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27nt-miRNA对血管平滑肌细胞SM22α表达的调节及其对细胞活力、迁移和表型改变的影响 被引量:10
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作者 沈凤 杨鹏 +6 位作者 陶晓静 李丹 颜渊鸳 罗雪兰 秦祖杰 覃裕旺 欧和生 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期200-205,共6页
目的:探讨27nt-微小RNA(27nt-miRNA)对血管平滑肌细胞(VSMCs)中平滑肌22α蛋白(SM22α表达的调节及其对细胞活力、迁移和表型改变的影响。方法:构建27nt-miRNA高表达、反义序列(anti-27nt-miRNA)以及阴性对照的表达质粒,经慢病毒包装后... 目的:探讨27nt-微小RNA(27nt-miRNA)对血管平滑肌细胞(VSMCs)中平滑肌22α蛋白(SM22α表达的调节及其对细胞活力、迁移和表型改变的影响。方法:构建27nt-miRNA高表达、反义序列(anti-27nt-miRNA)以及阴性对照的表达质粒,经慢病毒包装后分别转染大鼠原代VSMCs,加入血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)诱导VSMCs表型转换。MTT实验检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学染色法检测细胞中SM22α的mRNA和蛋白表达情况。结果:与正常组相比,PDGF-BB组的细胞活力上升(P <0.05)、迁移能力上升(P <0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量下降(P <0.05);与阴性对照慢病毒组相比,27nt-miRNA高表达组的细胞活力下降(P <0.05),迁移能力下降(P <0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量明显升高(P <0.05);而anti-27nt-miRNA组细胞的细胞活力上升(P <0.05),迁移能力上升(P <0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量下降(P <0.05)。结论:27nt-miRNA促进SM22α表达,同时抑制VSMCs的活力及迁移,并有可能抑制VSMCs从收缩型转变为合成型。 展开更多
关键词 27nt-miRNA 血管平滑肌细胞 表型 平滑肌22α蛋白 血小板源性生长因子
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27nt-miRNA通过靶向哺乳动物雷帕霉素靶蛋白调控血管平滑肌细胞凋亡及其分子机制研究 被引量:5
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作者 李丹 杨鹏 +3 位作者 滕红丽 颜渊鸳 罗雪兰 欧和生 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2020年第4期401-407,共7页
目的:探讨来源于一氧化氮合酶基因第四内含子的27碱基重复序列微小RNA(27nt-miRNA)对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)介导的主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡调控作用及潜在分子机制。方法:将大鼠主动脉VSMC分为空白对照组、雷帕霉素组、27... 目的:探讨来源于一氧化氮合酶基因第四内含子的27碱基重复序列微小RNA(27nt-miRNA)对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)介导的主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡调控作用及潜在分子机制。方法:将大鼠主动脉VSMC分为空白对照组、雷帕霉素组、27nt-miRNA组、27nt-miRNA反义序列(anti-27ntmiRNA)组、阴性对照组。27nt-miRNA组:转染27nt-miRNA正义链慢病毒载体;anti-27nt-miRNA组:转染27ntmiRNA反义链慢病毒载体;阴性对照组:转染随机阴性序列慢病毒载体。除空白对照组外,雷帕霉素组与各转染组细胞给予100 ng/ml雷帕霉素诱导培养2 h诱导凋亡。荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)验证27nt-miRNA慢病毒稳转细胞株构建情况;CCK-8法、流式细胞术、qRT-PCR法与蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测各组细胞增殖能力、细胞凋亡率与周期分布以及mTOR、磷酸化-mTOR(p-mTOR)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的信使RNA(mRNA)和(或)蛋白表达水平。结果:慢病毒转染VSMC后,27nt-miRNA稳转细胞株构建成功,雷帕霉素可抑制VSMC的mTOR mRNA与p-mTOR蛋白表达水平。与阴性对照组相比,27nt-miRNA组细胞的活力与增殖能力显著增强,且细胞凋亡率显著降低(P均<0.05),细胞周期G1期向S期分裂进程阻滞减弱(P<0.05);Bax和caspase-3蛋白表达量显著减少,Bcl-2蛋白表达量显著增加(P均<0.05);mTOR基因转录水平与p-mTOR蛋白表达水平均下降(P<0.05)。结论:27nt-miRNA通过负调控m TOR基因转录水平与蛋白磷酸化水平抑制VSMC凋亡,其机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax和caspase-3蛋白表达有关。 展开更多
关键词 27nt-miRNA 血管平滑肌细胞 凋亡 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 磷酸化
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微RNA-24对过氧化氢诱导的人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响及作用机制 被引量:2
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作者 颜渊鸳 李丹 +5 位作者 赵燕姣 陶晓静 沈凤 杨鹏 罗雪兰 欧和生 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2020年第1期7-15,共9页
目的探讨微RNA-24(miR-24)对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)存活、迁移和凋亡的影响及作用机制。方法通过转染miR-24高表达、miR-24抑制物(anti-miR-24)及其阴性对照慢病毒质粒(miR-24 NC)构建稳转细胞,3种细胞用H2O2500μmol&#... 目的探讨微RNA-24(miR-24)对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)存活、迁移和凋亡的影响及作用机制。方法通过转染miR-24高表达、miR-24抑制物(anti-miR-24)及其阴性对照慢病毒质粒(miR-24 NC)构建稳转细胞,3种细胞用H2O2500μmol·L^-1处理12 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,划痕实验检测细胞迁移率,Hoechst33258染色及流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-24,Bax,Bcl-2和胱天蛋白酶3 mRNA表达水平,Western印迹法和免疫细胞化学法检测Bax、Bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白表达水平。结果与miR-24 NC组比,miR-24高表达组miR-24表达升高(P<0.05),而anti-miR-24组降低(P<0.05)。与正常对照组比,H2O2组细胞凋亡率增加(P<0.05)、细胞存活和迁移率降低(P<0.05),表明氧化损伤模型构建成功。与H2O2+miR-24 NC组比,H2O2+miR-24高表达组上述指标较H2O2+miR-24 NC组升高(P<0.05),促凋亡蛋白Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达量增加,抑凋亡蛋白Bcl-2 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),而H2O2+anti-miR-24组可降低细胞凋亡率、增加细胞存活和迁移率,降低Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达水平,增加Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论氧化应激状态下,miR-24可通过上调Bax、胱天蛋白3表达和下调Bcl-2蛋白表达,促进HUVEC凋亡和抑制其存活和迁移能力。 展开更多
关键词 微RNA-24 人脐静脉血管内皮细胞 过氧化氢 细胞凋亡
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小鼠脑缺血再灌注损伤与线粒体自噬的关系研究 被引量:5
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作者 杨鑫勇 王凯华 刘丹宁 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第2期48-55,共8页
目的观测脑缺血再灌注后神经细胞的线粒体自噬水平,探索小鼠脑缺血再灌注损伤与线粒体自噬的关系。方法将70只C57BL/6J小鼠随机分为空白组及假手术、缺血再灌注组,记录每日体重及Zea Longa评分,到达1、3、7 d时点后进行TTC检测、HE染色... 目的观测脑缺血再灌注后神经细胞的线粒体自噬水平,探索小鼠脑缺血再灌注损伤与线粒体自噬的关系。方法将70只C57BL/6J小鼠随机分为空白组及假手术、缺血再灌注组,记录每日体重及Zea Longa评分,到达1、3、7 d时点后进行TTC检测、HE染色、TUNEL染色、透射电镜、Western blot以及qPCR检测。结果造模后Zea Longa评分持续下降,脑梗死面积比例、脑缺血病理改变、神经细胞凋亡比例均在第3天时加重,在第7天时减轻。3个时点电镜下均观测到线粒体结构改变以及自噬溶酶体的存在。P62的蛋白表达持续下降(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ持续上升(P<0.05),Caspase3和CytC蛋白表达升高(P<0.05),各因子的mRNA表达均升高(P<0.05)。结论缺血再灌注后线粒体自噬被持续激活,但直至第3天以后,再灌注损伤才得到相应缓解。 展开更多
关键词 小鼠 缺血再灌注 线粒体自噬
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提升政府部门财务报告质量的认识与思考 被引量:5
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作者 韦海妮 《中国注册会计师》 北大核心 2022年第5期85-86,共2页
一、当前政府部门财务报告质量存在的主要问题在我国,无论是行政单位还是事业单位实际上都担负着一定的管理公共事务、提供公共服务、维护和实现社会公共制度等方面的公共管理职能。该职能的履行将对经济、政治、社会、文化、生态等方... 一、当前政府部门财务报告质量存在的主要问题在我国,无论是行政单位还是事业单位实际上都担负着一定的管理公共事务、提供公共服务、维护和实现社会公共制度等方面的公共管理职能。该职能的履行将对经济、政治、社会、文化、生态等方面产生深刻的影响。就此意义上分析,政府部门财务报告质量理应得到社会各方面的关注和重视,但遗憾的是,多年来社会的关注度还存在差强人意的地方,尽管2017年实施《政府会计准则--基本准则》后,会计信息质量得到了一定程度的提高,但在工作中我们发现,当前政府部门财务报告质量仍存在不少亟需解决的问题。 展开更多
关键词 财务报告质量 政府会计准则 会计信息质量 公共管理职能 认识与思考 政府部门 事业单位 提供公共服务
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