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重组昆虫死亡素的异源表达及其对阪崎肠杆菌抗菌活性研究
1
作者
余霞
杨雯钰
+2 位作者
周昀
王水平
胡晓清
《食品与发酵工业》
北大核心
2025年第16期20-25,共6页
阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii)是重要的乳品致病菌,在世界范围污染频发,由于其具有较强的环境耐受性,挖掘针对C.sakazakii的新型抗菌剂具有重要意义。昆虫死亡素(thanatin,Tn)是一种极具潜力的靶向细胞外膜的抗菌肽,含有21个氨基...
阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii)是重要的乳品致病菌,在世界范围污染频发,由于其具有较强的环境耐受性,挖掘针对C.sakazakii的新型抗菌剂具有重要意义。昆虫死亡素(thanatin,Tn)是一种极具潜力的靶向细胞外膜的抗菌肽,含有21个氨基酸并具有β-发夹结构。Tn对大肠杆菌具有较好杀菌作用,而对C.sakazakii作用尚无报道。基于此,该文对Tn进行异源表达,并首次研究了Tn对C.sakazakii的抗菌作用。利用毕赤酵母(Pichia pastoris),分别借助P_(AOX)和P_(GAP)对密码子优化后的Tn基因进行异源表达,分析Tn对C.sakazakii BAA894的抑菌效果,并通过比较BAA894及其脂多糖缺失株BAA894ΔwaaC的敏感性差异,探究其可能作用机制。结果显示,组成型P.pastoris GS115/pGAPZαA-than-1和诱导型GS115/pPICZαA-than-1均能有效表达活性Tn,合成量分别为24.34 mg/L和28.03 mg/L。Tn经His-tag亲和层析后,80 mg/L Tn对C.sakazakii BAA894生长抑制率达到98.49%,显示Tn对C.sakazakii具有较强杀菌作用,而对BAA894ΔwaaC生长抑制率为91.01%,较BAA894降低了7.48%,显示Tn的作用靶标与脂多糖的核心多糖和O-抗原有关。该研究为挖掘并改进C.sakazakii的新型抗菌剂奠定了重要基础。
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关键词
昆虫死亡素
抗菌肽
阪崎肠杆菌
巴斯德毕赤酵母
脂多糖
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职称材料
毕赤酵母PAS_chr4_0427基因敲除促进神经酰胺合成
被引量：
1
2
作者
黄铭
吴佳欣
+2 位作者
张目
王水平
胡晓清
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第17期17-22,共6页
神经酰胺是应用于化妆品和药品的一类脂质分子,利用微生物代谢工程合成神经酰胺具有重要前景。巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)是优良的工业宿主,目前尚无利用P.pastoris强化神经酰胺的研究。首先构建P.pastoris GS115ΔPAS_chr3_0329(...
神经酰胺是应用于化妆品和药品的一类脂质分子,利用微生物代谢工程合成神经酰胺具有重要前景。巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)是优良的工业宿主,目前尚无利用P.pastoris强化神经酰胺的研究。首先构建P.pastoris GS115ΔPAS_chr3_0329(G-K)作为底盘,然后在G-K中敲除神经酰胺合成负反馈基因PAS_chr4_0427(G-KO),并利用脂质组学技术探究神经酰胺的组成及含量变化。结果表明,与G-K相比,G-KO中神经酰胺在总脂质中相对含量增加了628.13%,达到9.32%;并促进合成更多具有不饱和长链碱基的神经酰胺。与此同时,G-KO中鞘脂相对含量增加,而磷脂相对含量降低。对P.pastoris中神经酰胺丰度最高的Cer(d18∶0)神经酰胺进行HPLC分析,显示G-KO中Cer(d18∶0)神经酰胺合成量达90.22 mg/L,相比G-K提升了872.20%。该研究证实P.pastoris可用于神经酰胺合成,PAS_chr4_0427缺失株G-KO具有良好的神经酰胺合成能力,具有工业发酵制备神经酰胺的潜力。
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关键词
巴斯德毕赤酵母
神经酰胺
敲除
脂质组学
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职称材料
题名
重组昆虫死亡素的异源表达及其对阪崎肠杆菌抗菌活性研究
1
作者
余霞
杨雯钰
周昀
王水平
胡晓清
机构
江南大学生物工程学院
广州悦荟化妆品有限公司
出处
《食品与发酵工业》
北大核心
2025年第16期20-25,共6页
基金
国家重点研发计划政府间国际科技创新合作项目(2023YFE0104400)。
文摘
阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii)是重要的乳品致病菌,在世界范围污染频发,由于其具有较强的环境耐受性,挖掘针对C.sakazakii的新型抗菌剂具有重要意义。昆虫死亡素(thanatin,Tn)是一种极具潜力的靶向细胞外膜的抗菌肽,含有21个氨基酸并具有β-发夹结构。Tn对大肠杆菌具有较好杀菌作用,而对C.sakazakii作用尚无报道。基于此,该文对Tn进行异源表达,并首次研究了Tn对C.sakazakii的抗菌作用。利用毕赤酵母(Pichia pastoris),分别借助P_(AOX)和P_(GAP)对密码子优化后的Tn基因进行异源表达,分析Tn对C.sakazakii BAA894的抑菌效果,并通过比较BAA894及其脂多糖缺失株BAA894ΔwaaC的敏感性差异,探究其可能作用机制。结果显示,组成型P.pastoris GS115/pGAPZαA-than-1和诱导型GS115/pPICZαA-than-1均能有效表达活性Tn,合成量分别为24.34 mg/L和28.03 mg/L。Tn经His-tag亲和层析后,80 mg/L Tn对C.sakazakii BAA894生长抑制率达到98.49%,显示Tn对C.sakazakii具有较强杀菌作用,而对BAA894ΔwaaC生长抑制率为91.01%,较BAA894降低了7.48%,显示Tn的作用靶标与脂多糖的核心多糖和O-抗原有关。该研究为挖掘并改进C.sakazakii的新型抗菌剂奠定了重要基础。
关键词
昆虫死亡素
抗菌肽
阪崎肠杆菌
巴斯德毕赤酵母
脂多糖
Keywords
thanatin
antimicrobial peptide
Cronobacter sakazakii
Pichia pastoris
lipopolysaccharide
分类号
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
毕赤酵母PAS_chr4_0427基因敲除促进神经酰胺合成
被引量：
1
2
作者
黄铭
吴佳欣
张目
王水平
胡晓清
机构
江南大学生物工程学院
广州悦荟化妆品有限公司
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第17期17-22,共6页
基金
国家重点研发计划政府间国际科技创新合作项目(2023YFE0104400)。
文摘
神经酰胺是应用于化妆品和药品的一类脂质分子,利用微生物代谢工程合成神经酰胺具有重要前景。巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)是优良的工业宿主,目前尚无利用P.pastoris强化神经酰胺的研究。首先构建P.pastoris GS115ΔPAS_chr3_0329(G-K)作为底盘,然后在G-K中敲除神经酰胺合成负反馈基因PAS_chr4_0427(G-KO),并利用脂质组学技术探究神经酰胺的组成及含量变化。结果表明,与G-K相比,G-KO中神经酰胺在总脂质中相对含量增加了628.13%,达到9.32%;并促进合成更多具有不饱和长链碱基的神经酰胺。与此同时,G-KO中鞘脂相对含量增加,而磷脂相对含量降低。对P.pastoris中神经酰胺丰度最高的Cer(d18∶0)神经酰胺进行HPLC分析,显示G-KO中Cer(d18∶0)神经酰胺合成量达90.22 mg/L,相比G-K提升了872.20%。该研究证实P.pastoris可用于神经酰胺合成,PAS_chr4_0427缺失株G-KO具有良好的神经酰胺合成能力,具有工业发酵制备神经酰胺的潜力。
关键词
巴斯德毕赤酵母
神经酰胺
敲除
脂质组学
Keywords
Pichia pastoris
ceramide
knockout
lipidomics
分类号
Q939.9 [生物学—微生物学]
TQ920.6 [轻工技术与工程—发酵工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组昆虫死亡素的异源表达及其对阪崎肠杆菌抗菌活性研究
余霞
杨雯钰
周昀
王水平
胡晓清
《食品与发酵工业》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
毕赤酵母PAS_chr4_0427基因敲除促进神经酰胺合成
黄铭
吴佳欣
张目
王水平
胡晓清
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
在线阅读
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职称材料
已选择
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