实际情况采取预防及用药措施,有效遏制多重耐药性的产生,为奶水牛乳房炎的防治提供参考依据。 展开更多

关键词 奶水牛 乳房炎 病原分离 PCR 药敏试验 肺炎克雷伯氏菌

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一起羔羊感染肝片吸虫的病例报告

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作者 秦桢富 石艳 +4 位作者 李军 李常挺 谭奕舟 谭文宝 彭昊 《广西畜牧兽医》 2023年第5期223-224,共2页

肝片吸虫病是由于肝脏、胆管内寄生有肝片吸虫而导致急性或者慢性肝炎和胆管炎,并伴有营养障碍以及全身性中毒等症状。其可分为急性型和慢性型。急性型病羊主要症状是全身发热、身体乏力、行动迟缓、精神不佳。未及时得到有效治疗,会导... 肝片吸虫病是由于肝脏、胆管内寄生有肝片吸虫而导致急性或者慢性肝炎和胆管炎,并伴有营养障碍以及全身性中毒等症状。其可分为急性型和慢性型。急性型病羊主要症状是全身发热、身体乏力、行动迟缓、精神不佳。未及时得到有效治疗,会导致病羊发生严重贫血,黏膜变得苍白、失去光泽,体型消瘦,严重感染时会导致死亡^([1])。 展开更多

关键词 肝片吸虫 病例报告 营养障碍 慢性肝炎 急性型 羔羊 慢性型 内寄生

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