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利用α-突触核蛋白预制纤维作用于分化的SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型
1
作者 粟璟曦 宋琼 +2 位作者 景子涵 陈良颢 邹春林 《中国医科大学学报》 北大核心 2025年第1期5-11,共7页
目的探讨利用α-突触核蛋白预形成纤维(α-Syn PFF)作用于视黄酸(RA)分化的SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型的可行性。方法将SH-SY5Y细胞随机分为未分化组和RA分化组,Western blotting检测酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺转运蛋白(DAT)、淋... 目的探讨利用α-突触核蛋白预形成纤维(α-Syn PFF)作用于视黄酸(RA)分化的SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型的可行性。方法将SH-SY5Y细胞随机分为未分化组和RA分化组,Western blotting检测酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺转运蛋白(DAT)、淋巴细胞活化基因3蛋白(LAG3)、巢蛋白(Nestin)表达水平,免疫荧光染色检测微管相关蛋白2(MAP2)、神经元特异核蛋白(NeuN)表达情况。将经RA分化后的SH-SY5Y细胞随机分为control组和α-Syn PFF组,Hoechst 33342染色检测细胞核固缩情况,一氧化氮(NO)含量检测试剂盒测定细胞内NO生成量,Western blotting检测TH、多聚腺苷酸二磷酸(PAR)、多聚腺苷酸二磷酸核糖酶(PARP)表达水平,免疫荧光染色检测细胞内129位丝氨酸磷酸化α-突触核蛋白(pS129-α-Syn)及磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)表达情况。结果RA处理可诱导SH-SY5Y细胞胞体变小、突起变长。Western blotting结果显示,RA处理可提高SH-SY5Y细胞TH、DAT、LAG3表达水平,降低Nestin表达水平(P<0.05);α-Syn PFF处理可使分化的SH-SY5Y细胞TH蛋白表达水平降低,PAR、PARP-1、cleaved PARP-1蛋白表达水平升高(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,RA处理能提高SH-SY5Y细胞MAP2和NeuN表达水平(P<0.001);α-Syn PFF处理可使分化的SH-SY5Y细胞γH2AX和pS129-α-Syn的表达水平升高(P<0.01)。Hoechst 33342染色结果显示,α-Syn PFF处理可使分化的SH-SY5Y细胞核固缩(P<0.001)。NO检测结果显示,α-Syn PFF处理可提高分化的SH-SY5Y细胞内NO含量(P<0.01)。结论α-Syn PFF作用于RA分化的SH-SY5Y细胞可建立帕金森病细胞模型。 展开更多
关键词 帕金森病 α-突触核蛋白预制纤维 视黄酸 SH-SY5Y细胞 细胞模型
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基于A53T转基因小鼠注射α-突触核蛋白纤维加速建立帕金森病模型
2
作者 周宇光 苏迎 +3 位作者 刘亚岭 韦昕钰 姜佩文 邹春林 《中国实验动物学报》 北大核心 2025年第9期1312-1319,共8页
目的通过在B6-hSNCA-A53T转基因小鼠脑内注射α-突触核蛋白预形成纤维(α-Syn PFF),促进帕金森病病理改变的快速出现,从而加快帕金森病小鼠模型的建立。方法选择C57BL/6J背景的α-Syn A53T转基因小鼠作为模型组,同系C57BL/6J小鼠为对照... 目的通过在B6-hSNCA-A53T转基因小鼠脑内注射α-突触核蛋白预形成纤维(α-Syn PFF),促进帕金森病病理改变的快速出现,从而加快帕金森病小鼠模型的建立。方法选择C57BL/6J背景的α-Syn A53T转基因小鼠作为模型组,同系C57BL/6J小鼠为对照组,通过脑立体定位技术将α-Syn PFF注射至小鼠双侧纹状体内。造模后,通过旷场实验评估小鼠的自主活动能力和焦虑行为;转棒、抓力及爬杆实验测定其运动协调性和四肢肌张力;埋藏食物实验评价小鼠的嗅觉功能;通过免疫组织化学染色法探究小鼠脑内炎症和病理性α-突触核蛋白发生。结果与对照组比较,A53T小鼠α-Syn PFF脑内注射后1月旷场实验中运动距离增加;转棒、抓力与爬杆实验无统计学意义;埋藏食物实验中寻找食物时间增加。造模2月后模型组旷场实验中运动距离减少;转棒、抓力与爬杆实验中运动协调能力以及肌张力减弱;埋藏食物实验中寻找食物时间增加。模型组小鼠黑质、皮层、海马区的病理性α-突触核蛋白增加;小胶质细胞增加,路易小体沉积;黑质多巴胺能神经元显著减少。结论A53T小鼠脑内注射α-Syn PFF后其嗅觉障碍和运动功能缺陷的发生显著提前;模型组小鼠黑质、皮层及海马区出现明显的α-突触核蛋白/路易小体沉积,并伴有黑质多巴胺能神经元丢失。因此,该模型可作为一种快速建立的α-突触核蛋白帕金森病动物模型。 展开更多
关键词 帕金森病 A53T转基因小鼠 动物模型 α-突触核蛋白预合成纤维 路易小体
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MPTP诱导的食蟹猴偏侧帕金森病模型运动行为学的长期动态评价研究 被引量：2
3
作者 罗斌斌 胡亚松 +1 位作者 岳峰 陈彪 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第2期217-222,共6页
目的建立具有长期运动行为学改变的灵长类动物模型,用于研究神经保护性药物的研究。利用不同运动变化评估方法探讨1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的食蟹猴偏侧帕金森病(Parkin... 目的建立具有长期运动行为学改变的灵长类动物模型,用于研究神经保护性药物的研究。利用不同运动变化评估方法探讨1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的食蟹猴偏侧帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型运动行为学的长期动态变化。方法 5只(6~7岁)健康雄性食蟹猴分别于左侧颈内动脉注射MPTP建立偏侧PD模型。在MPTP注射前(基线),注射后3、6个月及1、3、6年分别进行临床评分;在MPTP注射前,注射后3、6个月及1年和6年分别进行24 h躯体自发运动总量行为监测。结果造模后3个月临床评分(14.65±8.41)增高到达高峰,造模6个月后临床评分(8.10±2.01)仍较基线高,但与3个月时比较显著降低(P=0.006);之后维持稳定,直至造模6年后临床评分与6个月时比较差异无统计学意义。而24 h躯体自发运动总量造模后3个月降低最明显(16 597.79±12 488.87),造模后6个月有所恢复(29 278.02±12 264.66),但与基线(50 084.20±30 170.89)比较仍显著性降低(与3、6个月比,P值分别为0.014,0.016);造模1年和6年后的24 h躯体自发运动总量恢复到基线水平。结论颈内动脉注射MPTP可以诱导形成稳定具有长期运动症状的偏侧PD模型,尤其是临床评分的改变,直到造模后6年仍存在异常。 展开更多
关键词 帕金森病 食蟹猴 运动行为学 1-甲基-4-苯基-1 2 3 6-四氢吡啶
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