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木菠萝凝集素的纯化与性质研究 被引量:4
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作者 周素芳 周德义 +2 位作者 张承禄 邓勇 吴耀生 《广西科学》 CAS 1996年第1期35-38,共4页
木菠萝种子经抽提、40%~60%饱和度硫酸铵沉淀和Gal-Sepharose6B亲和层析,得到纯化的木菠萝凝集素(Jacalin)。Jacalin分子量约为58200,由分子量分别是14000和15800的亚基组成,... 木菠萝种子经抽提、40%~60%饱和度硫酸铵沉淀和Gal-Sepharose6B亲和层析,得到纯化的木菠萝凝集素(Jacalin)。Jacalin分子量约为58200,由分子量分别是14000和15800的亚基组成,等电聚焦电泳显示多条区带,其pI为5.7~8.65,Schiff's试剂染色证明它是一种糖蛋白,N-末端为精氨酸和甘氨酸。Jacalin能凝集除山羊、鸡以外的多种动物和人A、B、O和AB血型红细胞,凝集活性受N-酰凝半乳糖胺(GalNAc)和半乳糖(Gal)抑制。在pH值为4.5~10,pH改变不影响Jacalin凝集活性。 展开更多
关键词 木菠萝凝集素 纯化 性质 凝集素
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序列特异性引物-聚合酶链反应法用于广东汉族人群HLA DQA1等位基因分析 被引量:3
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作者 吴耀生 罗超权 +1 位作者 杨英浩 伍新尧 《中山医科大学学报》 CSCD 1998年第2期112-114,共3页
目的:研究广东汉族人群中人类白细胞抗原(HLA)DQA1等位基因频率分布,为HLADQA1相关疾病的研究及人类学的研究提供基础资料。方法:用序列特异性引物聚合酶链反应(SSPPCR)法对广东汉族人群作HLADQA... 目的:研究广东汉族人群中人类白细胞抗原(HLA)DQA1等位基因频率分布,为HLADQA1相关疾病的研究及人类学的研究提供基础资料。方法:用序列特异性引物聚合酶链反应(SSPPCR)法对广东汉族人群作HLADQA1等位基因分型,根据出现扩增产物所用的序列特异性引物,直接分析判断受检查者的基因型别。结果:146例广东汉族健康无血缘关系个体中共检出10个等位基因,以DQA10301的频率(0.291)最高,基因型的观察值与期望值相比,符合HardyWeinberg平衡,纯合基因型的观察值与期望值相比,P>0.95,家系调查及重复性试验显示结果可靠。结论:广东汉族HLADQA1基因与其他10组华人群体的资料比较,总体检验有显著差异,但均以DQA10301的频率最高,显示华人的遗传系统既有共性亦有各自的特点,南方汉族人群体间或与南方一些少数民族比较均有显著差异,显示南方华人群体遗传背景的复杂性。 展开更多
关键词 HLA 等位基因 聚合酶链反应 DQA1
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顶体素结合蛋白真核表达载体的构建及其在肝癌细胞株的表达 被引量:1
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作者 罗彬 云翔 +6 位作者 林永达 肖绍文 闫光华 何少健 贺菽嘉 陈芳 谢小薰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1072-1074,共3页
目的:构建ACRBP真核表达载体,建立稳定表达ACRBP的人肝癌细胞株,为后继研究该基因的功能奠定基础。方法:以pMAL-C2/ACRBP重组质粒作为模板进行PCR,扩增出ACRBP编码区cDNA,并与真核表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-N1/ACRBP重组质粒。通... 目的:构建ACRBP真核表达载体,建立稳定表达ACRBP的人肝癌细胞株,为后继研究该基因的功能奠定基础。方法:以pMAL-C2/ACRBP重组质粒作为模板进行PCR,扩增出ACRBP编码区cDNA,并与真核表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-N1/ACRBP重组质粒。通过Fugene HD将该重组质粒转染至ACRBP表达阴性的肝癌细胞株HepG2,经G418筛选阳性克隆获得稳定转染株。RT-PCR和免疫组织化学方法检测HepG2细胞中ACRBP的表达情况。结果:pEG-FP-N1/ACRBP真核表达载体经测序证实插入序列完全正确;ACRBP基因已经稳定转染至HepG2细胞中并获得表达。结论:成功构建了pEGFP-N1/ACRBP真核表达载体并将其转染HepG2后,能稳定地表达ACRBP。 展开更多
关键词 ACRBP 基因克隆 转染
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p75NTR-Fc融合蛋白在毕赤酵母中的表达、鉴定和活性分析 被引量:2
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作者 周素芳 王欣 +1 位作者 陈虹 黄秉仁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期604-609,共6页
为在酵母细胞中表达出具有生物活性的p75NTR Fc融合蛋白 ,采用PCR方法分别扩增α因子 (α factor)和p75NTR Fc基因 ,经重叠PCR ,获得α factor p75NTR Fc基因 .DNA序列分析该融合基因后 ,插入pAO815载体并构建串联多拷贝表达载体pAO815... 为在酵母细胞中表达出具有生物活性的p75NTR Fc融合蛋白 ,采用PCR方法分别扩增α因子 (α factor)和p75NTR Fc基因 ,经重叠PCR ,获得α factor p75NTR Fc基因 .DNA序列分析该融合基因后 ,插入pAO815载体并构建串联多拷贝表达载体pAO815 3α factor p75NTR Fc .重组质粒电转化酵母GS115细胞后摇瓶培养 ,1%甲醇诱导表达的融合蛋白经ProteinA亲和层析和SephadexG 10 0纯化 ,Western印迹、N末端测序进行蛋白质鉴定 ,ELISA及细胞培养进行生物活性分析 .SDS PAGE分析显示 ,表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中 ,诱导第 4d的表达量最高 ,占上清总蛋白 6 0 %以上 ,ProteinA纯化后有 2条蛋白带 ,免疫印迹分析这 2条蛋白带均能和抗p75及抗IgG抗体结合 ,N末端序列测定证实 1条为完整p75NTR Fc ,1条为其蛋白酶降解带 .ELISA等分析表明 ,p75NTR Fc能与NGF结合 ,p75NTR Fc能抑制NGF对PC12细胞的分化作用 . 展开更多
关键词 神经生长因子低亲和力受体 FC融合蛋白 基因表达 毕赤酵母
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