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基于生物信息学筛选肝脏缺血-再灌注损伤泛凋亡关键基因 被引量：2
1
作者 朱丽容 郭乾 +7 位作者 杨洁 张秋雯 何贵柠 虞燕青 文宁 董建辉 李海滨 孙煦勇 《器官移植》 北大核心 2025年第1期106-113,共8页
目的探讨泛凋亡与肝脏缺血-再灌注损伤(HIRI)之间的关系,筛选HIRI的泛凋亡关键基因。方法通过基因表达综合数据库和GeneCards数据库获得泛凋亡相关差异表达基因(PDG)。通过基因本体(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)以及基因集富集... 目的探讨泛凋亡与肝脏缺血-再灌注损伤(HIRI)之间的关系,筛选HIRI的泛凋亡关键基因。方法通过基因表达综合数据库和GeneCards数据库获得泛凋亡相关差异表达基因(PDG)。通过基因本体(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)以及基因集富集分析(GSEA)探索PDG相关的生物学途径。构建蛋白质相互作用网络。筛选关键基因,评估关键基因的诊断价值,并在HIRI小鼠中进行验证。基于转录样本中不同细胞类型相对丰度算法进行免疫细胞浸润分析。结果经筛选共获得16个PDG。GO结果显示,PDG与细胞代谢密切相关;KEGG结果显示,PDG主要富集在细胞凋亡等细胞死亡途径以及肿瘤坏死因子信号通路等免疫相关信号通路;GSEA结果显示,关键基因主要富集在丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路等免疫相关信号通路。筛选出DFFB和TNFSF102个关键基因,其在诊断HIRI方面准确度高,曲线下面积分别为0.964、1.000。免疫浸润分析结果显示,对照组静息自然杀伤细胞、M2型巨噬细胞等浸润较多,HIRI组M0型巨噬细胞、中性粒细胞、初始细胞等浸润较多。实时荧光定量聚合酶链反应结果显示,与Sham组比较,HIRI组小鼠肝组织DFFB信使RNA相对表达量增加,TNFSF10信使RNA相对表达量降低。Cibersort分析结果显示,初始B细胞浸润丰度与DFFB表达呈正相关(r=0.70,P=0.035),M2型巨噬细胞浸润丰度与TNFSF10表达呈正相关(r=0.68,P=0.045)。结论泛凋亡相关基因DFFB和TNFSF10可能是HIRI潜在的生物标志物和治疗靶点。 展开更多
关键词 肝移植 缺血-再灌注损伤 泛凋亡 生物信息学 免疫微环境 治疗靶点 DFFB TNFSF10
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蛋白磷酸酶2A促进线粒体自噬减轻果糖诱导的M2型巨噬细胞线粒体氧化损伤
2
作者 李晓蔓 蓝利 +5 位作者 龙以瑾 李慧莲 王名鸿 王新航 李习艺 唐深 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第18期2186-2196,共11页
目的研究果糖暴露对M2型巨噬细胞线粒体氧化损伤的影响,并采用蛋白磷酸酶甲酯化酶-1(protein phosphatase methylesterase-1,PPME-1)抑制剂ABL127特异性激活蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)以阐明其调控作用。方法①以永生... 目的研究果糖暴露对M2型巨噬细胞线粒体氧化损伤的影响,并采用蛋白磷酸酶甲酯化酶-1(protein phosphatase methylesterase-1,PPME-1)抑制剂ABL127特异性激活蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)以阐明其调控作用。方法①以永生化小鼠骨髓来源巨噬细胞系(Ana-1)为研究对象,设置M0组(常规培养)、M2组(20.00 ng/mL IL-4处理24 h)及M2+梯度果糖处理组(20 ng/mL IL-4联合0.04、0.20、1.00、5.00 mmol/L果糖处理24 h)。采用CCK-8法检测细胞活性,荧光探针法检测线粒体数量、细胞总活性氧(reactive oxygen species,ROS)、线粒体源ROS及线粒体膜电位水平,Western blot法检测PP2Ac总蛋白(total-PP2Ac)及去甲基化PP2Ac(demethylated-PP2Ac)蛋白表达水平。②设置M0组、M2组、M2+Fru组(20.00 ng/mL IL-4+5.00 mmol/L果糖处理24 h)及M2+Fru+ABL127组(20.00 ng/mL IL-4+5.00 mmol/L果糖+1.00μmol/L ABL127处理24 h)探究PP2A干预机制。荧光探针法检测线粒体与溶酶体数量、ROS及线粒体膜电位水平,Western blot法检测线粒体自噬相关蛋白PTEN诱导激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)、自噬底物P62(sequestosome 1,SQSTM1/P62)、微管相关轻链蛋白3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)及电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion channel,VDAC)表达,RT-qPCR检测M2型巨噬细胞表型标志物炎症区域分子1(found in inflammatory zone 1,Fizz1)、精氨酸酶1(arginase-1,Arg-1)及转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的mRNA表达。结果①与M2组相比,0.04~5.00 mmol/L梯度果糖处理组在不影响细胞活性前提下呈剂量依赖性诱导M2型巨噬细胞总ROS水平升高(P<0.05),果糖浓度达5.00 mmol/L时线粒体源ROS及线粒体数量增加(P<0.05),线粒体膜电位水平下降(P<0.05),同时Total-PP2Ac未见改变,而Demethylated-PP2Ac蛋白表达显著上调(P<0.05)。②与M2+Fru组相比,M2+Fru+ABL127组线粒体数量减少、溶酶体数量增加(P<0.01),线粒体自噬相关蛋白PINK1、LC3Ⅱ及VDAC表达均上调(P<0.05),自噬底物P62表达下调(P<0.05),总体及线粒体源ROS水平降低、线粒体膜电位上升(P<0.01);与M2组相比,M2+Fru组标志物Fizz1、Arg-1及TGF-β的mRNA表达下降(P<0.05),ABL127干预后上述标志物表达升高(P<0.05)。结论果糖诱导M2型巨噬细胞PP2Ac去甲基化造成线粒体氧化损伤,激活PP2A显著促进线粒体自噬以逆转该损伤。 展开更多
关键词 果糖 巨噬细胞 线粒体自噬 氧化应激 蛋白磷酸酶2A
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瘦素与前列腺癌的相关性研究 被引量：4
3
作者 周洁 叶洁梅 冷静 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第17期3148-3150,共3页
目的:探讨瘦素(leptin)与肥胖及前列腺癌(PCa)发生、发展的相关性。方法:采用酶联免疫分析法测定PCa及良性前列腺增生(BPH)患者血清瘦素水平,全自动生化分析仪测定血脂含量,化学发光免疫分析方法测定PCa特异性抗原(PSA),免疫组织化学法... 目的:探讨瘦素(leptin)与肥胖及前列腺癌(PCa)发生、发展的相关性。方法:采用酶联免疫分析法测定PCa及良性前列腺增生(BPH)患者血清瘦素水平,全自动生化分析仪测定血脂含量,化学发光免疫分析方法测定PCa特异性抗原(PSA),免疫组织化学法测定瘦素及瘦素受体在PCa及良性BPH组织的表达情况。结果:PCa组血清瘦素水平明显高于BPH组(P<0.01),两组血清瘦素水平与体质指数、甘油三酯及PSA均呈正相关,与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关;瘦素和瘦素受体在PCa及BPH组织均有阳性表达,PCa组织瘦素及其受体阳性表达率明显高于BPH组织(P<0.05)。结论:瘦素与PCa危险因子密切相关,可能是PCa发生、发展的危险因素之一。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 瘦素 体质指数 血脂
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七氟醚对新生大鼠神经干细胞的增殖作用 被引量：3
4
作者 黄剑峰 冼海燕 侯小琼 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第7期24-27,42,共5页
目的研究七氟醚对新生大鼠神经干细胞增殖影响。方法取出生7 d的SD大鼠48只,体重15~20 g,随机分3组:对照组(Con组)、1%七氟醚组(S1组)、3%七氟醚组(S2组)。S1组和S2组分别吸入1%、3%七氟醚4 h。各组新生鼠麻醉开始前腹腔注射5-溴脱氧尿... 目的研究七氟醚对新生大鼠神经干细胞增殖影响。方法取出生7 d的SD大鼠48只,体重15~20 g,随机分3组:对照组(Con组)、1%七氟醚组(S1组)、3%七氟醚组(S2组)。S1组和S2组分别吸入1%、3%七氟醚4 h。各组新生鼠麻醉开始前腹腔注射5-溴脱氧尿苷100 mg/kg,于麻醉结束后6 h处死大鼠并分离脑室区和脑室下区组织。采用免疫组化法进行Nestin与Brd U染色,计算检测脑室区和脑室下区神经干细胞增殖率;Western blot法检测Nestin、Cyclin D1、BMP2、Smad4蛋白的表达。结果与对照组比较,S1组和S2组大鼠脑室区和脑室下区组织Nestin蛋白表达降低、神经干细胞增殖率降低,Cyclin D1表达下降,BMP2、Smad4表达上调(P<0.05)。结论七氟醚可抑制新生大鼠神经干细胞的增殖,其机制可能与Cyclin D1、BMP2、Smad4蛋白表达变化有关。 展开更多
关键词 七氟醚 新生大鼠 神经干细胞 增殖
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TLR4/NF-κB参与动脉粥样硬化发生发展机制的研究进展 被引量：15
5
作者 李嘉慧 王欣佩 冷静 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第4期137-142,共6页
动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种以脂质沉积血管为主的慢性疾病,越来越多研究认为免疫介导的炎症反应在AS的发病机制中有着重要的作用。Toll样受体4(toll-like receptor4,TLR4)作为天然免疫模式识别受体家族中的一员,参与AS的... 动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种以脂质沉积血管为主的慢性疾病,越来越多研究认为免疫介导的炎症反应在AS的发病机制中有着重要的作用。Toll样受体4(toll-like receptor4,TLR4)作为天然免疫模式识别受体家族中的一员,参与AS的发病各个阶段,因此成为了治疗AS的一个重要靶点。本文就TLR4与AS相关研究进展作一综述。 展开更多
关键词 TOLL样受体4 NF-ΚB 炎症反应
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牛磺酸促进线粒体自噬抑制M2型巨噬细胞极化 被引量：1
6
作者 陈成英 蓝春花 +7 位作者 袁江浪 孔星星 蓝利 王新航 常升搏小吉 陆彩铃 李习艺 唐深 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期488-493,共6页
目的研究牛磺酸对M2型巨噬细胞抑炎极化的调控作用,初步探索线粒体自噬在其中的作用机制。方法人外周血的单核细胞系THP-1细胞经100 nmol/L佛波酯(PMA)处理48 h后诱导分化为M0型巨噬细胞;M0型巨噬细胞经20 ng/mL白细胞介素4(IL-4)刺激48... 目的研究牛磺酸对M2型巨噬细胞抑炎极化的调控作用,初步探索线粒体自噬在其中的作用机制。方法人外周血的单核细胞系THP-1细胞经100 nmol/L佛波酯(PMA)处理48 h后诱导分化为M0型巨噬细胞;M0型巨噬细胞经20 ng/mL白细胞介素4(IL-4)刺激48 h,诱导极化为M2型巨噬细胞;加入(40、80)mmol/L牛磺酸与IL-4共处理M2巨噬细胞48 h。实时荧光定量PCR检测M2型巨噬细胞极化相关标志物C型甘露糖受体1(MRC-1)、CC趋化因子配体22(CCL22)、树突状细胞特异性细胞间黏附分子结合非整合素(CD209)的mRNA表达;多功能酶标仪及激光共聚焦显微镜检测和观察线粒体、溶酶体数量变化,JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位水平;Western blot法检测线粒体自噬相关蛋白PTEN诱导激酶1(PINK1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达。结果M0极化为M2时,MRC-1、CCL22、CD209 mRNA表达水平明显上升;线粒体数量和线粒体膜电位增加;溶酶体数量减少;PINK1蛋白表达水平增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值下降。40 mmol/L、80 mmol/L牛磺酸分别处理后,MRC-1、CCL22、CD209的mRNA水平明显下降;线粒体数量和线粒体膜电位下降;溶酶体数量增加;PINK1水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增加,与牛磺酸浓度呈剂量依赖性。结论牛磺酸通过降低线粒体膜电位,促进线粒体自噬,减少细胞的线粒体数量,抑制M2型巨噬细胞极化相关标志物的表达,负调控M2型巨噬细胞极化,避免过度抑炎极化。 展开更多
关键词 M2型巨噬细胞 极化 牛磺酸 线粒体自噬
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肝特异性LCMT1基因敲除小鼠模型的制备及鉴定 被引量：2
7
作者 莫娇 敖青青 +7 位作者 郑志坚 吴懿洁 梁宁静 廖思米 王新航 陆彩玲 唐深 李习艺 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期17-22,共14页
目的建立肝特异性LCMT1基因敲除小鼠模型。方法运用CRISPR/Cas9技术构建肝特异性LCMT1-KO小鼠。通过RT-PCR、实时定量PCR、Western Blot和HE染色等方法鉴定及比较野生和敲除小鼠的差异;观察和分析两组小鼠的一般情况、繁殖能力和子代存... 目的建立肝特异性LCMT1基因敲除小鼠模型。方法运用CRISPR/Cas9技术构建肝特异性LCMT1-KO小鼠。通过RT-PCR、实时定量PCR、Western Blot和HE染色等方法鉴定及比较野生和敲除小鼠的差异;观察和分析两组小鼠的一般情况、繁殖能力和子代存活率。结果成功鉴定子代的基因型;LCMT1-KO小鼠肝LCMT1 mRNA和蛋白质水平显著低于对照组小鼠;两组小鼠的饮食、饮水、体重、繁殖能力、子代存活率、肝外观和HE染色无明显差异;LCMT1-KO小鼠心脏、大脑和肾组织中LCMT1表达与对照组相比没有显著变化;LCMT1-KO小鼠sgRNA未发生脱靶。结论成功构建肝特异性LCMT1基因敲除小鼠,为研究LCMT1基因在疾病中的调控作用提供实验手段。 展开更多
关键词 肝 LCMT1 Cre/Loxp 基因敲除
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