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P-糖蛋白对H2O2诱导的视网膜色素上皮细胞氧化损伤的抑制作用
被引量：
1
1
作者
冯绮婷
梁瑜钦
+1 位作者
黄雄飞
张跃红
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2020年第10期915-919,共5页
目的探讨P-糖蛋白对H 2O 2诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化损伤的抑制作用。方法取人RPE细胞株D407细胞,放入体积分数5%CO 2培养箱中用含体积分数10%胎牛血清和双抗的DMEM培养基于37℃传代培养。先将细胞...
目的探讨P-糖蛋白对H 2O 2诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化损伤的抑制作用。方法取人RPE细胞株D407细胞,放入体积分数5%CO 2培养箱中用含体积分数10%胎牛血清和双抗的DMEM培养基于37℃传代培养。先将细胞按H 2O 2浓度梯度处理,使用免疫印迹实验和P-糖蛋白荧光性底物罗丹明123蓄积实验确定H 2O 2对P-糖蛋白表达的最佳诱导浓度。预先使用1μmol·L-1 P-糖蛋白抑制剂Tariquidar处理细胞,通过测量细胞内罗丹明123蓄积量检测P-糖蛋白功能活性。将细胞分成3组:对照组、H 2O 2模型组(400μmol·L-1)、H 2O 2+P-糖蛋白抑制剂组(H 2O 2+Tariquidar),通过检测细胞内ATP水平以及采用Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率来验证氧化应激下P-糖蛋白功能性表达对细胞氧化损伤的抑制作用。结果免疫印迹实验结果显示,随着H 2O 2浓度的增加,P-糖蛋白相对表达量呈剂量依赖性增加并在400μmol·L-1时达到最高值。H 2O 2在浓度400μmol·L-1时对P-糖蛋白表达和功能均有最明显的诱导作用,该浓度为最佳处理浓度。H 2O 2+P-糖蛋白抑制剂组中细胞内罗丹明123水平较H 2O 2模型组增加,差异有统计学意义(P<0.01),提示Tariquidar能有效抑制P-糖蛋白功能。H 2O 2模型组ATP水平较对照组显著下降,差异有统计学意义(P<0.001);而H 2O 2+P-糖蛋白抑制剂组ATP水平则较H 2O 2模型组更低,差异亦有统计学意义(P<0.05),提示抑制P-糖蛋白功能可进一步加剧氧化应激导致的ATP水平下降。与对照组相比,H 2O 2模型组细胞凋亡率显著增加,而H 2O 2+P-糖蛋白抑制剂组细胞凋亡率则较H 2O 2模型组增加,提示抑制P-糖蛋白功能可加重氧化应激下的细胞凋亡。结论P-糖蛋白对H 2O 2诱导的RPE细胞氧化损伤具有一定的抑制作用。
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关键词
P-糖蛋白
氧化应激
视网膜色素上皮细胞
老年性黄斑变性
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题名
P-糖蛋白对H2O2诱导的视网膜色素上皮细胞氧化损伤的抑制作用
被引量：
1
1
作者
冯绮婷
梁瑜钦
黄雄飞
张跃红
机构
广州市第一人民医院
(
华南理工大学
附属
医院
)
眼科
出处
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2020年第10期915-919,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:81200709、81271196)
广州市科技创新发展专项资金资助项目(编号:201607010119)
广州市卫生健康科技项目(编号:20181A010006)。
文摘
目的探讨P-糖蛋白对H 2O 2诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化损伤的抑制作用。方法取人RPE细胞株D407细胞,放入体积分数5%CO 2培养箱中用含体积分数10%胎牛血清和双抗的DMEM培养基于37℃传代培养。先将细胞按H 2O 2浓度梯度处理,使用免疫印迹实验和P-糖蛋白荧光性底物罗丹明123蓄积实验确定H 2O 2对P-糖蛋白表达的最佳诱导浓度。预先使用1μmol·L-1 P-糖蛋白抑制剂Tariquidar处理细胞,通过测量细胞内罗丹明123蓄积量检测P-糖蛋白功能活性。将细胞分成3组:对照组、H 2O 2模型组(400μmol·L-1)、H 2O 2+P-糖蛋白抑制剂组(H 2O 2+Tariquidar),通过检测细胞内ATP水平以及采用Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率来验证氧化应激下P-糖蛋白功能性表达对细胞氧化损伤的抑制作用。结果免疫印迹实验结果显示,随着H 2O 2浓度的增加,P-糖蛋白相对表达量呈剂量依赖性增加并在400μmol·L-1时达到最高值。H 2O 2在浓度400μmol·L-1时对P-糖蛋白表达和功能均有最明显的诱导作用,该浓度为最佳处理浓度。H 2O 2+P-糖蛋白抑制剂组中细胞内罗丹明123水平较H 2O 2模型组增加,差异有统计学意义(P<0.01),提示Tariquidar能有效抑制P-糖蛋白功能。H 2O 2模型组ATP水平较对照组显著下降,差异有统计学意义(P<0.001);而H 2O 2+P-糖蛋白抑制剂组ATP水平则较H 2O 2模型组更低,差异亦有统计学意义(P<0.05),提示抑制P-糖蛋白功能可进一步加剧氧化应激导致的ATP水平下降。与对照组相比,H 2O 2模型组细胞凋亡率显著增加,而H 2O 2+P-糖蛋白抑制剂组细胞凋亡率则较H 2O 2模型组增加,提示抑制P-糖蛋白功能可加重氧化应激下的细胞凋亡。结论P-糖蛋白对H 2O 2诱导的RPE细胞氧化损伤具有一定的抑制作用。
关键词
P-糖蛋白
氧化应激
视网膜色素上皮细胞
老年性黄斑变性
Keywords
P-glycoprotein
oxidative stress
retinal pigment epithelium cells
age-related macular degeneration
分类号
R774.1 [医药卫生—眼科]
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1
P-糖蛋白对H2O2诱导的视网膜色素上皮细胞氧化损伤的抑制作用
冯绮婷
梁瑜钦
黄雄飞
张跃红
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2020
1
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