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抗酸染色阳性痰涂片刮削物扩增分枝杆菌rpoB基因的初步探索
被引量：
4
1
作者
童莉
孟繁荣
+5 位作者
刘志辉
饶运帷
高俊文
牛群
雷杰
谭守勇
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2014年第11期1811-1814,共4页
摘要目的：探讨直接从抗酸染色阳性痰涂片刮削物中扩增分枝杆菌rpoB基因的方法。方法：（1）使用引物Primerl：5’-CGTACGGTCGGCGAGCTGATC-3’，与Primer2：5’-AGGGGTITCGATCGGGCACATC-3’；Primer3：5’-TGqTCTICAAGGAGAAGCG-3’．与P...
摘要目的：探讨直接从抗酸染色阳性痰涂片刮削物中扩增分枝杆菌rpoB基因的方法。方法：（1）使用引物Primerl：5’-CGTACGGTCGGCGAGCTGATC-3’，与Primer2：5’-AGGGGTITCGATCGGGCACATC-3’；Primer3：5’-TGqTCTICAAGGAGAAGCG-3’．与Primer4：5’-TCGTCGGCGGTCAGGTA-3’分别扩增18株临床分离结核分枝杆菌的rpoB基因，以检测引物设计的合理性。（2）分别采用普通PCR、TouchdownPCR、巢式PCR、二次PCR对直接从3＋～4＋抗酸染色痰涂片刮削物中提取的80例分枝杆菌基因组DNA进行rpoB基因扩增。（3）对80例抗酸染色痰涂片刮削物基因组DNA行实时荧光定量PCR以检测其拷贝数。（4）对18例临床分离菌株基因组DNA10^0、10^1、10^2、10^3、10^4、10^5、10^6、10^7倍稀释物行实时荧光定量PCR与普通PCR（Primerl与Primer2。Primer3与Primer4），以比较二者检出限。结果：（1）两对引物对18株临床分离结核杆菌rpoB基因扩增均有明亮目的条带，并经测序证实。（2）80例痰涂片刮削物基因组DNA扩增均未见目的奈带。（3）80例痰涂片刮削物基因组中．其中20例DNA的拷贝数为10z～10。copies／μL，60例DNA的拷贝数为10^4～10^5copies／μL。（4）两组引物能够扩增出rpoB基因的最高稀释倍数分别为10^4、10^5倍，其对应的荧光定量PCR检测拷贝数分别为10。copies／IxL、107copies／μL。结论：从抗酸染色阳性痰涂片刮削物中扩增分枝杆菌rpoB基因理论上可行，但在实际操作中尚存在-些问题有待进一步探索。抗酸染色涂片制作过程对基因提取及扩增的影响，痰涂片刮屑物基因组提取过程中多次离心造成的DNA量部分丢失均可能是本实验失败需要考虑的因素之-。
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关键词
结核
痰涂片
RPOB基因
PCR
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题名
抗酸染色阳性痰涂片刮削物扩增分枝杆菌rpoB基因的初步探索
被引量：
4
1
作者
童莉
孟繁荣
刘志辉
饶运帷
高俊文
牛群
雷杰
谭守勇
机构
广州
医
科
大学研究生
广州市胸科医院结核科.国家呼吸重点实验室
出处
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2014年第11期1811-1814,共4页
基金
广东省科技计划项目(编号:2011B061300085)
广州市医药卫生科技重点项目(编号:201102A212009)
文摘
摘要目的：探讨直接从抗酸染色阳性痰涂片刮削物中扩增分枝杆菌rpoB基因的方法。方法：（1）使用引物Primerl：5’-CGTACGGTCGGCGAGCTGATC-3’，与Primer2：5’-AGGGGTITCGATCGGGCACATC-3’；Primer3：5’-TGqTCTICAAGGAGAAGCG-3’．与Primer4：5’-TCGTCGGCGGTCAGGTA-3’分别扩增18株临床分离结核分枝杆菌的rpoB基因，以检测引物设计的合理性。（2）分别采用普通PCR、TouchdownPCR、巢式PCR、二次PCR对直接从3＋～4＋抗酸染色痰涂片刮削物中提取的80例分枝杆菌基因组DNA进行rpoB基因扩增。（3）对80例抗酸染色痰涂片刮削物基因组DNA行实时荧光定量PCR以检测其拷贝数。（4）对18例临床分离菌株基因组DNA10^0、10^1、10^2、10^3、10^4、10^5、10^6、10^7倍稀释物行实时荧光定量PCR与普通PCR（Primerl与Primer2。Primer3与Primer4），以比较二者检出限。结果：（1）两对引物对18株临床分离结核杆菌rpoB基因扩增均有明亮目的条带，并经测序证实。（2）80例痰涂片刮削物基因组DNA扩增均未见目的奈带。（3）80例痰涂片刮削物基因组中．其中20例DNA的拷贝数为10z～10。copies／μL，60例DNA的拷贝数为10^4～10^5copies／μL。（4）两组引物能够扩增出rpoB基因的最高稀释倍数分别为10^4、10^5倍，其对应的荧光定量PCR检测拷贝数分别为10。copies／IxL、107copies／μL。结论：从抗酸染色阳性痰涂片刮削物中扩增分枝杆菌rpoB基因理论上可行，但在实际操作中尚存在-些问题有待进一步探索。抗酸染色涂片制作过程对基因提取及扩增的影响，痰涂片刮屑物基因组提取过程中多次离心造成的DNA量部分丢失均可能是本实验失败需要考虑的因素之-。
关键词
结核
痰涂片
RPOB基因
PCR
分类号
R521 [医药卫生—内科学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
抗酸染色阳性痰涂片刮削物扩增分枝杆菌rpoB基因的初步探索
童莉
孟繁荣
刘志辉
饶运帷
高俊文
牛群
雷杰
谭守勇
《实用医学杂志》
CAS
北大核心
2014
4
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