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RNAi沉默hTERT基因诱导大肠癌SW480细胞凋亡 被引量:5
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作者 蔡艳玲 罗小玲 +2 位作者 葛连英 刘爱群 谢裕安 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期46-50,共5页
目的:探讨RNA干扰人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的表达对大肠癌细胞SW480凋亡的影响。方法:构建携带hTERT小发夹干扰RNA(small hairpin RNA,shRNA)的重组表达载体pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA(简称hTER... 目的:探讨RNA干扰人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的表达对大肠癌细胞SW480凋亡的影响。方法:构建携带hTERT小发夹干扰RNA(small hairpin RNA,shRNA)的重组表达载体pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA(简称hTERT-shRNA质粒),脂质体法转染SW480细胞,RT-PCR法检测不同转染时间点SW480细胞中hTERTmRNA的表达。TRAP-PCR-ELISA法检测转染后48h SW480细胞的端粒酶活性,透射电镜观察转染后48h SW480细胞超微结构。结果:hTERT-shRNA质粒转染48h时,hTERT-shRNA组SW480细胞hTERT mRNA表达的抑制率显著高于空白组、脂质体组、NC-shRNA组(75.0%vs39.2%、33.3%、28.0%,P<0.05)。hTERT-shRNA转染组SW480细胞端粒酶活性显著低于空白组、脂质体组、NC-shRNA组(2.242±0.285vs2.756±0.089、2.693±0.225、2.691±0.120,P<0.05)。hTERT-shRNA质粒转染后的SW480细胞体积明显缩小、细胞核固缩、染色质不均匀地沿核膜下聚集、空泡形成增多,出现典型的凋亡形态。结论:RNAi可有效沉默SW480细胞中hTERT的表达,降低SW480细胞端粒酶活性,诱导SW480细胞凋亡。 展开更多
关键词 RNA干扰 大肠癌 HTERT 端粒酶 凋亡
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pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA对结直肠癌SW480细胞裸鼠移植瘤的抑制 被引量:1
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作者 蔡艳玲 罗小玲 +2 位作者 葛连英 刘爱群 谢裕安 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期72-76,共5页
目的:研究靶向hTERT基因的重组质粒pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA对人结直肠癌SW480细胞裸鼠移植瘤的治疗作用。方法:于裸鼠右侧腋下皮下注射人结直肠癌SW480细胞建立结直肠癌移植瘤动物模型,随机分为生理盐水组(NS组)、pGPU6/GFP/Neo-NC-s... 目的:研究靶向hTERT基因的重组质粒pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA对人结直肠癌SW480细胞裸鼠移植瘤的治疗作用。方法:于裸鼠右侧腋下皮下注射人结直肠癌SW480细胞建立结直肠癌移植瘤动物模型,随机分为生理盐水组(NS组)、pGPU6/GFP/Neo-NC-shRNA组(NC-shRNA组)和pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA组(hTERT-shRNA组),各组连续进行相应治疗6次后,观察肿瘤的生长状况,测量肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线,H-E染色观察肿瘤组织形态学变化,免疫组织化学法检测移植瘤组织中hTERT蛋白的表达,TUNEL法检肿瘤组织中细胞凋亡情况,RT-PCR法检测瘤组织中hTERT mR-NA的表达。结果:与NC-shRNA组和NS组比较,hTERT-shRNA组移植瘤体积增长速度减慢;hTERT-shRNA组移植瘤组织中见肿瘤细胞形态明显改变,凋亡细胞数明显增多[(36.30±5.05)%vs(5.25±1.06)%、(6.95±1.07)%,P<0.01];hTERT-shRNA组hTERT的mRNA和蛋白表达均明显受到抑制(171.42±30.94 vs 146.89±21.43、137.35±25.49,P<0.01;0.39±0.09 vs 0.81±0.335、0.750±0.206,P<0.05)。结论:重组质粒pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA通过下调hTERT mRNA和蛋白水平的表达促进肿瘤细胞的凋亡,抑制结直肠癌移植瘤的生长。 展开更多
关键词 RNA干扰 HTERT基因 结直肠癌 裸鼠 凋亡
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