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犬冠状病毒与犬细小病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立
被引量：
1
1
作者
傅宇飞
李传峰
+8 位作者
田传龙
李泽贤
麦嘉迅
程松
刘禹含
孟春春
朱杰
程国锋
刘光清
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第3期75-83,共9页
根据GenBank中犬冠状病毒(CCoV)和犬细小病毒(CPV)已有基因序列设计其对应引物,通过对反应体系和扩增程序的优化,建立了CCoV和CPV双重荧光定量PCR检测方法,评估了其敏感性、特异性和重复性。结果显示,该方法最佳退火温度为60℃,引物浓...
根据GenBank中犬冠状病毒(CCoV)和犬细小病毒(CPV)已有基因序列设计其对应引物,通过对反应体系和扩增程序的优化,建立了CCoV和CPV双重荧光定量PCR检测方法,评估了其敏感性、特异性和重复性。结果显示,该方法最佳退火温度为60℃,引物浓度分别为CCoV 1.0μmol/L和CPV 0.1μmol/L,检测下限均为10~2 copies/μL。批内与批间的变异系数均小于2%。该方法用于检测犬腺病毒(CAV)、犬圆环病毒(CaCV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬流感病毒(CIV)、犬副流感病毒(CPIV)均无特异性扩增。对68份临床样品的检测,结果表明CCoV阳性率为22.0%,CPV阳性率为61.8%,与普通PCR检测结果相比,本研究建立的方法更加灵敏。本研究建立的CCoV和CPV检测方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点,可用于对CCoV和CPV的鉴别诊断。
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关键词
犬冠状病毒
犬细小病毒
双重荧光定量PCR
鉴别诊断
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职称材料
犬副流感病毒F基因原核表达及多克隆抗体的制备
2
作者
刘禹含
叶雨濛
+7 位作者
麦嘉迅
程松
孟春春
朱杰
刘光清
王勇
巴音查汗·盖力克
李传峰
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第2期139-145,共7页
本研究利用原核表达系统表达犬副流感病毒(CPIV)F蛋白,并制备CPIV-F蛋白多克隆抗体。依据CPIV SH2021株F基因设计引物,扩增获得去除信号肽的F基因片段,并构建了重组表达质粒pET-42a-CPIV-F,经测序验证正确后转化至大肠杆菌BL21中,经IPT...
本研究利用原核表达系统表达犬副流感病毒(CPIV)F蛋白,并制备CPIV-F蛋白多克隆抗体。依据CPIV SH2021株F基因设计引物,扩增获得去除信号肽的F基因片段,并构建了重组表达质粒pET-42a-CPIV-F,经测序验证正确后转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达重组蛋白,并优化了诱导剂浓度及诱导时间。采用包涵体粗提纯化法对重组CPIV-F蛋白进行纯化,并测定了重组蛋白浓度。用纯化的重组CPIV-F蛋白制备其兔源多克隆抗体,通过Western blot和ELISA鉴定了多克隆抗体特异性和效价。结果显示:试验成功构建pET-42a-CPIV-F原核表达质粒并表达出重组CPIV-F蛋白;SDS-PAGE法和Western blot结果表明,重组CPIV-F蛋白可在大肠杆菌中的表达,大小为89 kDa,优化后的IPTG终浓度为1 mmol/L,诱导4 h表达量最大,重组蛋白浓度为2.3 mg/mL,兔抗CPIV-F抗体可以与重组蛋白发生特异性反应;间接ELISA测得兔抗CPIV-F蛋白多克隆抗体效价为1∶102400。本研究制备的兔源多克隆抗体特异和高效,表明F蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研究CPIV F蛋白的生物学功能及建立相关的免疫学检测方法奠定了基础。
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关键词
犬副流感病毒
F基因
原核表达
多克隆抗体
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职称材料
题名
犬冠状病毒与犬细小病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立
被引量：
1
1
作者
傅宇飞
李传峰
田传龙
李泽贤
麦嘉迅
程松
刘禹含
孟春春
朱杰
程国锋
刘光清
机构
江苏科技大学生物技术学院
中国农业科学院上海兽医研究所
上海牧爱宠物用品有限公司
广州市海珠区立德动物医院
德
国纳博科临
动物
临床中国检验实验室
同济大学
出处
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第3期75-83,共9页
基金
国家自然科学基金项目(32000109)
上海市青年科技英才扬帆计划项目(20YF1457700)
上海市自然科学基金项目(22ZR1476300)。
文摘
根据GenBank中犬冠状病毒(CCoV)和犬细小病毒(CPV)已有基因序列设计其对应引物,通过对反应体系和扩增程序的优化,建立了CCoV和CPV双重荧光定量PCR检测方法,评估了其敏感性、特异性和重复性。结果显示,该方法最佳退火温度为60℃,引物浓度分别为CCoV 1.0μmol/L和CPV 0.1μmol/L,检测下限均为10~2 copies/μL。批内与批间的变异系数均小于2%。该方法用于检测犬腺病毒(CAV)、犬圆环病毒(CaCV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬流感病毒(CIV)、犬副流感病毒(CPIV)均无特异性扩增。对68份临床样品的检测,结果表明CCoV阳性率为22.0%,CPV阳性率为61.8%,与普通PCR检测结果相比,本研究建立的方法更加灵敏。本研究建立的CCoV和CPV检测方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点,可用于对CCoV和CPV的鉴别诊断。
关键词
犬冠状病毒
犬细小病毒
双重荧光定量PCR
鉴别诊断
Keywords
Canine coronavirus
Canine parvovirus
duplex real-time PCR
differential diagnosis
分类号
S852.655 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
犬副流感病毒F基因原核表达及多克隆抗体的制备
2
作者
刘禹含
叶雨濛
麦嘉迅
程松
孟春春
朱杰
刘光清
王勇
巴音查汗·盖力克
李传峰
机构
新疆农业大学
动物
医学院
中国农业科学院上海兽医研究所
安徽农业大学
动物
科技学院
广州市海珠区立德动物医院
德
国纳博科临
动物
临床中国检验实验室
出处
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第2期139-145,共7页
基金
国家自然科学基金项目(32000109)
上海市青年科技英才扬帆计划项目(20YF1457700)
+2 种基金
上海市自然科学基金项目(22ZR1476300)
上海市市级科技重大专项(ZD2021CY001)
中央级公益性行业科院所基本科研业务费(2022JB01)。
文摘
本研究利用原核表达系统表达犬副流感病毒(CPIV)F蛋白,并制备CPIV-F蛋白多克隆抗体。依据CPIV SH2021株F基因设计引物,扩增获得去除信号肽的F基因片段,并构建了重组表达质粒pET-42a-CPIV-F,经测序验证正确后转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达重组蛋白,并优化了诱导剂浓度及诱导时间。采用包涵体粗提纯化法对重组CPIV-F蛋白进行纯化,并测定了重组蛋白浓度。用纯化的重组CPIV-F蛋白制备其兔源多克隆抗体,通过Western blot和ELISA鉴定了多克隆抗体特异性和效价。结果显示:试验成功构建pET-42a-CPIV-F原核表达质粒并表达出重组CPIV-F蛋白;SDS-PAGE法和Western blot结果表明,重组CPIV-F蛋白可在大肠杆菌中的表达,大小为89 kDa,优化后的IPTG终浓度为1 mmol/L,诱导4 h表达量最大,重组蛋白浓度为2.3 mg/mL,兔抗CPIV-F抗体可以与重组蛋白发生特异性反应;间接ELISA测得兔抗CPIV-F蛋白多克隆抗体效价为1∶102400。本研究制备的兔源多克隆抗体特异和高效,表明F蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研究CPIV F蛋白的生物学功能及建立相关的免疫学检测方法奠定了基础。
关键词
犬副流感病毒
F基因
原核表达
多克隆抗体
Keywords
Canine parainfluenza virus
F gene
prokaryotic expression
polyclonal antibodies
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
犬冠状病毒与犬细小病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立
傅宇飞
李传峰
田传龙
李泽贤
麦嘉迅
程松
刘禹含
孟春春
朱杰
程国锋
刘光清
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025
1
在线阅读
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职称材料
2
犬副流感病毒F基因原核表达及多克隆抗体的制备
刘禹含
叶雨濛
麦嘉迅
程松
孟春春
朱杰
刘光清
王勇
巴音查汗·盖力克
李传峰
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025
0
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