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题名重组生长激素释放激素GHRH的纯化及活性测定
被引量：2
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作者
王晓华
张娜
张娟辉
邓虹珠
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机构
广州医学院生物化学与分子生物学教研室
广州武警医院妇产科
第一军医大学中医系
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出处
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2004年第3期321-324,共4页
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文摘
目的用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达重组生长激素释放激素(GHRH),检测其生物学活性。方法将重组表达质粒pET-28a /L-ansB-GHRH,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导融合蛋白表达。经裂解细胞、洗涤、乙醇沉淀、酸水解、SP-Sephadex C-25和Sephadex G25柱层析等方法纯化GHRH。用人生长激素放免试剂盒检测GHRH多肽的活性。结果SDS-PAGE分析显示重组表达质粒在大肠杆菌中成功地表达了融合蛋白,它以不溶性的包涵体形式存在,占菌体总蛋白的30%左右。经抽提、酸水解、层析等方法表明纯化倍数达147倍,多肽收率为0.68%。通过电喷雾质谱测得多肽的相对分子质量为5235.25,与理论计算值相吻合。多肽的纯度经SDS-PAGE测定为单一峰。GHRH三组刺激实验组与空白对照组相比之间差异显著(P<0.01),且随着剂量增加,差异明显增加。结论体外重组GHRH多肽具有较高的生物学活性。
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关键词
重组生长激素释放激素
GHRH
纯化
活性测定
融合蛋白
包涵体
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Keywords
growth hormone releasing hormone
purification
fusion protein
inclusion body
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分类号
R341
[医药卫生—基础医学]
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