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广西HIV-1 B亚型假病毒的构建
1
作者
黄春湲
王洪
+8 位作者
梁浩
叶力
梁冰玉
蒋俊俊
陈荣凤
宁传艺
廖艳研
余军
黄颉刚
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2018年第12期1942-1946,共5页
目的针对广西HIV-1 B亚型毒株构建一种优化的假病毒耐药检测模型,为表型耐药检测提供成本较低、简便易行的研究工具。方法从质粒p SV-EGFP中扩增出EGFP基因,采用双酶切法将EGFP基因克隆至骨架质粒p NL4-3.Luc.E-R-,以此构建假病毒重组...
目的针对广西HIV-1 B亚型毒株构建一种优化的假病毒耐药检测模型,为表型耐药检测提供成本较低、简便易行的研究工具。方法从质粒p SV-EGFP中扩增出EGFP基因,采用双酶切法将EGFP基因克隆至骨架质粒p NL4-3.Luc.E-R-,以此构建假病毒重组骨架质粒;采用RT-PCR方法从HIV-1 B亚型慢性感染者RNA中获得包膜蛋白基因,采用双酶切法将env基因克隆至真核表达质粒pc DNATM3.1(+),以此构建重组包膜质粒;单转染重组包膜质粒至293t细胞验证表达;共转染重组质粒至293t细胞获得假病毒;采用与TZM-b1细胞共培养法,通过荧光表达检测验证假病毒感染性。结果两种质粒以质量比2:1(pc DNA3.1-env:p NL4-3.EGFP.E-R-)共转染至293t细胞,48 h后收集细胞上清获得假病毒。将假病毒加入到TZM-bl细胞共培养48 h后,可以观察到荧光表达。结论带有EGFP基因重组假病毒的系统构建成功。
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关键词
HIV-1
假病毒
耐药检测
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职称材料
题名
广西HIV-1 B亚型假病毒的构建
1
作者
黄春湲
王洪
梁浩
叶力
梁冰玉
蒋俊俊
陈荣凤
宁传艺
廖艳研
余军
黄颉刚
机构
广西医科大学
公共卫生
学院
&
广西
艾滋病
防治
研究
重点
实验室
广西
壮族自治区医学
科学
信息
研究
所
广西医科大学生命科学院&广西艾滋病防治研究重点实验室
出处
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2018年第12期1942-1946,共5页
基金
国家自然科学基金项目(编号:81360259
81660334)
广西自然科学基金项目(编号:2017GXNSFAA198190)
文摘
目的针对广西HIV-1 B亚型毒株构建一种优化的假病毒耐药检测模型,为表型耐药检测提供成本较低、简便易行的研究工具。方法从质粒p SV-EGFP中扩增出EGFP基因,采用双酶切法将EGFP基因克隆至骨架质粒p NL4-3.Luc.E-R-,以此构建假病毒重组骨架质粒;采用RT-PCR方法从HIV-1 B亚型慢性感染者RNA中获得包膜蛋白基因,采用双酶切法将env基因克隆至真核表达质粒pc DNATM3.1(+),以此构建重组包膜质粒;单转染重组包膜质粒至293t细胞验证表达;共转染重组质粒至293t细胞获得假病毒;采用与TZM-b1细胞共培养法,通过荧光表达检测验证假病毒感染性。结果两种质粒以质量比2:1(pc DNA3.1-env:p NL4-3.EGFP.E-R-)共转染至293t细胞,48 h后收集细胞上清获得假病毒。将假病毒加入到TZM-bl细胞共培养48 h后,可以观察到荧光表达。结论带有EGFP基因重组假病毒的系统构建成功。
关键词
HIV-1
假病毒
耐药检测
Keywords
HIV-1
pseudovirus
drug-resistance detection
分类号
R512.91 [医药卫生—内科学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
广西HIV-1 B亚型假病毒的构建
黄春湲
王洪
梁浩
叶力
梁冰玉
蒋俊俊
陈荣凤
宁传艺
廖艳研
余军
黄颉刚
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2018
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