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Syndecan-1高表达载体及不脱落突变体的构建及表达鉴定
1
作者
刘俊
王继德
+5 位作者
邝杰思
张绍衡
唐源淋
王中秋
秦和平
陈烨
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期388-390,394,共4页
目的:建立小鼠syndecan-1的pcDNA3.0高表达和不脱落的真核表达载体并进行表达鉴定。方法:(1)PCR扩增syndecan-1编码序列,构建载体pcDNA3.0-widetype-synde-can-1(WT-sdc1),经定点突变技术构建载体pcDNA3.0-unshedding-syndecan-1(uS-sdc...
目的:建立小鼠syndecan-1的pcDNA3.0高表达和不脱落的真核表达载体并进行表达鉴定。方法:(1)PCR扩增syndecan-1编码序列,构建载体pcDNA3.0-widetype-synde-can-1(WT-sdc1),经定点突变技术构建载体pcDNA3.0-unshedding-syndecan-1(uS-sdc1);(2)设立阴性对照组、转染组(分别为pcDNA3.0转染组、WT-sdc1转染组及uS-sdc1转染组,转染48 h),予1μmol/L的佛波酯(PMA)刺激15 min后经RT-PCR、Western blot及Dot blot鉴定刺激前后syndecan-1表达的情况。结果:(1)真核表达载体WT-sdc1测序完全正确;载体uS-sdc1目的突变点已成功突变,除了一处无义突变外,其余序列与GenBank中的序列完全一致;(2)转染48 h后,WT-sdc1和uS-sdc1转染组细胞均强表达syndecan-1mRMA和蛋白,细胞上清中仅检测出少量脱落的syndecan-1。PMA刺激后,各组mRMA表达无显著改变;WT-sdc1转染组syndecan-1蛋白表达量较uS-sdc1转染组显著减弱,上清中脱落的syndecan-1含量显著增加。结论:成功构建了WT-sdc1载体和uS-sdc1载体,为深入研究syndecan-1及其脱落在胃肠道疾病中的具体作用及基因治疗奠定了基础。
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关键词
SYNDECAN-1
表达载体
不脱落
突变
胃肠道疾病
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题名
Syndecan-1高表达载体及不脱落突变体的构建及表达鉴定
1
作者
刘俊
王继德
邝杰思
张绍衡
唐源淋
王中秋
秦和平
陈烨
机构
南方医
科
大学南方
医院
消化
科
广东省胃肠疾病重点实验室
广州市番禺区中心医院消化科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期388-390,394,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(81070291)
广东省自然科学基金资助项目(9151051501000048)
教育部新世纪优秀人才支技计划(NCET-10-0091)
文摘
目的:建立小鼠syndecan-1的pcDNA3.0高表达和不脱落的真核表达载体并进行表达鉴定。方法:(1)PCR扩增syndecan-1编码序列,构建载体pcDNA3.0-widetype-synde-can-1(WT-sdc1),经定点突变技术构建载体pcDNA3.0-unshedding-syndecan-1(uS-sdc1);(2)设立阴性对照组、转染组(分别为pcDNA3.0转染组、WT-sdc1转染组及uS-sdc1转染组,转染48 h),予1μmol/L的佛波酯(PMA)刺激15 min后经RT-PCR、Western blot及Dot blot鉴定刺激前后syndecan-1表达的情况。结果:(1)真核表达载体WT-sdc1测序完全正确;载体uS-sdc1目的突变点已成功突变,除了一处无义突变外,其余序列与GenBank中的序列完全一致;(2)转染48 h后,WT-sdc1和uS-sdc1转染组细胞均强表达syndecan-1mRMA和蛋白,细胞上清中仅检测出少量脱落的syndecan-1。PMA刺激后,各组mRMA表达无显著改变;WT-sdc1转染组syndecan-1蛋白表达量较uS-sdc1转染组显著减弱,上清中脱落的syndecan-1含量显著增加。结论:成功构建了WT-sdc1载体和uS-sdc1载体,为深入研究syndecan-1及其脱落在胃肠道疾病中的具体作用及基因治疗奠定了基础。
关键词
SYNDECAN-1
表达载体
不脱落
突变
胃肠道疾病
Keywords
syndecan-1
expression vector
unshedding
mutation
gastrointestinal disease
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Syndecan-1高表达载体及不脱落突变体的构建及表达鉴定
刘俊
王继德
邝杰思
张绍衡
唐源淋
王中秋
秦和平
陈烨
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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