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抗艾滋病病毒蛋白CVNH在大肠杆菌中表达条件的优化
被引量：
1
1
作者
李宁
孙君波
+3 位作者
韦剑
丘力功
王艇
苏应娟
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期90-96,共7页
CVNH(Cyanovirin-N homology)蛋白家族是具有抗HIV活性的蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)的同源物。在前期研究中,已首次获得水蕨Ceratopteris thalictroides CVNH基因的全长序列,构建了pET32a-CtCVNH的原核表达载体。以此为基础,对...
CVNH(Cyanovirin-N homology)蛋白家族是具有抗HIV活性的蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)的同源物。在前期研究中,已首次获得水蕨Ceratopteris thalictroides CVNH基因的全长序列,构建了pET32a-CtCVNH的原核表达载体。以此为基础,对CVNH在大肠杆菌Rosetta 2(DE3)中的表达条件进行优化。分别探讨了最佳培养基类型及成分、培养基初始pH、诱导时机、诱导剂浓度及诱导时间。优化后的诱导条件是:含24 g.L-1酵母提取物和72 g.L-1胰蛋白胨的TB培养基、培养基初始pH为8.0、菌液A600nm为0.6时加入1.6 g.L-1乳糖诱导6 h。CVNH蛋白的表达量较优化前提高了1.9倍。这为进一步开展CVNH的药物研制和开发奠定基础。
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关键词
CVNH
原核表达
条件优化
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职称材料
中药五环三萜类有效成分抗人肺癌细胞增殖和侵袭作用的研究
被引量：
7
2
作者
张瑞玲
黄炜
黄济群
《中医药学刊》
2004年第11期2065-2067,共3页
目的:研究中药五环三萜类有效成分熊果酸和齐墩果酸抗人肺癌细胞增殖、侵袭的作用,并探讨其抗侵袭作用的机理。方法:用熊果酸和齐墩果酸分别作用于克隆化高转移人肺癌细胞(PGCL3),测定细胞增殖抑制率、软琼脂集落形成率、对重建基底膜...
目的:研究中药五环三萜类有效成分熊果酸和齐墩果酸抗人肺癌细胞增殖、侵袭的作用,并探讨其抗侵袭作用的机理。方法:用熊果酸和齐墩果酸分别作用于克隆化高转移人肺癌细胞(PGCL3),测定细胞增殖抑制率、软琼脂集落形成率、对重建基底膜的侵袭能力、趋化运动能力、对层粘连蛋白的粘附能力以及组织蛋白酶B活性分泌等多项指标。结果:熊果酸和齐墩果酸均可降低PGCL3细胞增殖能力(P<0.001),IC50分别为44.73μmol/L和40.71μmol/L;30μmol/L、40μmol/L熊果酸和35μmol/L、45μmol/L齐墩果酸均能抑制PGCL3细胞的侵袭能力(P<0.001)且有剂量依赖性。抗侵袭作用机理的分析结果显示上述浓度的两种药物对细胞的运动、粘附能力及组织蛋白酶B分泌均有明显的抑制作用且均有统计学的显著意义,软琼脂集落形成率也显著降低。结论:熊果酸和齐墩果酸均有抗人肺癌细胞增殖和侵袭能力,其抗侵袭作用不是对侵袭的某一环节的阻断,而是对侵袭各个基本环节的全面抑制作用。
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关键词
熊果酸
齐墩果酸
人肺癌细胞
增殖
侵袭
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职称材料
HproTα／hIL-2融合蛋白真核载体的构建及鉴定
3
作者
周飞燕
黄明
+3 位作者
韦剑
丘力功
卢柳燕
孙希海
《广西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2008年第2期76-80,共5页
利用基因重组技术构建了含信号肽的人源胸腺素α原和白介素2(proTα/IL-2)融合基因的真核表达载体pVAX-PI。用脂质体转染试剂转染COS-7细胞,转染后24、48、72、96 h采用ELISA法检测细胞培养上清中IL-2的表达情况,分别用CTLL-2依赖细胞株...
利用基因重组技术构建了含信号肽的人源胸腺素α原和白介素2(proTα/IL-2)融合基因的真核表达载体pVAX-PI。用脂质体转染试剂转染COS-7细胞,转染后24、48、72、96 h采用ELISA法检测细胞培养上清中IL-2的表达情况,分别用CTLL-2依赖细胞株/MTT法和脾细胞增殖实验测定融合蛋白IL-2和proTα活性,采用ECL western blotting分析和鉴定目的蛋白的相对分子质量大小。结果表明,转染上清在31 kDa处有特异性阳性反应条带,质粒在转染COS-7细胞后不同时间均可进行分泌表达,且于转染后48 h目的蛋白的表达量达峰值。细胞转染上清中的IL-2活性可达58 IU/mL,proTα具有促进小鼠脾脏细胞增殖的作用,可作为基因治疗药物的开发之用。
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关键词
胸腺素Α原
白介素如融合蛋白
转染
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职称材料
题名
抗艾滋病病毒蛋白CVNH在大肠杆菌中表达条件的优化
被引量：
1
1
作者
李宁
孙君波
韦剑
丘力功
王艇
苏应娟
机构
中山大学生命科学学院
广州拜迪生物医药有限公司
中国科学院武汉植物园湿地演化与生态恢复湖北省重点实验室
出处
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期90-96,共7页
基金
广州市科技计划资助项目(2010J-E101)
广东省科技计划资助项目(2011B031700007
+2 种基金
2012B010300009)
广东省自然科学基金资助项目(S2012010010502)
中山大学实验室开放基金资助项目(KF201128)
文摘
CVNH(Cyanovirin-N homology)蛋白家族是具有抗HIV活性的蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)的同源物。在前期研究中,已首次获得水蕨Ceratopteris thalictroides CVNH基因的全长序列,构建了pET32a-CtCVNH的原核表达载体。以此为基础,对CVNH在大肠杆菌Rosetta 2(DE3)中的表达条件进行优化。分别探讨了最佳培养基类型及成分、培养基初始pH、诱导时机、诱导剂浓度及诱导时间。优化后的诱导条件是:含24 g.L-1酵母提取物和72 g.L-1胰蛋白胨的TB培养基、培养基初始pH为8.0、菌液A600nm为0.6时加入1.6 g.L-1乳糖诱导6 h。CVNH蛋白的表达量较优化前提高了1.9倍。这为进一步开展CVNH的药物研制和开发奠定基础。
关键词
CVNH
原核表达
条件优化
Keywords
CVNH
prokaryotic expression
optimized culture condition
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
中药五环三萜类有效成分抗人肺癌细胞增殖和侵袭作用的研究
被引量：
7
2
作者
张瑞玲
黄炜
黄济群
机构
广州拜迪生物医药有限公司
广州
医学院肿瘤研究所
出处
《中医药学刊》
2004年第11期2065-2067,共3页
基金
广州市科技攻关项目(98-Z-041-01)
文摘
目的:研究中药五环三萜类有效成分熊果酸和齐墩果酸抗人肺癌细胞增殖、侵袭的作用,并探讨其抗侵袭作用的机理。方法:用熊果酸和齐墩果酸分别作用于克隆化高转移人肺癌细胞(PGCL3),测定细胞增殖抑制率、软琼脂集落形成率、对重建基底膜的侵袭能力、趋化运动能力、对层粘连蛋白的粘附能力以及组织蛋白酶B活性分泌等多项指标。结果:熊果酸和齐墩果酸均可降低PGCL3细胞增殖能力(P<0.001),IC50分别为44.73μmol/L和40.71μmol/L;30μmol/L、40μmol/L熊果酸和35μmol/L、45μmol/L齐墩果酸均能抑制PGCL3细胞的侵袭能力(P<0.001)且有剂量依赖性。抗侵袭作用机理的分析结果显示上述浓度的两种药物对细胞的运动、粘附能力及组织蛋白酶B分泌均有明显的抑制作用且均有统计学的显著意义,软琼脂集落形成率也显著降低。结论:熊果酸和齐墩果酸均有抗人肺癌细胞增殖和侵袭能力,其抗侵袭作用不是对侵袭的某一环节的阻断,而是对侵袭各个基本环节的全面抑制作用。
关键词
熊果酸
齐墩果酸
人肺癌细胞
增殖
侵袭
Keywords
Ursolic acid
Oleanolic acid
PGCL3
Proliferation
Invasion
分类号
R734 [医药卫生—肿瘤]
在线阅读
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职称材料
题名
HproTα／hIL-2融合蛋白真核载体的构建及鉴定
3
作者
周飞燕
黄明
韦剑
丘力功
卢柳燕
孙希海
机构
广西师范大学生命科学学院
广州拜迪生物医药有限公司
出处
《广西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2008年第2期76-80,共5页
基金
广东省自然科学基金资助项目(04006313)
文摘
利用基因重组技术构建了含信号肽的人源胸腺素α原和白介素2(proTα/IL-2)融合基因的真核表达载体pVAX-PI。用脂质体转染试剂转染COS-7细胞,转染后24、48、72、96 h采用ELISA法检测细胞培养上清中IL-2的表达情况,分别用CTLL-2依赖细胞株/MTT法和脾细胞增殖实验测定融合蛋白IL-2和proTα活性,采用ECL western blotting分析和鉴定目的蛋白的相对分子质量大小。结果表明,转染上清在31 kDa处有特异性阳性反应条带,质粒在转染COS-7细胞后不同时间均可进行分泌表达,且于转染后48 h目的蛋白的表达量达峰值。细胞转染上清中的IL-2活性可达58 IU/mL,proTα具有促进小鼠脾脏细胞增殖的作用,可作为基因治疗药物的开发之用。
关键词
胸腺素Α原
白介素如融合蛋白
转染
Keywords
prothymosin α
interleukin-2
fusion protein
transfection
分类号
R979.1 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗艾滋病病毒蛋白CVNH在大肠杆菌中表达条件的优化
李宁
孙君波
韦剑
丘力功
王艇
苏应娟
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
中药五环三萜类有效成分抗人肺癌细胞增殖和侵袭作用的研究
张瑞玲
黄炜
黄济群
《中医药学刊》
2004
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
HproTα／hIL-2融合蛋白真核载体的构建及鉴定
周飞燕
黄明
韦剑
丘力功
卢柳燕
孙希海
《广西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2008
0
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