目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]对体外培养的人肝癌细胞株生物学特性的影响,研究其作用效果与血红素氧合酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)及相关信号分子的关系,探讨其作用机制。方法:利用MTT法检...目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]对体外培养的人肝癌细胞株生物学特性的影响,研究其作用效果与血红素氧合酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)及相关信号分子的关系,探讨其作用机制。方法:利用MTT法检测EGCG对HepG2、Sk-hep1、SMMC7721等肝癌细胞增殖的影响,并用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染法观察肝癌细胞的形态学变化,流式细胞术检测EGCG作用后Sk-hep1细胞周期的变化,Real-time PCR和Western blotting法检测EGCG作用后Sk-hep1细胞中HO-1、IL-10及TNF-α等信号分子表达的变化。结果:EGCG作用后,3株肝癌细胞贴壁细胞数量显著少于对照组,凋亡细胞数增多[HepG2:(16.33±3.51)vs(3.67±1.15)个,P<0.01),Sk-hep1:(18.33±2.31)vs(2.33±2.08)个,P<0.01),SMMC7721:(15.33±3.06)vs(3.33±2.08)个,P<0.01)]。实验组Sk-hep1细胞G2/M期比例明显高于对照组[(34.33±8.09)%vs(3.07±2.32)%,P<0.01]。设对照组基准值为1.00,实验组Sk-hep1细胞中HO-1、IL-10、及TNF-α的mRNA相对表达水平依次为(0.58±0.15)、(5.91±1.11)、(5.29±1.14),差别均有统计学意义(P<0.01);与对照组相比,实验组HO-1蛋白表达水平明显下调(0.16±0.04 vs 0.33±0.08,P<0.05),IL-10(0.42±0.06 vs 0.24±0.08,P=0.034,P<0.05)和TNF-α蛋白(0.95±0.17 vs 0.58±0.08,P<0.05)表达水平明显上调。结论:EGCG可抑制肝癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,并将Sk-hep1细胞阻滞在G2/M期,其机制可能与HO-1、IL-10、TNF-α等炎症信号分子表达的变化有关。展开更多
目的对比分析原发性肝癌患者及经肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗前后肠道菌群的多样性变化及菌群结构差异。方法选取2018年9月-2019年1月广西医科大学附属肿瘤医院原发性肝癌患者65例(其中接受TACE治疗20例),健康体检者27例。高通量16S rDN...目的对比分析原发性肝癌患者及经肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗前后肠道菌群的多样性变化及菌群结构差异。方法选取2018年9月-2019年1月广西医科大学附属肿瘤医院原发性肝癌患者65例(其中接受TACE治疗20例),健康体检者27例。高通量16S rDNA测序方法分析患者便菌群结构,Anosim、LEf Se软件与R语言stats包分析菌群组间物种相对丰度、组间物种多样性、群落差异、进化分支等差异。符合正态性及方差齐的计量资料两组间比较采用t检验;不符合正态分布计量资料组间比较采用Kruskal-Wallis U检验;计数资料组间比较采用χ2检验。相关性分析采取Spearman秩相关性分析。结果在门水平,各组的最大优势菌均为拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes),两者占比之和在健康组>90%,在原发性肝癌组及TACE治疗组中占比均>80%。拟杆菌门在健康组、原发性肝癌组、TACE治疗组占比分别为48.44%、44.96%、48.60%,厚壁菌门在各组占比分别为47.09%、38.15%、33.93%,拟杆菌门、厚壁菌门相对丰度在肝癌组均低于健康组;此外,变形菌门(Proteobacteria)及梭杆菌门(Fusobacteria)相对丰度在肝癌组及TACE治疗组中占比均高于健康组;其余菌门虽有所变化,但占比均<0.5%。健康组物种丰富度Observed species(264±47 vs 230±64,t=2.499,P=0.014)及ACE值(284.11±50.82 vs 252.96±67.58,t=2.158,P=0.034)均大于原发性肝癌组。Between组(原发性肝癌组+健康组)的秩较原发性肝癌组及健康组高,R>0,健康组及原发性肝癌组肠道菌群组间结构差异大于组内差异(P<0.05);Between组(TACE术前+术后)的秩低于TACE术前组,R<0,TACE治疗前与治疗后组内结构差异大于组间结构差异(P>0.05)。原发性肝癌患者肠内机会致病菌与Child-Turcotte-Pugh评分、TBil、ALT、AST存在相关性(r值分别为0.245、0.421、0.327、0.446,P值分别为0.049、<0.001、0.008、<0.001),潜在益生菌与Child-Turcotte-Pugh评分、TBil、Alb、ALT、AST存在相关性(r值分别为-0.314、-0.490、0.285、-0.374、-0.528,P值分别为0.011、<0.001、0.022、0.002、<0.001)。差异菌中的机会致病菌相对丰度随着肝功能Child-Pugh分级递增而增加,C级高于A级(Z=4.301,P=0.038)与B级(Z=4.063,P=0.044)。而潜在益生作用菌的相对丰度随着肝功能Child-Pugh分级的增加呈现减少趋势,C级低于A级(Z=3.882,P=0.049)。结论原发性肝癌患者与健康者肠道菌群多样性及结构不同,而原发性肝癌患者TACE治疗前后肠道菌群相近,TACE治疗对肠道菌群影响较小。肠道菌群失调与原发性肝癌临床分级存在关联,随着肝功能Child-Pugh等级的递增,菌群失调程度更为明显,潜在益生作用菌减少,而机会性致病菌增加。展开更多
文摘目的:探讨通过增强树突状细胞(dendritic cells,DC)与T细胞的相互作用来进一步增强DC介导的抗肿瘤免疫效果。方法:体外培养的小鼠骨髓DC体外经携带人MIP-1β基因的重组腺病毒(adenovirus expressing human macrophoge irrflam—matory protein-1 beta,AdhMIP-1β)转染后(MIP-1β-DC),用小鼠CT26结肠腺癌细胞相关抗原冲击致敏,然后免疫正常同系小鼠,观察其体内诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)的保护性免疫反应;通过体内阻断试验探讨免疫细胞亚群及免疫分子在DC诱导抗肿瘤免疫应答中的作用。结果:经抗原致敏的MIP-1β—DC能更有效地诱导特异CTL活性,能使免疫动物产生更有效的免疫保护作用,抵抗肿瘤细胞的攻击。通过对其抗肿瘤免疫机理的分析发现,CD4+、CD8+T细胞共同参与了经抗原致敏的:MIP-1β—DC介导的抗肿瘤免疫反应,是主要的抗瘤效应细胞,NK细胞作用不明显。结论:通过基因修饰增强树突状细胞对T细胞的体内趋化活性,能更有效地诱导抗肿瘤免疫反应,为树突状细胞介导的肿瘤免疫基因治疗开辟了新的途径。
文摘目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]对体外培养的人肝癌细胞株生物学特性的影响,研究其作用效果与血红素氧合酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)及相关信号分子的关系,探讨其作用机制。方法:利用MTT法检测EGCG对HepG2、Sk-hep1、SMMC7721等肝癌细胞增殖的影响,并用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染法观察肝癌细胞的形态学变化,流式细胞术检测EGCG作用后Sk-hep1细胞周期的变化,Real-time PCR和Western blotting法检测EGCG作用后Sk-hep1细胞中HO-1、IL-10及TNF-α等信号分子表达的变化。结果:EGCG作用后,3株肝癌细胞贴壁细胞数量显著少于对照组,凋亡细胞数增多[HepG2:(16.33±3.51)vs(3.67±1.15)个,P<0.01),Sk-hep1:(18.33±2.31)vs(2.33±2.08)个,P<0.01),SMMC7721:(15.33±3.06)vs(3.33±2.08)个,P<0.01)]。实验组Sk-hep1细胞G2/M期比例明显高于对照组[(34.33±8.09)%vs(3.07±2.32)%,P<0.01]。设对照组基准值为1.00,实验组Sk-hep1细胞中HO-1、IL-10、及TNF-α的mRNA相对表达水平依次为(0.58±0.15)、(5.91±1.11)、(5.29±1.14),差别均有统计学意义(P<0.01);与对照组相比,实验组HO-1蛋白表达水平明显下调(0.16±0.04 vs 0.33±0.08,P<0.05),IL-10(0.42±0.06 vs 0.24±0.08,P=0.034,P<0.05)和TNF-α蛋白(0.95±0.17 vs 0.58±0.08,P<0.05)表达水平明显上调。结论:EGCG可抑制肝癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,并将Sk-hep1细胞阻滞在G2/M期,其机制可能与HO-1、IL-10、TNF-α等炎症信号分子表达的变化有关。
文摘目的对比分析原发性肝癌患者及经肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗前后肠道菌群的多样性变化及菌群结构差异。方法选取2018年9月-2019年1月广西医科大学附属肿瘤医院原发性肝癌患者65例(其中接受TACE治疗20例),健康体检者27例。高通量16S rDNA测序方法分析患者便菌群结构,Anosim、LEf Se软件与R语言stats包分析菌群组间物种相对丰度、组间物种多样性、群落差异、进化分支等差异。符合正态性及方差齐的计量资料两组间比较采用t检验;不符合正态分布计量资料组间比较采用Kruskal-Wallis U检验;计数资料组间比较采用χ2检验。相关性分析采取Spearman秩相关性分析。结果在门水平,各组的最大优势菌均为拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes),两者占比之和在健康组>90%,在原发性肝癌组及TACE治疗组中占比均>80%。拟杆菌门在健康组、原发性肝癌组、TACE治疗组占比分别为48.44%、44.96%、48.60%,厚壁菌门在各组占比分别为47.09%、38.15%、33.93%,拟杆菌门、厚壁菌门相对丰度在肝癌组均低于健康组;此外,变形菌门(Proteobacteria)及梭杆菌门(Fusobacteria)相对丰度在肝癌组及TACE治疗组中占比均高于健康组;其余菌门虽有所变化,但占比均<0.5%。健康组物种丰富度Observed species(264±47 vs 230±64,t=2.499,P=0.014)及ACE值(284.11±50.82 vs 252.96±67.58,t=2.158,P=0.034)均大于原发性肝癌组。Between组(原发性肝癌组+健康组)的秩较原发性肝癌组及健康组高,R>0,健康组及原发性肝癌组肠道菌群组间结构差异大于组内差异(P<0.05);Between组(TACE术前+术后)的秩低于TACE术前组,R<0,TACE治疗前与治疗后组内结构差异大于组间结构差异(P>0.05)。原发性肝癌患者肠内机会致病菌与Child-Turcotte-Pugh评分、TBil、ALT、AST存在相关性(r值分别为0.245、0.421、0.327、0.446,P值分别为0.049、<0.001、0.008、<0.001),潜在益生菌与Child-Turcotte-Pugh评分、TBil、Alb、ALT、AST存在相关性(r值分别为-0.314、-0.490、0.285、-0.374、-0.528,P值分别为0.011、<0.001、0.022、0.002、<0.001)。差异菌中的机会致病菌相对丰度随着肝功能Child-Pugh分级递增而增加,C级高于A级(Z=4.301,P=0.038)与B级(Z=4.063,P=0.044)。而潜在益生作用菌的相对丰度随着肝功能Child-Pugh分级的增加呈现减少趋势,C级低于A级(Z=3.882,P=0.049)。结论原发性肝癌患者与健康者肠道菌群多样性及结构不同,而原发性肝癌患者TACE治疗前后肠道菌群相近,TACE治疗对肠道菌群影响较小。肠道菌群失调与原发性肝癌临床分级存在关联,随着肝功能Child-Pugh等级的递增,菌群失调程度更为明显,潜在益生作用菌减少,而机会性致病菌增加。
