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抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库的构建
1
作者
罗翠红
王弘
+4 位作者
刘细霞
沈玉栋
孙远明
黄佳佳
张宏斌
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第19期283-287,共5页
目的:构建抗呋喃它酮代谢物(AMOZ)的衍生物噬菌体单链抗体库。方法:从分泌抗AMOZ的单克隆抗体的杂交瘤细胞系(BC3-E8)中提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计通用简并引物,PCR扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)。经重叠延...
目的:构建抗呋喃它酮代谢物(AMOZ)的衍生物噬菌体单链抗体库。方法:从分泌抗AMOZ的单克隆抗体的杂交瘤细胞系(BC3-E8)中提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计通用简并引物,PCR扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)。经重叠延伸PCR(SOE-PCR),将VH和VL基因用编码(G1y4Ser)3的linker随机拼接成单链抗体(scFv)基因,然后将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)TG1感受态细胞,经辅助噬菌体M13K07超感染,建立噬菌体单链抗体库。随机挑取10个阳性克隆,经PCR和双酶切鉴定,并测序。登陆DNAMAN软件对序列进行分析、比对。结果:成功扩增VH、VL及scFv基因,并得到库容为1.2×106的噬菌体抗体库,噬菌体的滴度为2.0×1010PFU,PCR鉴定及双酶切鉴定文库重组率较高,软件对序列比对结果显示,scFv基因全长序列之间差异为8.38%,VH序列差异为3.68%,VL序列差异为14.34%,且序列差异多集中在CDR抗原结合区域对应的核酸序列上。结论:已构建抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库,为进一步富集筛选并表达抗AMOZ的衍生物的单链抗体提供参考。
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关键词
抗呋喃它酮代谢物的衍生物
单链抗体
噬菌体展示
序列分析
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题名
抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库的构建
1
作者
罗翠红
王弘
刘细霞
沈玉栋
孙远明
黄佳佳
张宏斌
机构
广东省食品质量安全重点实验室
广州年区广州总医院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第19期283-287,共5页
基金
国家“863”计划项目(2007AA10Z437)
国家自然科学基金项目(30871755)
+1 种基金
广东省科技厅科技计划项目(2009A020101004)
广东省-教育部产学研结合项目(2009B090300409)
文摘
目的:构建抗呋喃它酮代谢物(AMOZ)的衍生物噬菌体单链抗体库。方法:从分泌抗AMOZ的单克隆抗体的杂交瘤细胞系(BC3-E8)中提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计通用简并引物,PCR扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)。经重叠延伸PCR(SOE-PCR),将VH和VL基因用编码(G1y4Ser)3的linker随机拼接成单链抗体(scFv)基因,然后将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)TG1感受态细胞,经辅助噬菌体M13K07超感染,建立噬菌体单链抗体库。随机挑取10个阳性克隆,经PCR和双酶切鉴定,并测序。登陆DNAMAN软件对序列进行分析、比对。结果:成功扩增VH、VL及scFv基因,并得到库容为1.2×106的噬菌体抗体库,噬菌体的滴度为2.0×1010PFU,PCR鉴定及双酶切鉴定文库重组率较高,软件对序列比对结果显示,scFv基因全长序列之间差异为8.38%,VH序列差异为3.68%,VL序列差异为14.34%,且序列差异多集中在CDR抗原结合区域对应的核酸序列上。结论:已构建抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库,为进一步富集筛选并表达抗AMOZ的衍生物的单链抗体提供参考。
关键词
抗呋喃它酮代谢物的衍生物
单链抗体
噬菌体展示
序列分析
Keywords
derivatives of furaltadone metabolites
single chain Fv （scFv）
phage display
sequencing
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库的构建
罗翠红
王弘
刘细霞
沈玉栋
孙远明
黄佳佳
张宏斌
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
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