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神经干细胞过表达Hsp75降低Aβ介导的神经毒性
被引量：
1
1
作者
王艳
林继宗
+3 位作者
陈庆状
贾思远
马艳姣
王勇
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期302-306,共5页
目的:应用腺病毒为载体在体外过表达热休克蛋白75(Hsp75),研究Hsp75蛋白过表达对神经干细胞在Aβ诱导神经毒性中的作用,并初步探讨其作用机制。方法:体外培养小鼠神经干细胞C17.2,实验分为对照组、Aβ处理组、腺病毒阴性感染组和腺病毒H...
目的:应用腺病毒为载体在体外过表达热休克蛋白75(Hsp75),研究Hsp75蛋白过表达对神经干细胞在Aβ诱导神经毒性中的作用,并初步探讨其作用机制。方法:体外培养小鼠神经干细胞C17.2,实验分为对照组、Aβ处理组、腺病毒阴性感染组和腺病毒Hsp75过表达感染组。使用荧光显微镜观察腺病毒的感染情况并进行细胞免疫鉴定;倒置相差显微镜观察各组神经干细胞的形态;MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测Hsp75和活化型caspase-3蛋白水平。结果:荧光显微镜观察和Western blot检测表明腺病毒成功感染神经干细胞并高效表达Hsp75蛋白。此外,腺病毒感染不会导致细胞形态改变及细胞分化,同时也不会影响细胞活力。与对照组比较,Aβ处理组及腺病毒阴性感染组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率及活化型caspase-3蛋白水平显著增高(P<0.05);然而,Hsp75过表达能显著提高神经干细胞的存活率,减少细胞凋亡和降低活化型caspase-3蛋白水平(P<0.05)。结论:Hsp75过表达对Aβ诱导损伤的C17.2细胞具有明显保护作用,其机制可能是与抑制caspase-3途径依赖的细胞凋亡有关。
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关键词
热休克蛋白75
C17.2神经干细胞
细胞凋亡
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职称材料
人HSP75基因重组腺病毒载体构建及在C17.2神经干细胞的表达
2
作者
王艳
陈庆状
+4 位作者
蒋德旗
李明星
贾思远
朱宁
王勇
《中国康复理论与实践》
CSCD
北大核心
2015年第3期264-268,共5页
目的构建HSP75基因重组腺病毒载体,观察HSP75蛋白在C17.2神经干细胞中的表达。方法采用PCR方法从含人HSP75基因质粒中扩增HSP75基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点区域,构建重组穿梭质粒p HBAd-MCM-HSP75-GFP,在LipofiterTM转染试...
目的构建HSP75基因重组腺病毒载体,观察HSP75蛋白在C17.2神经干细胞中的表达。方法采用PCR方法从含人HSP75基因质粒中扩增HSP75基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点区域,构建重组穿梭质粒p HBAd-MCM-HSP75-GFP,在LipofiterTM转染试剂的介导下与腺病毒辅助骨架质粒p HBAd-BHGloxΔE1,3 Cre共转染HEK293细胞,整合包装成重组腺病毒,TCID50法测定病毒滴度。使用荧光显微镜、流式细胞仪和Western blotting观察重组腺病毒在C17.2细胞中的感染情况及HSP75蛋白的表达水平。结果通过酶切鉴定、测序、PCR鉴定,HSP75基因已正确插入穿梭质粒中,并与病毒骨架质粒整合包装成重组腺病毒;重组腺病毒滴度为1.0×1010PFU/ml;Western blotting检测,转染后的神经干细胞表达HSP75蛋白。结论 HSP75重组腺病毒载体成功构建,对C17.2神经干细胞具有较高的表达效力。
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关键词
热休克蛋白75
重组腺病毒载体
C17.2神经干细胞
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职称材料
题名
神经干细胞过表达Hsp75降低Aβ介导的神经毒性
被引量：
1
1
作者
王艳
林继宗
陈庆状
贾思远
马艳姣
王勇
机构
南方医
科
大学珠江
医院
药剂
科
广东省
中西医结合医院
药事管理
科
中山大学附属第三
医院
肝胆外
科
广州市中西医结合医院药剂科
南方医
科
大学珠江
医院
烧伤
科
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期302-306,共5页
基金
广东省自然科学基金资助项目(No.S2012010008199
No.S2013010015546)
文摘
目的:应用腺病毒为载体在体外过表达热休克蛋白75(Hsp75),研究Hsp75蛋白过表达对神经干细胞在Aβ诱导神经毒性中的作用,并初步探讨其作用机制。方法:体外培养小鼠神经干细胞C17.2,实验分为对照组、Aβ处理组、腺病毒阴性感染组和腺病毒Hsp75过表达感染组。使用荧光显微镜观察腺病毒的感染情况并进行细胞免疫鉴定;倒置相差显微镜观察各组神经干细胞的形态;MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测Hsp75和活化型caspase-3蛋白水平。结果:荧光显微镜观察和Western blot检测表明腺病毒成功感染神经干细胞并高效表达Hsp75蛋白。此外,腺病毒感染不会导致细胞形态改变及细胞分化,同时也不会影响细胞活力。与对照组比较,Aβ处理组及腺病毒阴性感染组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率及活化型caspase-3蛋白水平显著增高(P<0.05);然而,Hsp75过表达能显著提高神经干细胞的存活率,减少细胞凋亡和降低活化型caspase-3蛋白水平(P<0.05)。结论:Hsp75过表达对Aβ诱导损伤的C17.2细胞具有明显保护作用,其机制可能是与抑制caspase-3途径依赖的细胞凋亡有关。
关键词
热休克蛋白75
C17.2神经干细胞
细胞凋亡
Keywords
Heat shock protein 75
C17.2 neural stem cells
Apoptosis
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
人HSP75基因重组腺病毒载体构建及在C17.2神经干细胞的表达
2
作者
王艳
陈庆状
蒋德旗
李明星
贾思远
朱宁
王勇
机构
南方医
科
大学珠江
医院
药剂
科
广州市中西医结合医院药剂科
南方医
科
大学珠江
医院
烧伤
科
南海区第三人民
医院
药剂
科
出处
《中国康复理论与实践》
CSCD
北大核心
2015年第3期264-268,共5页
基金
国家自然科学基金项目(No.30973162)
广东省自然科学基金项目(No.S2012010008199
No.S2013010015546)
文摘
目的构建HSP75基因重组腺病毒载体,观察HSP75蛋白在C17.2神经干细胞中的表达。方法采用PCR方法从含人HSP75基因质粒中扩增HSP75基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点区域,构建重组穿梭质粒p HBAd-MCM-HSP75-GFP,在LipofiterTM转染试剂的介导下与腺病毒辅助骨架质粒p HBAd-BHGloxΔE1,3 Cre共转染HEK293细胞,整合包装成重组腺病毒,TCID50法测定病毒滴度。使用荧光显微镜、流式细胞仪和Western blotting观察重组腺病毒在C17.2细胞中的感染情况及HSP75蛋白的表达水平。结果通过酶切鉴定、测序、PCR鉴定,HSP75基因已正确插入穿梭质粒中,并与病毒骨架质粒整合包装成重组腺病毒;重组腺病毒滴度为1.0×1010PFU/ml;Western blotting检测,转染后的神经干细胞表达HSP75蛋白。结论 HSP75重组腺病毒载体成功构建,对C17.2神经干细胞具有较高的表达效力。
关键词
热休克蛋白75
重组腺病毒载体
C17.2神经干细胞
Keywords
heat shock protein 75
recombinant adenovirus vector
C17.2 neural stem cells
分类号
R741 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
神经干细胞过表达Hsp75降低Aβ介导的神经毒性
王艳
林继宗
陈庆状
贾思远
马艳姣
王勇
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人HSP75基因重组腺病毒载体构建及在C17.2神经干细胞的表达
王艳
陈庆状
蒋德旗
李明星
贾思远
朱宁
王勇
《中国康复理论与实践》
CSCD
北大核心
2015
0
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已选择
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