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黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体的制备和应用
被引量：
5
1
作者
贺菽嘉
顾永耀
+5 位作者
肖绍文
张庆梅
陈芳
罗彬
付骏
谢小薰
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期104-108,共5页
目的制备兔抗人黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体,鉴定其免疫学特性,并进行初步应用。方法对构建的p MAL-C2/MAGE-D4重组质粒进行原核表达及纯化,获得MBP/MAGE-D4融合蛋白,并以此蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。抗体经蛋白A凝胶...
目的制备兔抗人黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体,鉴定其免疫学特性,并进行初步应用。方法对构建的p MAL-C2/MAGE-D4重组质粒进行原核表达及纯化,获得MBP/MAGE-D4融合蛋白,并以此蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。抗体经蛋白A凝胶柱亲和层析法纯化后,通过SDS-PAGE检测其纯度;间接ELISA、Western blot法检测抗体的效价及特异性;免疫组织化学染色法检测肺癌组织中MAGE-D4的表达及定位。结果获得纯度较高的抗MAGE-D4多克隆抗体,ELISA检测抗体的效价为1∶256 000,Western blot法分析显示MAGE-D4多克隆抗体可特异性识别MAGE-D4重组蛋白,免疫组织化学结果表明,该抗体能识别肺癌组织中的内源性MAGE-D4蛋白,表达的阳性率为69.6%(17/23)。结论制备的MAGE-D4多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度。
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关键词
黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)
多克隆抗体
肿瘤相关抗原
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职称材料
白脂素包涵体表达纯化及其功能评价
2
作者
韦雪静
敖青青
+5 位作者
孟玲
徐怡璐
陆彩玲
唐深
王新航
李习艺
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第1期67-72,共6页
目的构建白脂素的原核表达质粒,表达及纯化重组白脂素蛋白,并初步探索其功能,为进一步研究白脂素作用机制及其生理病理作用提供依据。方法利用基因工程技术构建表达白脂素BL21菌株,经异丙基硫代半乳糖苷诱导,梯度尿素复性,亲和层析纯化...
目的构建白脂素的原核表达质粒,表达及纯化重组白脂素蛋白,并初步探索其功能,为进一步研究白脂素作用机制及其生理病理作用提供依据。方法利用基因工程技术构建表达白脂素BL21菌株,经异丙基硫代半乳糖苷诱导,梯度尿素复性,亲和层析纯化及去内毒素处理得到可用于细胞和动物实验的重组白脂素。采用血糖仪检测重组白脂素腹腔注射后C57小鼠血糖变化情况。Alamar Blue检测重组白脂素作用24 h对MIHA细胞活性的影响;重组白脂素刺激MIHA细胞24 h,用蒽酮法检测糖原含量。结果在37℃,A600 nm=0.8,IPTG终浓度为1 mmol/L诱导4 h目的蛋白表达效果较好。通过纯化和去内毒素处理,重组白脂素纯度大于95%,内毒素含量小于1 EU/mg,可以用于动物与细胞实验。腹腔注射重组白脂素60 min后C57小鼠血糖升高至峰值(重组白脂素组vs对照组P=0.021),120 min恢复到正常水平(重组白脂素组vs对照组P=0.03)。重组白脂素刺激MIHA细胞24 h,对细胞活性没有影响;检测糖原发现,不同浓度白脂素组糖原与对照组比较差异有统计学意义(P1=0.013,P2=0.036,P3=0.011)。结论通过原核表达系统成功表达及纯化了白脂素蛋白,该方法纯化后的白脂素具有降低MIHA细胞糖原含量及升高小鼠血糖的作用,这为白脂素功能的进一步研究提供了理论依据。
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关键词
原核表达与纯化
包涵体
白脂素
糖原分解
血糖
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职称材料
题名
黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体的制备和应用
被引量：
5
1
作者
贺菽嘉
顾永耀
肖绍文
张庆梅
陈芳
罗彬
付骏
谢小薰
机构
广西医科大学
生物化学与分子生物学教研室
广西医科大学
广西
高校
生物分子
医学
研究
重点
实验室
广西医科大学
第一附属医院
广西医科大学
组织学与胚胎学教研室
广西医科大学广西高校基础医学研究重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期104-108,共5页
基金
国家自然科学地区基金(81560408)
广西高校科学技术研究项目(KY2015YB058)
广西医科大学青年科学基金(GXMUYSF2014012)
文摘
目的制备兔抗人黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体,鉴定其免疫学特性,并进行初步应用。方法对构建的p MAL-C2/MAGE-D4重组质粒进行原核表达及纯化,获得MBP/MAGE-D4融合蛋白,并以此蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。抗体经蛋白A凝胶柱亲和层析法纯化后,通过SDS-PAGE检测其纯度;间接ELISA、Western blot法检测抗体的效价及特异性;免疫组织化学染色法检测肺癌组织中MAGE-D4的表达及定位。结果获得纯度较高的抗MAGE-D4多克隆抗体,ELISA检测抗体的效价为1∶256 000,Western blot法分析显示MAGE-D4多克隆抗体可特异性识别MAGE-D4重组蛋白,免疫组织化学结果表明,该抗体能识别肺癌组织中的内源性MAGE-D4蛋白,表达的阳性率为69.6%(17/23)。结论制备的MAGE-D4多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度。
关键词
黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)
多克隆抗体
肿瘤相关抗原
Keywords
melanoma-associated antigen D4（MAGE-D4）
polyclonal antibody
tumor-associated antigen
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
白脂素包涵体表达纯化及其功能评价
2
作者
韦雪静
敖青青
孟玲
徐怡璐
陆彩玲
唐深
王新航
李习艺
机构
广西医科大学
公共卫生学院
广西医科大学
广西
高校
高发疾病预防与控制
研究
重点
实验室
广西医科大学
基础医学
院
广西医科大学广西高校基础医学研究重点实验室
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第1期67-72,共6页
基金
国家自然科学基金(81860585)~~
文摘
目的构建白脂素的原核表达质粒,表达及纯化重组白脂素蛋白,并初步探索其功能,为进一步研究白脂素作用机制及其生理病理作用提供依据。方法利用基因工程技术构建表达白脂素BL21菌株,经异丙基硫代半乳糖苷诱导,梯度尿素复性,亲和层析纯化及去内毒素处理得到可用于细胞和动物实验的重组白脂素。采用血糖仪检测重组白脂素腹腔注射后C57小鼠血糖变化情况。Alamar Blue检测重组白脂素作用24 h对MIHA细胞活性的影响;重组白脂素刺激MIHA细胞24 h,用蒽酮法检测糖原含量。结果在37℃,A600 nm=0.8,IPTG终浓度为1 mmol/L诱导4 h目的蛋白表达效果较好。通过纯化和去内毒素处理,重组白脂素纯度大于95%,内毒素含量小于1 EU/mg,可以用于动物与细胞实验。腹腔注射重组白脂素60 min后C57小鼠血糖升高至峰值(重组白脂素组vs对照组P=0.021),120 min恢复到正常水平(重组白脂素组vs对照组P=0.03)。重组白脂素刺激MIHA细胞24 h,对细胞活性没有影响;检测糖原发现,不同浓度白脂素组糖原与对照组比较差异有统计学意义(P1=0.013,P2=0.036,P3=0.011)。结论通过原核表达系统成功表达及纯化了白脂素蛋白,该方法纯化后的白脂素具有降低MIHA细胞糖原含量及升高小鼠血糖的作用,这为白脂素功能的进一步研究提供了理论依据。
关键词
原核表达与纯化
包涵体
白脂素
糖原分解
血糖
Keywords
prokaryotic expression system
inclusion body
asprosin
glycogen
blood glucose
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体的制备和应用
贺菽嘉
顾永耀
肖绍文
张庆梅
陈芳
罗彬
付骏
谢小薰
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017
5
在线阅读
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职称材料
2
白脂素包涵体表达纯化及其功能评价
韦雪静
敖青青
孟玲
徐怡璐
陆彩玲
唐深
王新航
李习艺
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
0
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