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牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA方法的建立
被引量:
20
1
作者
范晴
谢芝勋
+5 位作者
谢志勤
刘加波
庞耀珊
邓显文
谢丽基
罗思思
《动物医学进展》
北大核心
2015年第2期21-24,共4页
用兔抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)多抗作为包被抗体,BVDV NS3单克隆抗体作为捕获抗体,建立了检测BVDV抗原的捕获ELISA方法,对各项反应条件进行优化,最终获得最佳工作条件为兔多抗1∶1 600稀释包被,NS3单抗1∶2 000稀释,酶标抗体工作浓度为1...
用兔抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)多抗作为包被抗体,BVDV NS3单克隆抗体作为捕获抗体,建立了检测BVDV抗原的捕获ELISA方法,对各项反应条件进行优化,最终获得最佳工作条件为兔多抗1∶1 600稀释包被,NS3单抗1∶2 000稀释,酶标抗体工作浓度为1∶4 000稀释。特异性和敏感性试验结果表明,该方法对牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛分支杆菌无特异性交叉反应,其最低可检测7.9×103个TCID50的病毒量,与RT-PCR方法的相比较,符合率为100%。所建立的BVDV抗原捕获ELISA方法快速、特异、敏感,可用于BVDV抗原的检测。
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关键词
牛病毒性腹泻病毒
NS3单克隆抗体
ELISA
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职称材料
牛病毒性腹泻病毒E2基因在昆虫细胞中的表达
被引量:
4
2
作者
范晴
谢芝勋
+5 位作者
刘加波
庞耀珊
邓显文
谢志勤
谢丽基
罗思思
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2013年第4期9-12,共4页
为了获得具有良好抗原性的牛病毒性腹泻病毒E2囊膜蛋白,利用PCR方法扩增牛病毒性腹泻病毒E2基因,连接于昆虫杆状病毒表达载体中,构建pFastBacHTA-E2重组质粒。将该重组质粒转化入DH10BAC感受态细胞,经PCR鉴定获得转座杆粒Bacmid-E2。转...
为了获得具有良好抗原性的牛病毒性腹泻病毒E2囊膜蛋白,利用PCR方法扩增牛病毒性腹泻病毒E2基因,连接于昆虫杆状病毒表达载体中,构建pFastBacHTA-E2重组质粒。将该重组质粒转化入DH10BAC感受态细胞,经PCR鉴定获得转座杆粒Bacmid-E2。转座杆粒Bacmid-E2转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,感染细胞后,收获得到目的蛋白,用SDS-PAGE和Western blot对重组的表达蛋白进行分析。结果表明,重组E2蛋白大小为43.6ku,与预期值相符,该蛋白能与牛病毒性腹泻病毒阳性血清发生特异性反应,为进一步研发牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒奠定基础。
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关键词
牛病毒性腹泻病毒
E2蛋白
杆状病毒表达体系
昆虫细胞
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职称材料
牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS3的表达及ELISA检测方法的建立
被引量:
4
3
作者
范晴
谢芝勋
+5 位作者
谢志勤
刘加波
庞耀珊
邓显文
谢丽基
罗思思
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2014年第5期85-89,共5页
本研究旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的间接ELISA方法。将BVDV的非结构蛋白NS3基因克隆到原核表达载体pET-32a中进行表达,将纯化后的蛋白作为包被抗原,优化ELISA条件,建立了BVDV抗体间接NS3-ELISA检测方法,并对该方法的...
本研究旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的间接ELISA方法。将BVDV的非结构蛋白NS3基因克隆到原核表达载体pET-32a中进行表达,将纯化后的蛋白作为包被抗原,优化ELISA条件,建立了BVDV抗体间接NS3-ELISA检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检测,结果均较好。用所建立的NS3-ELISA方法检测从广西各牛场采集的475份牛血清样品,检出率为24.8%,与商品化试剂盒比较,符合率为97%。结果表明,本研究建立的NS3-ELISA方法简便、快捷,可大批量检测,适用于BVDV的诊断、抗体水平监测及流行病学调查。
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关键词
牛病毒性腹泻病毒
NS3
ELISA
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职称材料
题名
牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA方法的建立
被引量:
20
1
作者
范晴
谢芝勋
谢志勤
刘加波
庞耀珊
邓显文
谢丽基
罗思思
机构
广西兽医研究所广西动物疫苗和新技术重点实验室
出处
《动物医学进展》
北大核心
2015年第2期21-24,共4页
基金
广西自然科学基金面上项目(2012GXNSFAA053074)
广西特聘专家专项(2011B020)
桂科专项项目(13-3)
文摘
用兔抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)多抗作为包被抗体,BVDV NS3单克隆抗体作为捕获抗体,建立了检测BVDV抗原的捕获ELISA方法,对各项反应条件进行优化,最终获得最佳工作条件为兔多抗1∶1 600稀释包被,NS3单抗1∶2 000稀释,酶标抗体工作浓度为1∶4 000稀释。特异性和敏感性试验结果表明,该方法对牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛分支杆菌无特异性交叉反应,其最低可检测7.9×103个TCID50的病毒量,与RT-PCR方法的相比较,符合率为100%。所建立的BVDV抗原捕获ELISA方法快速、特异、敏感,可用于BVDV抗原的检测。
关键词
牛病毒性腹泻病毒
NS3单克隆抗体
ELISA
Keywords
Bovine viral diarrhea virus
NS3 monoclonal antibody
ELISA
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
牛病毒性腹泻病毒E2基因在昆虫细胞中的表达
被引量:
4
2
作者
范晴
谢芝勋
刘加波
庞耀珊
邓显文
谢志勤
谢丽基
罗思思
机构
广西兽医研究所广西动物疫苗和新技术重点实验室
出处
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2013年第4期9-12,共4页
基金
国家百千万人才工程人选专项(945200603)
广西特聘专家专项(2011B020)
+1 种基金
广西科技攻关项目(0992033-5)
广西自然科学基金项目(2011GXNSFA018096)
文摘
为了获得具有良好抗原性的牛病毒性腹泻病毒E2囊膜蛋白,利用PCR方法扩增牛病毒性腹泻病毒E2基因,连接于昆虫杆状病毒表达载体中,构建pFastBacHTA-E2重组质粒。将该重组质粒转化入DH10BAC感受态细胞,经PCR鉴定获得转座杆粒Bacmid-E2。转座杆粒Bacmid-E2转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,感染细胞后,收获得到目的蛋白,用SDS-PAGE和Western blot对重组的表达蛋白进行分析。结果表明,重组E2蛋白大小为43.6ku,与预期值相符,该蛋白能与牛病毒性腹泻病毒阳性血清发生特异性反应,为进一步研发牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒奠定基础。
关键词
牛病毒性腹泻病毒
E2蛋白
杆状病毒表达体系
昆虫细胞
Keywords
Bovine viral diarrhea virus
E2 protein
Baculovirus expression system
insect cells
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
在线阅读
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职称材料
题名
牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS3的表达及ELISA检测方法的建立
被引量:
4
3
作者
范晴
谢芝勋
谢志勤
刘加波
庞耀珊
邓显文
谢丽基
罗思思
机构
广西
兽医
研究所
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2014年第5期85-89,共5页
基金
广西自然科学基金面上项目(2011GXNSFA018096
2012GXNSFAA053074)
+1 种基金
广西特聘专家专项(2011B020)
桂科专项(13-3)
文摘
本研究旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的间接ELISA方法。将BVDV的非结构蛋白NS3基因克隆到原核表达载体pET-32a中进行表达,将纯化后的蛋白作为包被抗原,优化ELISA条件,建立了BVDV抗体间接NS3-ELISA检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检测,结果均较好。用所建立的NS3-ELISA方法检测从广西各牛场采集的475份牛血清样品,检出率为24.8%,与商品化试剂盒比较,符合率为97%。结果表明,本研究建立的NS3-ELISA方法简便、快捷,可大批量检测,适用于BVDV的诊断、抗体水平监测及流行病学调查。
关键词
牛病毒性腹泻病毒
NS3
ELISA
Keywords
bovine viral diarrhea virus
NS3
ELISA
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA方法的建立
范晴
谢芝勋
谢志勤
刘加波
庞耀珊
邓显文
谢丽基
罗思思
《动物医学进展》
北大核心
2015
20
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
牛病毒性腹泻病毒E2基因在昆虫细胞中的表达
范晴
谢芝勋
刘加波
庞耀珊
邓显文
谢志勤
谢丽基
罗思思
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2013
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS3的表达及ELISA检测方法的建立
范晴
谢芝勋
谢志勤
刘加波
庞耀珊
邓显文
谢丽基
罗思思
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2014
4
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已选择
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